人骨形成蛋白4基因修饰的兔骨髓基质细胞异位成骨试验

目的:通过人骨形成蛋白4(bonemorphogeneticprotein,BMP4)基因修饰的兔骨髓基质细胞(bonemarrowStromalcells,bMSCs)与天然型无机骨(naturalnon鄄organicbone,NNB)支架复合,进行自体皮下异位成骨试验,探索BMP4基因治疗与组织工程技术相结合的可行性。方法:贴壁法培养兔bMSCs,体外应用脂质体介导转染pEGFP鄄hBMP4及pEGFP真核表达质粒。将转染基因的细胞和未转染基因的对照组细胞,分别以5×107/ml的浓度,与NNB支架复合,构建组织工程化骨,植入6只新西兰兔自体皮下,每组6例,4周后取材,组织学观察,并进行新骨成骨面积分析。结果:空白对照NNB孔隙内无新骨形成,转染pEGFP基因组及对照细胞组,支架网孔内均有新生骨及软骨样组织形成,而pEGFP鄄hBMP4实验组形成的新生骨及软骨样组织面积更大(P<0.05)。结论:应用hBMP4基因修饰的bMSCs作为骨组织工程的种子细胞,可望取得更强的成骨能力。     

含锶锌黄长石涂层钛表面促进骨髓间充质干细胞成骨分化的初步研究

目的钛合金表面制备新型含锶锌黄长石（Sr-Ca₂ZnSi₂O₇,Sr-HT）涂层,初步评估其对骨髓间充质干细胞（BMMSCs）成骨分化等生物学行为的调控能力,用于指导新型种植体设计以促进骨结合效果。方法采用等离子喷涂法对钛合金表面进行Sr-HT涂层修饰,分别以锌黄长石（Ca₂ZnSi₂O₂,HT）以及羟磷灰石（HAp）涂层钛表面作为对照。扫描电镜观察涂层的表面结构,并使用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）检测表面涂层的离子释放情况。原代培养犬骨髓间充质干细胞（BMMSCs）并接种于材料表面,用免疫荧光法观察细胞在三种涂层表面的粘附铺展情况,ALP半定量检测和OCN蛋白表达免疫荧光法观察细胞在三种涂层表面的成骨分化情况。结果扫描电镜下观察,三种涂层表面均为凸凹不平的微米尺度结构,与HAp涂层相比,Sr-HT和HT组浸提液中含有锌离子,Sr-HT涂层还能够释放大量锶离子。BMMSCs在Sr-HT和HT涂层表面粘附能力、ALP活性和OCN蛋白表达均显著高于HAp对照组,其中Sr-HT组更明显。结论与传统HAp涂层相比,新型Sr-HT涂层可促进BMMSCs的粘附和成骨分化,其促进成骨分化的作用与Zn和Sr离子释放有关。     

口腔医学博士研究生学制的发展、比较与思考

中国口腔医学教育发展至今形成了多学制、多学位并存的格局,以培养高层次人才博士学位为例,共有八年一贯制、本科毕业生直接攻博、硕博连读和三年制普通博士研究生4种类型。梳理并总结了中国口腔医学学制、学位的过去与现在,对博士教育的不同培养模式及培养成果进行了比较与分析。为进一步完善中国口腔医学的博士学位培养方案,提出遵循人才培养规律、完善教育反馈机制、深化医教协同改革的建议,以期为中国口腔医学的未来发展培养更多优秀人才。     

afgf和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

基于间充质干细胞膜的药物投递系统研究进展

传统药物载体在体内投递过程中,常出现全身用药靶向性弱、载体的稳定性差和生物相容性低等问题.细胞膜作为细胞信息传递与行为调控的重要组成部分,可作为药物的包覆材料.间充质干细胞膜载体作为新兴的载体,具有主动靶向性、免疫调节性、膜表面修饰性等特点,在肿瘤治疗和组织再生等领域具备广泛的应用潜力.本文总结了间充质干细胞膜载体的特性以及应用现状,为未来的膜载体设计和临床应用提供指导.     

实时定量PCR检测Nel样Ⅰ型分子基因对大鼠骨髓基质细胞成骨相关基因表达的影响

目的：研究Nel—like 1型分子（Nell-1）基因对体外培养大鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,bMSCs）成骨相关基因表达的影响。方法：取6周龄雄性Fischer 344大鼠胫骨和股骨骨髓体外培养。以腺病毒为载体。进行基因转染，绘制生长曲线并测定转染效率。以转染β-半乳糖苷酶（β—Galactosidase，LacZ）基因的bMSCs为对照组，转染Nell-1的bMSCs为试验组，用实时定量PCR（real—timePCR）测定成骨相关基因碱性磷酸酶基因（alkaline phosphatase，ALP）、骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP）、骨钙素（osteocalcin，OC）、骨桥蛋白（osteopontin，OP）和Sox9的表达。以2^-△△CT法计算基因表达的相对比值。结果：随着Nell-1基因转染滴度的增高。细胞增殖速度减慢。基因转染效率随滴度增加而增高。Nell-1基因转染大鼠bMSCs．早期下调、中期和晚期上调ALP的表达。晚期上调OC的表达,整个成骨周期中均上调OP和BSP的表达。结论：Nell-1基因可能通过影响各成骨相关基因的表达而促进大鼠bMSCs的成骨分化。     

纳米级支架材料在骨组织工程中的应用

骨组织工程研究领域中，支架材料与细胞的相互作用是主要的研究课题。支架材料表面的微观结构对细胞的生物调控作用非常重要。纳米材料因具有一些独特的效应，有利于细胞的黏附、增殖和功能的增强，因而作为骨组织工程支架有着良好的应用前景。目前用于骨组织工程的纳米支架材料主要有纳米复合材料和纳米纤维材料。作者就纳米支架材料与细胞作用的机制以及近年来其在骨组织工程中的应用研究现状作一综述。     

Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用

目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1 向成骨方向分化的影响.方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证.体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达.应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响.以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析.结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确.体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组.在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深.Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05).结论:Dlx2过表达上调AIP、OCN等成骨相关基因的表达.促进MC3T3-E1细胞的成骨分化.     

犬骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外诱导分化为成骨细胞的方法和活性检测。方法:抽取犬骨髓3 mL,使用成骨条件培养液,贴壁法体外培养,将培养的第2、3代细胞进行透射电镜、流式细胞仪、生长曲线、碱性磷酸酶、Von Kossa和免疫组化等检测。结果:第2代细胞碱性磷酸酶染色呈阳性表达;第3代细胞Von Kossa染色、骨桥素、骨涎蛋白和骨钙蛋白呈阳性表达;第3代细胞透射电镜显示高尔基体和线粒体丰富;流式细胞仪检测显示第3代处于S期的细胞比例较第2代增加。结论:犬骨髓基质细胞在体外能定向诱导分化为成骨细胞。     

釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞黏附、伸展及增殖的影响

目的：研究釉基质蛋白（enamel matrix proteins,EMPs）对体外培养的猪骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）黏附、伸展和增殖活性的影响。方法：抽取猪髂骨骨髓．全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200μg／ml,以不加EMPs为对照。用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs黏附的影响。通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在培养1h、3．5h、6、5h后的伸展率。MTT法测定各组细胞的增殖活性。对实验数据行单因素方差分析和SNK法组间比较。结果：猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好。对照组以及不同浓度EMPs实验组对细胞黏附的影响无统计学差异。在1h、3．5h、6．5h．各组细胞的伸展率无显著不同。EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性．200μg／ml浓度的EMPs从实验的第3天开始．显著促进猪BMSCs的增殖。结论：EMPs对体外培养的猪BMSCs的黏附和伸展无显著影响．200μg／ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,为联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损提供了理论依据。