pET15b-EGFP原核表达载体的构建及其表达和纯化

目的:利用中间载体pGEM-T easy vector构建表达型载体pET15b-EGFP,在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白EGFP并将其纯化。方法:以质粒pLEGFP-C1为模板采用聚合酶链反应(PCR)的方法特异性扩增EGFP cD-NA序列,利用Taq DNA聚合酶的非模板依赖性末端转移酶活性催化PCR扩增的EGFP序列和三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,在EGFP序列两3’端加“A”,将纯化后的EGFP序列与中间载体pGEM-T easy vector连接后转化感受态大肠杆菌DH5α,经蓝白筛选,挑取白色单菌落进行扩增、酶切鉴定,正确重组的质粒命名为pGEM-T-EGFP。用XhoI和BamH I分别双酶切pGEM-T-EGFP和pET15b,低熔点琼脂糖回收EGFP cDNA和线性化的pET15b片段后将两片段相连,转化感受态大肠杆菌DH5α并对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序,获取正确重组的表达型质粒并命名为pET15b-EGFP。将正确重组的质粒pET15b?EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(H is-tag)进行N i2+-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE和W estern b lotting鉴定纯化蛋白质。结果:经测序证实重组质粒pET15b-EGFP中的EGFP cDNA序列与从C lontech公司购买的质粒pLEGFP-C1中的EGFP cDNA序列完全一致,从而成功构建了表达型重组质粒pET15b-EGFP。pET15b-EGFP转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)并经诱导后得到高效表达,表达量可达66 mg/100 m l菌液,SDS-PAGE和W estern b lotting显示纯化蛋白为目的蛋白EGFP。结论:表达型重组质粒pET15b-EGFP的成功构建和表达、纯化为细胞穿透肽-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。     

围术期耳穴贴压护理对腹腔镜胆囊切除术后疼痛的影响

目的 观察围术期耳穴贴压护理对腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystetomy,LC)患者术后疼痛的影响.方法 将80例在外科行LC的患者随机分为耳穴贴压护理干预组(耳贴组)和对照组各40例,比较两组患者的术后疼痛评分、平均住院日、止痛药的使用及术后并发症发生情况.结果 围术期耳穴贴压能减少和降低LC术后疼痛时间和程度,并能减少平均住院日、止痛药的使用和术后疼痛并发症的发生(P均＜0.01).结论 耳穴贴压护理对LC术后疼痛疗效确切,且无不良反应和成瘾性,操作简便,具有良好的应用前景.     

潍坊市1～6岁儿童厌食症发病的相关因素探讨

目的了解潍坊市1—6岁儿童厌食症形成的原因,为制定儿童饮食行为干预措施提供科学依据。方法选取2009年12月至2013年12月期间在潍坊市益都中心医院及青州市中医院就诊的1—6岁厌食症儿童,对其抚养人进行喂养情况的问卷调查,并对问卷结果进行分析。结果断乳时间过晚、过多零食、强迫进食、贪玩为儿童厌食症发病关系密切的高危因素（OR值分别为1．446、1．328、1．422和1．369,均P〈0．05）。结论防治厌食症应注意优化家庭养育环境,按时断乳,平衡日常饮食,养成良好饮食习惯,并针对儿童喂养做好宣传教育,指导家长科学喂养,以促进儿童健康。     

腹水中可溶性CD44v6和腺苷腹氨酶检测及意义

目的探讨可溶性CD44v6(sCD44v6)及腺苷腹氨酶(ADA)对良、恶性腹水的诊断价值。方法取肝硬化腹水20份、结核性腹水38份、恶性腹水30份,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)及酶速率法检测腹水sCD44v6及ADA水平。结果恶性腹水组sCD44v6水平为(102±30)ng/ml,明显高于良性腹水组(51±14)ng/ml(P<0.01)。肝硬化腹水组sCD44v6水平(55±12)ng/ml及结核腹水组cCD44v6水平(42±16)ng/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。结核性腹水组ADA水平为(54±21)U/L,明显高于恶性性腹水组(21±12)U/L(P<0.01)。以0.5ng/ml为阳性界值,sCD44v6诊断恶性腹水的敏感性为83.3%、特异性为89.5%;以45U/L为阳性界值,ADA诊断结核性腹水的敏感性为86.8%、特异性为93.3%。结论sCD44v6和ADA对于良、恶性腹水的鉴别诊断有重要价值。     

客观结构化临床考试在妇产科学专业学位研究生培养中的应用

目的　针对妇产科学专业学位研究生设计与开展客观结构化临床考试（objective structured clinical examination,OSCE）,并通过分析研究生在OSCE中的表现,探索妇产科学专业学位研究生教学工作的改进措施。方法　2017年10月采用OSCE形式考核2016级、2017级妇产科学专业学位硕士研究生的临床能力。该OSCE中设置标准化病人问诊、专科基本操作、辅助检查利用和结果判读及病例分析共4个站点;评分标准包括医患沟通能力、问诊内容完整性、专科基本操作技能、辅助检查利用度、临床思维水平以及知识掌握情况共6个条目。采用SPSS 18.0进行统计分析,组间比较采用t检验。结果　总计27名研究生参加OSCE。6个评分条目中,问诊内容完整性条目得分最低[（78±6）分],辅助检查利用度条目得分最高[（85±3）分]。25.9%（7/27）的研究生在医患沟通技巧方面存在明显不足,22.2%（6/27）的研究生在专科基本操作站点暴露了明显的问题,22.2%（6/27）的研究生缺乏科学的临床诊断思维方法。结论　在妇产科学专业学位硕士研究生教育中,应注重培养研究生的医患沟通能力和临床思维方法,并加强其临床基本技能培训。     

阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的长期疗效

目的观察应用阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎重度患者的长期疗效,并探讨对重型肝炎及肝炎后肝纤维化发展的阻断作用。方法将164例慢性乙型肝炎重度患者随机分为对照组82例(常规治疗组),治疗组82例(在常规治疗基础上加用阿德福韦酯。结果在治疗组中,23.2%(19/82)的患者发展至慢性重型肝炎,显著低于对照组46.3%(38/82)(P<0.01,对照组52.6%(20/38)的慢性重型肝炎患者死亡,而在治疗组,仅26.3%(5/19)的患者死亡(P<0.01.两组患者肝性脑病、感染、出血、肾病等并发症发生率差异有统计学意义(P<0.05.治疗组患者肝纤维化、肝功能指标及乙型肝炎e抗原转阴率、乙型肝炎e抗原/抗-Hbe转换率明显优于对照组,乙型肝炎病毒DNA持续保持阴性水平。结论阿德福韦酯的长期疗效是可靠、稳定的,对重型肝炎及肝炎后肝纤维化发展有阻断作用.     

WISP2基因rs2281862位点C>T多态性与胃癌预后的关系

目的探讨中国江苏省宜兴地区汉族人群中Wnt-1诱导分泌蛋白2(WISP2)基因rs2281862位点C>T多态性与胃癌预后的关系。方法应用TaqMan探针的RT-PCR法检测952例胃癌患者的基因型,分析不同基因型与胃癌预后的关系。结果与WISP2基因rs2281862位点CC基因型相比,合并突变基因型TC和TT与胃癌的预后无显著相关性(P>0.05)。Lauren分型与胃癌患者的预后相关:与合并基因型CC和TC相比,在肠型胃癌患者中,TT型患者的预后危险性下降(P<0.05),而在弥漫型胃癌患者中,TT型患者的预后危险性增加(P<0.05)。结论中国江苏省宜兴地区汉族人群WISP2基因rs2281862位点与胃癌预后无关;TT基因型是肠型胃癌患者的保护性因素,但也是弥漫型胃癌患者的危险性因素。     

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌NF—κB表达的影响

目的观察丹参酮ⅡA（TanshinoneIIA,TanⅡA）对压力负荷增加大鼠心肌组织核因子-κB（NF-κB）表达的影响,并探讨其对心肌纤维化的保护作用。方法采用腹主动脉缩窄术制备压力负荷心肌纤维化模型,术后存活32只大鼠随机分成4组（n=8）,假手术组、模型组、TanⅡA组（20mg·kg-1·d-1）及阳性对照药物卡托普利纽（100mg·k-1·d-1）。术后4周成功造模并开始给药,疗程为4周。8周后检测左心室重量指数、心肌组织病理学、心肌羟脯氨酸含量以及心肌组织NF—KBp65蛋白含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠心室治疗指数和左心室质量指数明显升高（P〈0．01）;与模型组比较,TanⅡA则显著降低（P〈0．01）。与假手术组比较。模型组大鼠心肌羟脯氨酸含量明显升高（P〈0．01）;与模型组比较,TanⅡA组则显著降低（P〈0．01）。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织NF-KBp65表达显著升高（P〈0．01）;与模型组比较,TanIIA组则显著降低（P〈0．01）。结论TanⅡA能抑制心肌肥厚,减轻心肌纤维化,此作用可能与部分下调NF-KB表达有关。     

鲜鱼腥草的黄酮类化合物研究

目的：研究三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata的黄酮类化学成分。方法：利用Diaion HP-20,Sephadex LH-20,ODS和硅胶柱色谱进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果：分离得到5个化合物,分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(1),山柰酚-3-O-β-D-［α-L-吡喃鼠李糖(1→6)］吡喃葡萄糖苷(2),槲皮苷(3),金丝桃苷(4),槲皮素-3-O-α-D-鼠李糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(5)。结论：化合物1,2,5为首次从该属及本植物中分离得到。     

RP-HPLC法测定散瘀膏中黄芩苷的含量

目的:建立散瘀膏中黄芩苷的含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。色谱柱:ZorbaxEclipseSB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.25);检测波长:280nm;流速:1.0ml.min-1;柱温:25℃。结果:黄芩苷在58～580ng范围内线性关系良好,回归方程为Y=2.764×103X-3.450×103(r=0.9995),平均加样回收率为99.4%,RSD=1.70%(n=6)。结论:本方法操作简便、准确快速,可用于散瘀膏的质量控制。