转移表型抑制的小鼠肺癌细胞中人源性DNA的克隆鉴定

转移表型抑制的小鼠肺癌细胞中人源性ＤＮＡ的克隆鉴定葛学铭陆应麟付生法陈坤范文红刘爽为寻找新的人类肿瘤转移抑制基因或负调控序列，我们利用培养细胞负选择法［１］和ＤＮＡ转染技术将人正常基因组ＤＮＡ导入自行建株的小鼠高转移肺癌细胞株ＬＭ２中，并筛选出转移表...     

热环境中大鼠脑、肺损伤与米帕林的保护作用

背景高温环境对生物体造成明显损伤,深入研究热环境损伤的机制、提高机体耐热损伤的能力,可为抗热环境药物研究提供参考.目的观察预先使用米帕林,对热环境中大鼠损伤的作用,探讨急性热环境致机体脑、肺损伤作用和可能的保护措施.设计完全随机设计,对照实验研究.地点和材料地点为军事医学科学院研究所.材料为二级Wistar大鼠,雄性,体质量160～200 g,由军事医学科学院实验动物中心提供,饲喂专用,饮用自来水.方法将大鼠随机分组,根据体质量灌胃给予不同剂量的米帕林,对照组给予相当体积的生理盐水,1 h后进入41℃热环境.主要观察指标检测大鼠体温变化和死亡时间,分析药物剂量与体温变化、存活时间的关系.对死亡大鼠进行主要脏器的病理分析,寻找热环境对机体损伤的主要靶器官.结果41℃热环境明显影响大鼠的代谢和存活,进入热环境的大鼠体温经过短暂维持后迅速上升,大约在38 min后死亡,死亡大鼠解剖发现肺明显出血和脑水肿,病理切片观察发现肺细胞和大脑神经元死亡明显;预先灌胃给予4.5～18.0 mg/kg米帕林能够明显减缓大鼠在热环境下体温升高的速率,增加大鼠在热环境中的存活时间.9.0 mg/kg剂量组体温上升速率减缓20%左右,存活时间延长超过50%.9.0 mg/kg剂量组大鼠在进入热环境38 min左右处死后,解剖发现轻微肺出血和脑水肿,损伤明显轻于对照组.结论米帕林灌胃能够增强大鼠抗热致死的能力,具有保护热环境损伤的作用.     

中枢和外周神经损伤后神经元胞体基因表达的差异

目的：探讨中枢和外周神经损伤后再生差异的分子机制。方法：实验选用清洁级Wistar雄性大鼠10只，随机将其分为中枢神经损伤和外周神经损伤两组，每组5只。制作脊髓半横断损伤和坐骨神经夹伤动物模型，以自身未损伤侧作为对照。根据脊髓损伤和坐骨神经夹伤基因表达谱分析的结果，选择部分表达变化的基因；用相对定量RT-PCR的方法检测其在坐骨神经夹伤与脊髓半横断损伤后相应神经元胞体分布区神经组织的表达水平，分析其在不同再生类型神经损伤后表达的变化规律。结果：坐骨神经夹伤7d大鼠损伤侧FRAG1，NCAM，PCNA，bcl-2基因表达与对照侧比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)；脊髓半横断损伤7d大鼠损伤侧FRAG1，bcl-x，14．3-3PGs基因表达与对照侧比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)。结论：中枢和外周神经损伤后，相应的神经元胞体基因表达存在差异，这可能是中枢和外周神经再生差异的分子机制之一。     

成年大鼠同源盒基因Lhx4在外周和中枢神经损伤后的修复作用

目的:揭示作为发育基因之一的LIM同源盒基因是否参与调控成年动物神经损伤修复过程。方法利用坐骨神经夹伤的外周神经损伤模型,采用RT-PCR结合HPLC方法,比较分析外周和中枢神经损伤后Lhx4同源盒基因的表达变化规律。结果成年大鼠在外周和中枢神经损伤后Lhx4的mRNA表达量均有改变,坐骨神经夹伤3,7d后,损伤侧脊髓运动神经元中Lhx4mRNA表达量比对照侧明显增高;而脊髓半横断后损伤对侧的大脑皮层运动区中Lhx4mRNA的表达量即刻便发生改变,较对照侧有明显增高,且在脊髓损伤14d时仍可被检测。结论LIM同源盒基因家族中的Lhx4基因可能与成年动物外周和中枢运动神经元的损伤修复有关。     

热环境对神经元脂肪酸水平的影响

目的：建立一种快速简便测定神经元中游离的花生四烯酸的方法，分析培养的神经元在热处理前后细胞和细胞膜中花生四烯酸的水平变化，为探讨热环境对神经元损伤提供参考。方法：原代培养的成熟的大鼠纹状体神经元经过43℃处理1h，细胞裂解后提取细胞裂解液和细胞膜中的脂肪酸，加入C17：0作为内标，甲醇酯化后用气相色谱和质谱联用的方法，测定脂肪酸甲酯的水平。结果：在细胞中含量相对丰富的饱和脂肪酸(棕榈酸和硬脂酸)水平，以及不饱和脂肪酸(油酸、亚油酸和花生四烯酸)水平在热处理前后没有明显改变，而细胞质中花生四烯酸水平在热处理后明显升高(0．53&;#177;0．13比1．00&;#177;0．56，F=5．71，P&;lt;0．05)，升幅达到100％。同时在所分析的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸水平在在热处理前后没有显著差别，而细胞膜中花生四烯酸在热处理前后均检测不到。结论：热环境处理导致纹状体神经元更多的花生四烯酸释放，可能介导热对神经元的损伤。     

中枢和外周神经损伤后胞体区看家基因表达的变化

目的观察并比较几种常用的看家基因,包括β-actin,GAPDH,18s RNA,cyclophilin A等在中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织中表达的变化.方法Wistar雄性大鼠随机分为右侧坐骨神经夹伤,右侧坐骨神经结扎和胸段脊髓半横断三组.手术后7d,用相对定量RT-PCR的方法检测几种看家基因在受损神经元胞体分布区神经组织中的表达水平.结果GAPDH和Cyclophilin A的表达在不同模型中的变化幅度较小,损伤与对照侧比较差异均无显著性.β-actin和18sRNA的表达在不同模型中变化不同,在脊髓损伤和坐骨神经结扎后表达的变化有统计学意义.结论本研究结果为研究神经系统损伤后相关基因表达变化时内参照基因的选择提供参考,同时也为进一步认识看家基因更加广泛的功能提供依据.     

成年大鼠同源盒基因Lhx4在外周和中枢神经损伤

目的：揭示作为发育基因之一的LIM同源盒基因是否参与调控成年动物神经损伤修复过程。方法 利用坐骨神经夹伤的外周神经损伤模型，采用RT－PCR结合HPLC方法，比较分析外周和中枢神经损伤后Lhx4同源盒基因的表达变化规律。结果 成年大鼠在外周和中枢神经损伤后Lhx4的mRNA表达量均有改变，坐骨神经夹伤3，7d后，损伤侧脊髓运动神经元Lhx4mRNA表达量比对照侧明显增高；而脊髓半横断后损伤对侧的大脑皮层运动区中Lhx4mRNA的表达量即刻便发生改变，较对照侧有明显增高，且在脊髓损伤14d时仍可被检测。结论 LIM同源盒基因家族中的Lhx4基因可能与成年动物外周和中枢运动神经元的损伤修复有关。     

大鼠中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织基因表达谱的分析

目的分析中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织多基因表达谱的差异,探讨中枢和外周神经轴突损伤后再生差异的分子机制.方法12只Wistar雄性大鼠随机分为右侧坐骨神经夹伤和胸段脊髓半横断两组.手术后7d,用cDNA Microarray技术检测1176个已知基因在与受损神经相应胞体分布区神经组织表达的变化,并分析其在中枢和外周神经损伤后表达的差异.结果cDNA Microarray分析的数据显示,有74个基因在外周和中枢神经损伤后同时变化,其中29个基因变化趋势一致,12个基因表达上调,17个基因表达下调.呈反向变化的基因有45个.结论中枢和外周神经轴突损伤后,多种结构、功能基因表达发生变化;外周和中枢神经损伤后多种结构、功能基因表达存在明显的差异.     

A novel human DNA sequence with tumor metastasis suppressive activity

　Objective To isolate human tumor metastasis suppressive DNA sequence and to study the molecular mechanisms regulating tumor metastasis. Methods A mouse lung adenocarcinoma cell clone 12 derived from its parent cell line LM2, which had been transduced with normal human genomic DNA, was previously reported. Compared with LM2, the metastatic potential of clone 12 was very much decreased. Clone 12 was used in this study to amplify the human DNA fragments by Inter Alu PCR technique. The human DNA fragments obtained were then transfected into LM2 cells and their malignant phenotype was tested in vitro and in vivo, and compared with that of the untransfected LM2 cells. Results Three human DNA fragments of 700, 500 and 300 bp were isolated. DNA sequencing revealed that the 700bp fragment does not show homology with hitherto reported genes and was accepted by the Genbank (pt712 U67835). In vitro proliferation and colony formation in soft agar of the 700 bp fragment-transfected LM2 cells were significantly inhibited as compared to the untransfected LM2 cells. Upon subcutaneous inoculation to syngeneic T739 mice, the 700bp–transfected LM2 cells grew more slowly and smaller tumors developed compared to the untransfected ones. Moreover, lung metastasis was not found in 6 of 10 mice inoculated with the 700bp-transfected LM2 cells, while it was found in 9 of 10 mice inoculated with the untransfected LM2 cells. The difference was statistically significant (P<0.001). The frequency of lymph node metastasis was also statistically different between the 2 groups of mice. Conclusion The newly isolated 700bp human DNA fragment may be a metastasis suppressor gene of malignant tumor.     

细胞膜电位的动态监测及其在银杏内酯研究中的应用

建立了一种简便、快速的膜电位的测量方法.采用亲脂性阴离子荧光探针DiBAC4(3)标记大鼠脑神经元细胞,以倒置荧光显微镜观察并记录细胞膜电位的变化.用所建方法研究了银杏总内酯,及银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对大鼠脑神经元细胞膜电位的影响.结果显示,加入银杏总内酯及各种银杏内酯后细胞出现去极化,膜电位迅速改变,随后回复至正常水平,银杏总内酯对细胞膜电位的影响大于各单体,其中以银杏内酯B的作用为主.