突变特异性扩增系统方法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因C1024T及G392T

突变特异性扩增系统 (Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ ,ＡＲＭＳ)法是用来检测葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (Ｇ6ＰＤ)基因已知点突变的简便、快速、准确的方法[1 ,2 ] 。杜传书等发现的中国人中的 6种点突变中 ,占比例较高的Ｇ1388Ａ ( 2 7.8%)、Ｇ1376Ｔ( 2 5 .0 %) [3 ] 及Ａ95Ｇ[4] 的ＡＲＭＳ方法已经建立[1 ,2 ] ,而占比例较低的Ｃ10 2 4Ｔ( 5 .6 %)的ＡＲＭＳ方法还未建立 ,Ｇ392Ｔ( 8.3%)的ＡＲＭＳ方法虽已建立 ,但未经测序证实。我们建立了这两种方法 ,并经测序证实 ,现报道如下。病例和方法1　病…     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因G487A突变型研究

目的　鉴定中国白族和傣族人群中的葡萄糖６磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）Ｇ４８７Ａ 基因突变型,为少数民族Ｇ６ＰＤ缺乏症的防治提供理论指导;为研究分子进化、民族起源及迁移提供遗传学资料。方法　对云南白族、傣族、汉族及广西汉族的Ｇ６ＰＤ缺乏症患者进行聚合酶链反应限制性内切酶分析（ＰＣＲＲＥ） ,聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ） 及ＤＮＡ序列分析。结果　首次在白族及傣族人群中发现Ｇ６ＰＤＧ４８７Ａ基因突变型。６６ 例白族患者中发现６ 例,５２ 例傣族患者中发现１ 例Ｇ４８７Ａ 突变;检查４６ 例广西汉族患者未发现该突变。Ｇ６ＰＤＧ４８７Ａ基因突变型的个体在无诱因作用时,其血红蛋白含量、红细胞计数及网织红细胞计数基本正常。结论　Ｇ６ＰＤＧ４８７Ａ 基因突变型多属Ｇ６ＰＤ 缺乏症临床Ⅲ型;该突变型是汉族、白族和傣族共同具有的基因突变型。提示：中华民族可能同源     

G6PD缺乏患者红细胞膜ATP酶活性研究

本文采用低渗溶血,高速旋离沉淀法制得人红细胞膜制剂,再利用酶学比色法测定了11例正常人和11例G6PD缺乏者红细胞膜Na~ -K~ ATP酶及Ca~(2 )-Mg~(2 )ATP酶活性。结果发现G6PD缺乏时红胞细膜Ca~(2 )-Mg~(2 ) ATP酶及Na~ -K~ ATP酶活性均有不同程度的降低。哇巴因抑制率下降49.4%。这些异常可能导致患者红细胞膜结构及红细胞的生理功能受损。     

甲型血友病基因诊断及产前诊断的研究进展

甲型血友病是最常见的遗传性出血性疾病,受到了国内外研究者们的极大关注.由于此病尚无彻底根治方法,所以基因诊断及产前诊断显得尤为重要.基因诊断可分为直接基因诊断及间接连锁分析的方法;产前诊断的手段也在近年飞速发展.本文就直接基因诊断、间接连锁分析及产前诊断新技术这几方面的研究进展综述如下.     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA1311C→T复合11内含子93T→C突变

目的　探讨葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)基因cDNA1311C→T复合 11内含子 93T→C的突变与G6PD缺乏的关系。方法　运用硝基四氮唑蓝纸片法筛查G6PD患者 ,以定量法确诊 ,运用PCR SSCP筛查 11外显子异常的标本 ,以突变特异性扩增系统 (ARMS)法鉴定 1311C→T突变 ,DNA直接测序 1311突变标本的 11外显子和 11内含子。结果　在 12例 1311突变的标本中 ,在 11内含子的93位均发现有T→C突变。结论　cDNA1311C→T突变同时合并 11内含子的 93位T→C突变可能是G6PD缺乏患者酶活性降低的原因     

反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的应用反向点杂交法(RDB)对样本进行β-地中海贫血基因诊断,评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1294例疑似地中海贫血病例(材料包括外周血、羊水和脐带血)进行β-地贫基因诊断,并对其中10例进行测序;对其中890例与血液学试验指标进行比较。结果用RDB方法,1294例样品中有558例β地中海贫血。在558例基因诊断阳性病例中共发现了21种突变,涉及到14个突变位点。前6位的突变位点从高到低依次排列为CD41-42(41.2%)、IVS-2-654(25.6%)、TATAbox-28(13.8%)、CD17(7.2%)、CD26(2.0%),CD71-72(1.4%)。与RDB比较,将临界值定为MCV≤80fL或MCH≤26Pg,脆性≤60%,HbA2﹥3.8%,则敏感度分别为98.49%,89.17%,95.47%;特异性为68.97%,72.82%,77.08%。结论与血液学方法比较,RDB具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶eDNA1311C→T复合11内含子93T→C突变

目的 探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因eDNA1311C→T复合11内含子93T→C的突变与G6PD缺乏的关系。方法 运用硝基四氮唑蓝纸片法筛查G6PD患，以定量法确诊，运用PCR-SSCP筛查11外显子异常的标本，以突变特异性扩增系统(ARMS)法鉴定1311C→T突变，DNA直接测序1311突变标本的11外显子和11内含子。结果 在12例1311突变的标本中，在11内含子的93位均发现有T→C突变。结论 eDNA1311C→T突变同时合并11内含子的93位T→C突变可能是G6PD缺乏患酶活性降低的原因。     

一罕见成骨不全Ⅳ型的基因诊断

目的对一疑似成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿实施基因诊断,以揭示患儿发病及频繁骨折的内在原因,为今后实施对症治疗和产前基因诊断创造必要的前提条件。方法对经症状、体征观察和X线检查初诊为成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿,在抽取外周血制备DNA模板后,采用PCR、DNA直接测序法,对患儿的COL1A1基因进行突变检测,然后对所发现的突变进行分析和鉴定。结果在COL1A1基因的编码区内发现一典型的错义突变(c.823G>C1/p.G275R),经查HGMD数据库证实为成骨不全Ⅳ型的致病性突变。结论先证者为一罕见的成骨不全Ⅳ型患儿,所发现的p.G275R突变为中国人群首次报道的病理性突变。