RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对胰腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨polo-like kinase-1(PLK1)基因在胰腺癌细胞中的作用.方法:采用PLK1小干扰核糖核酸分子(small interfering RNA,siRNA)转染人胰腺癌Mi- aPaCa-2细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平,观察PLK1 siRNA转染对胰腺癌细胞体内外增殖的影响.于转染不同时间后收集细胞,分别采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测胰腺癌细胞凋亡情况.结果:胰腺癌MiaPaCa-2细胞经siRNA转染处理后,PLK1 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05).PLK1基因siRNA可明显抑制癌细胞体外生长(P<0.05)和体内裸鼠模型增殖(P<0.05).细胞凋亡检测发现,DNA电泳出现明显的梯度图谱,且与浓度相关(r=0.836,P<0.05).TUNEL结果显示,转染组癌细胞凋亡指数明显增加,且呈时间和浓度依赖性(r= 0.875,P<0.05).结论:PLK1 siRNA转染可明显抑制胰腺癌细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

特异性小干扰RNA下调中期因子基因表达对黑素瘤细胞黏附和侵袭的影响

目的 探讨中期因子（midkine, MK）基因小干扰RNA（siRNA）对黑素瘤细胞侵袭的影响。方法 根据MK基因mRNA序列特点,设计并用化学方法合成3个siRNA,转染人黑素瘤A375细胞后,以荧光实时定量PCR方法筛选出效果最好的siRNA,以此siRNA转染人黑素瘤A375细胞。同时设空白对照组（不予任何处理）和空载对照组（仅用脂质体转染）。分别以荧光实时定量PCR和Western印迹方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝法检测细胞黏附率,以Boyden小室模型方法检测细胞侵袭力。结果 所设计的siRNA均能有效下调MK基因mRNA表达水平,以S3号作用最强。以该siRNA转染A375细胞后,荧光实时定量PCR结果显示,转染组A375细胞MK基因mRNA水平明显下降,且呈浓度（24 h时r = -0.906;48 h时r = -0.922;72 h时r = -0.939,P均 < 0.01）和时间（3.125 nmol/L r = -0.889;6.25 nmol/L r = -0.935;12.5 nmol/L r = -0.928,P均 < 0.01）依赖性。细胞黏附试验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组黏附率分别为73.66% ± 2.25%、49.36% ± 2.16%和28.35% ± 1.68%,呈浓度依赖性下降（r = -0.936,P < 0.01）。Boyden小室试验结果显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组穿过滤膜的细胞数分别为23.9 ± 1.6、12.1 ± 1.5、5.6 ± 1.2,而空白对照组为36.8 ± 1.5,穿膜细胞数呈浓度依赖性下降（r = -0.915,P < 0.05）。结论 MK基因在黑素瘤细胞黏附、侵袭中发挥重要作用;以siRNA转染黑素瘤细胞抑制该基因表达可抑制黑素瘤细胞黏附、侵袭能力。     

ALDH2和ADH1B基因多态性与食管癌淋巴结转移的相关性

目的： 研究中国汉族人群中乙醛脱氢酶2（aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2）和乙醇脱氢酶1B（alcohol dehydrogenase 1B,ADH1B）基因多态性与食管癌淋巴结转移风险性的关系。方法： 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry, MALDI TOF MS)技术分析85例有淋巴结转移的食管癌和270例无淋巴结转移的食管癌标本ALDH2 rs671和ADH1B rs1229984基因多态性,计算各种基因型与食管癌淋巴结转移的相对风险度及其95%可信区间。结果： ALDH2 rs671 G>A3种多态基因型GG,GA,AA在食管癌淋巴结转移组和无淋巴结转移组的频率分别为58.8%(GG),38.8%(GA),2.4%(AA)和59.3%(GG),37.4%(GA),3.3%(AA)(χ2 =0.237, P=0.888);以ALDH2 rs671 GG基因型作参照,ALDH2 rs671 AA基因型食管癌淋巴结转移发生的风险降低（调整年龄、性别、吸烟及饮酒状态OR=0.70, 95% CI=0.14 ~3.45）, 但相关性未达到明显统计学意义。ADH1B rs1229984 A>G3种多态基因型AA, AG, GG在食管癌淋巴结转移组和无淋巴结转移组的频率分别为38.8%(AA), 50.6%(AG), 10.6%(GG)和42.8%(AA), 41.6%(AG), 15.6%(GG)(χ2=2.553, P=0.279),以ADH1B rs1229984 AA基因型作参照,ADH1B rs1229984 GG基因型食管癌淋巴结转移发生的风险降低（调整年龄、性别、吸烟及饮酒状态OR=0.66, 95% CI=0.29 ~1.53), 但相关性未达到明显统计学意义。结论： ALDH2 rs671 G>A和ADH1B rs1229984 A>G基因多态性可能与食管癌淋巴结转移的风险无明显相关,需进一步研究证实。     

吴茱萸碱对人胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和保罗样激酶-1基因表达的影响

目的:观察中草药提取物吴茱萸碱(evodiamine)对人胃癌细胞侵袭的影响及可能的机制.方法:采用不同浓度的吴茱萸碱处理人胃癌SGC7901细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力;分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法检测癌细胞保罗样激酶-1(pol...     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对乳腺癌细胞转移能力的影响

目的探讨TROP-2基因小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA—MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者。采用TROP-2基因小干扰RNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以TROP-2siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附试验结果显示,5、10、20nMsiRNA组黏附率分别为（52．9±2．5）％、（25．6±2．3）％、（12．8±2．2）％（P〈0．01）;Transwell试验结果显示,5、10和20nMsiRNA组穿过滤膜的细胞分别为（78±17）、（39±15）、（19±16）,而对照组分别为（136±25）、（139±21）（P〈0．01）。结论TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力。     

β-榄香烯对胃癌SGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响

目的：探讨β-榄香烯对胃癌CGC-7901细胞c-myc基因表达及端粒酶活性的影响。方法：应用β-榄香烯处理人胃癌细胞系SGC-7901后,采有RT-PCR检测c-myc基因mRNA的变化。采用流式细胞仪免疫荧光技术检测c-myc蛋白表达,用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性,结果：β-榄香烯可下调c-myc基因表达及抑制端粒酶活性。结论：β-榄香烯可抑制胃癌细胞端粒酶活性,可能与下调c-myc基因表达有关。     

支气管扩张症大鼠模型的建立及双黄连注射液对其气道炎症细胞凋亡的影响

支气管扩张症(下简称支扩)是常见病症,气道粘膜淋巴细胞等炎症细胞的大量聚集是其主要病理改变之一。本研究采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶末端标记法(即 TUNEL 法)对支扩模型大鼠粘膜组织中炎症细胞凋亡进行原位标记,揭示双黄连注射液对气道淋巴细胞凋亡的影响。材料与方法1 实验材料 SD 大鼠40只,体重200～300g,雌雄各半,由南京医科大学实验动物中心提供。绿脓杆菌液:从支扩患者的痰中分离得到绿脓杆菌,接种于培养基上,在37.0℃的温育箱中培养24 h 后,选择典型菌落冲洗,以比浊法调配10~5CFU/ml 菌液2 ml。双黄连注射液:每支2 ml,相当原生药4     

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的实验研究

目的 观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(cFs)增殖的影响及其机制。方法 差速贴壁法培养新生大鼠cFs,在体外建立AngⅡ诱导的cFs增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖, 分别观察一氧化氮合酶抑制剂(L NAME)、鸟苷酸环化酶抑制剂(ODQ)及白藜芦醇对AngⅡ诱导的cFs增殖的影响;采用心钠素(ANP)及脑钠素(BNP) mRNA表达检测细胞肥厚反应;放免法及ELISA法测细胞培养液中ANP及BNP水平;RT-PCR方法检测ANP、BNP mRNA表达;硝酸还原酶法测细胞培养液中一氧化氮(NO)水平;化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶(NOS)水平; 放免法测定细胞内环磷酸鸟苷（cGMP）水平。结果 白藜芦醇25～100 μmol/L呈时间及剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的cFs增殖,但这种作用可被L-NAME及ODQ部分阻断。白藜芦醇作用细胞后NO、cGMP水平升高, ANP、BNP水平降低, ANP、BNP mRNA的表达下降。结论 白藜芦醇在一定浓度范围对AngⅡ诱导的cFs增殖及细胞肥厚有抑制作用,上调NO－cGMP信号通路可能是其发挥作用的途径之一。     

大肠癌患者血清畸胎瘤衍生生长因子1临床检测意义

目的:探讨检测大肠癌患者血清畸胎瘤衍生生长因子1(teratocarcinoma-derived growth factor 1,TDGF 1)水平的临床意义.方法:应用sandwich-酶联免疫吸附法(ELISA)技术检测39例大肠癌患者和36例健康者血清中TDGF1含量.结果:大肠癌患者血清TDGF1水平明显高于对照组(P＜0.0001);大肠癌患者血清TDGF1含量和患者的年龄、性别及组织病理分化程度无关,而与淋巴结转移、肝转移和Duke's分期密切相关.结论:血清TDGF 1有可能成为一个新的肿瘤标志物而用于评价大肠癌进展的指标.