多西他赛抑制胃癌MKN45细胞增殖的研究

目的: 探讨多西他赛治疗胃癌细胞的作用机制.方法: 采用不同浓度的多西他赛处理胃癌MKN45细胞后,四唑盐比色试验检测癌细胞生长,分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡,采用荧光实时定量PCR和Western blot检测存活素(survivin)基因mRNA、蛋白表达情况.结果: 多西他赛抑制胃癌MKN45细胞的恶性增殖,且呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳和TUNEL显示,多西他赛处理组出现凋亡现象,且呈浓度依赖性.多西他赛处理组存活素基因mRNA、蛋白表达下调,且呈时间和浓度依赖性.结论: 多西他赛体外能抑制胃癌细胞的恶性增殖,与诱导凋亡,下调存活素基因表达有关.     

替吉奥联合紫杉醇脂质体与替吉奥联合紫杉醇在晚期胃癌化疗中疗效及不良反应观察

目的:观察采用替吉奥联合紫杉醇与替吉奥联合紫杉醇脂质体联合方案在晚期胃癌化疗中疗效及不良反应的对比观察。方法:选择晚期胃癌患者40例,分为采用替吉奥联合紫杉醇脂质体方案的治疗组与采用替吉奥联合紫杉醇的对照组。3周为1个周期,至少完成2个周期,按RECIST1.1标准评价客观疗效,按NCI CTC3.0毒性评价标准不良反应。结果:所有患者均可评价疗效,无治疗相关性死亡事件发生,两组治疗有效率差异无统计学意义(P>0.05)。消化道反应、血液学毒性、过敏、外周神经毒性、肝肾功能损害等不良反应差异无统计学意义(P>0.05),但是对照组患者的脱发、肌肉及关节痛的发病率明显高于治疗组患者(P<0.05)。结论:替吉奥联合紫杉醇脂质体与替吉奥联合普通紫杉醇治疗晚期胃癌均取得了满意的临床疗效,两种治疗方案效果差异无统计学意义(P>0.05),但前者能够降低患者不良反应发病率,减轻化疗反应。     

特异性siRNA沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞侵袭的影响.方法 根据TDGF-1基因序列特点设计3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后,转染人乳腺癌MDA-MB-468细胞,用荧光实时定量RT-PCR筛选出效果最好的siRNA.以该siRNA转染处理乳腺癌MDA-MB-468细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和western blot检测TDGF-1基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力.结果 根据TDGF-1基因序列特点设计的3个siRNA均能抑制TDGF-1基因mRNA水平,以S1效果最好.S1 siRNA转染组TDGF-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P＜0.001,P＜0.001).体外试验发现,TDGF-1 siRNA转染可有效抑制乳腺癌细胞集落生长、侵袭和迁移能力,且与浓度相关(P＜0.005,P＜0.005,P＜0.005).结论 TDGF-1在乳腺癌细胞迁移、侵袭中起着重要的作用;采用TDGF-1 siRNA转染可抑制乳腺癌细胞侵袭.     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的探讨中期因子（midkine,MK）基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA—MB-231、MDA—MB-435、MDA—MB-468及ZR75—1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者。采用MK siRNA转染乳腺癌细胞株,分别以荧光实时定量RT—PCR和免疫荧光方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞粘附性,以Boyden小室方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,MK均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以MKsiRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞MK基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;siRNA转染组细胞粘附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降,均呈浓度依赖性（P〈0．01;P〈0．01）。结论MK基因在乳腺癌细胞粘附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞粘附和侵袭能力。     

RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

 目的 探讨polo-like kinase-1（PLK1）基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子（small interfering RNA,siRNA）,转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。 结果 所设计的5个siRNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4siRNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05,P＜0.05）。 结论 PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用,以PLK1 siRNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制

目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用.方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力.结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关.结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭.     

长链非编码RNA HULC在胃癌患者血清表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HULC在胃癌血清中的表达水平及临床意义。方法选择2012年1月至2014年12月江苏大学附属医院90例未予手术治疗和放化疗治疗的胃癌患者作为胃癌组,另选择90例健康志愿者作为对照组。提取两组人血清总RNA,应用实时PCR方法检测胃癌组和对照组LncRNA HULC在血清中的表达水平,分析表达差异及LncRNA HULC在胃癌组血清中表达水平与临床病理特征之间的关系。结果胃癌组患者血清中LncRNA HULC的表达明显高于对照组,同时LncRNA HULC的受试者工作特征曲线显示,血清中LncRNA HULC对胃癌诊断具有良好敏感性和特异性(曲线下面积0.81)。进一步分析发现,LncRNA HULC在胃癌血清中表达与肿瘤患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤直径大小、有无淋巴结转移及CEA表达不相关,差异无统计学意义(P0.05);而与TNM分期、远处转移相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论检测血清中LncRNA HULC有望协助胃癌的诊断。     

β-榄香烯对大鼠胃粘膜癌变过程bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性的影响

目的：探讨β－榄香烯对大鼠胃粘膜癌变发生、发展过程中bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性的影响。方法：采用甲基硝基亚硝基胍（MNNG）、10％、NaCl混合液加40％乙醇灌胃建立大鼠胃粘膜癌变模型，设立正常组、模型组及榄香烯组，榄香烯组在造模过程中采用β－榄香烯干预。30周后，分别采用原位杂交及端粒微孔板杂交法检测大鼠胃粘膜bcl-2基因mRNA表达及端粒酶活性。结果： 榄香烯组癌变发生率低于模型组。在大鼠胃粘膜癌变的发展过程中,bcl-2 基因mRNA表达与端粒酶活性呈递增趋势，且两者具有高度相关性。结论：下调bcl-2基因表达抑制端粒酶性，是β－榄香烯重要抗癌机制之一。     

柴枳朴槟汤对大鼠胃排空影响的实验研究

目的：观察柴枳朴槟汤对大鼠胃排空的影响，试从红细胞胆碱酯酶活性和血浆胃动素两方面探讨该方作用机制。方法：取大鼠随机分成对照组，中药组，西药组3组，进行胃排空试验及红细胞乙酰胆碱酯酶活性和血浆胃动素的检测。结果：柴枳朴槟汤和西药吗丁啉对大鼠胃排空的影响无差异。都优于对照组；中药组红细胞乙酰胆碱酯酶活性和血浆胃动素水平明显高于对照组。结论：柴枳朴槟汤具有促进大鼠胃运动功能的作用；该作用可能是通过胆碱能神经，刺激兴奋迷走神经从而促进胃动素释放而实现的。     

RNAi沉默Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的抑制

目的：研究Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的影响。方法:设计合成针对Cripto基因的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)，转染结肠癌LS-174T细胞。细胞分4组：空载对照组（对照组）和不同浓度（3.125、6.25和12.5 nmol/L）的siRNA组。分别于转染24、48、72 h后收集细胞，以实时定量PCR检测结肠癌细胞Cripto mRNA，分别采用Northern blotting和免疫荧光标记法检测癌细胞VEGF mRNA和蛋白表达。分别收集转染72 h的12.5 nmol/L组和对照组细胞，接种于裸鼠背部。30 d后处死裸鼠，收集裸鼠肿瘤组织，对组织VEGF进行免疫组化染色，计算染色平均强度。结果:实时定量PCR检测显示，转染组Cripto mRNA被有效地抑制，且呈浓度和时间依赖性。转染组细胞VEGF 蛋白和mRNA明显低于对照组。裸鼠肿瘤免疫组化分析显示，转染组VEGF平均染色强度明显低于对照组。结论:Cripto基因参与了结肠癌组织血管生成的调控。采用siRNA下调Cripto基因表达，可抑制结肠癌组织血管生成。