二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞分化差异表达cDNA文库的构建

目的　应用抑制性消减杂交技术构建二烯丙基二硫(diallyldisulfide ,DADS)诱导人白血病细胞分化的消减杂交cDNA文库 ,以期克隆DADS诱导人白血病HL 6 0细胞分化的相关基因。方法　用DADS诱导人白血病HL 6 0细胞分化 ,提取polyA+ RNA ,反转录合成cDNA ,消化成短片段后分成两组 ,分别与两种不同的接头连接 ,再与未处理的白血病细胞cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR扩增 ,将PCR产物与pGEM T线性载体连接 ,转化大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆进行酶切鉴定。结果　成功地构建了具有高消减效率的DADS诱导白血病细胞分化的cDNA文库 ,随机挑取消 2 0 0个克隆制备质粒并酶切分析 ,其中 84 5 %的克隆均具有 1 0 0～ 6 0 0bp左右的插入片段 ,说明每一克隆中均含有特异性的目的片段 ,从而为大批量筛选、克隆DADS诱导人白血病细胞分化的相关未知新基因奠定了基础。结论　DADS能诱导人白血病HL 6 0细胞分化 ,并引起相关的基因发生改变 ,而抑制性消减杂交技术能有效地分离差异表达的基因。     

二烯丙基二硫对小鼠肾包膜下移植人胃癌细胞的生长抑制作用

二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜的主要有效成分,对多种肿瘤均有明显的抑制作用[1].本室体外研究表明:DADS可明显抑制人胃癌MGC803细胞生长[2],其机制与G2/M期阻滞和信号传导通路ERK/AP-1途径有关[3,4].本研究采用人肿瘤细胞肾包膜下移植模型,探讨DADS对体内生长的MGC803细胞的抑制作用.     

胃癌染色体7q31.1杂合性缺失的精细作图及其相关基因探讨

目的 显微切割胃癌细胞检测染色体7q31.1区域的杂合性缺失(LOH),绘制胃癌7q31.1区域等位基因缺失图谱,确定其常见最小缺失区域,揭示胃癌细胞的分子遗传学改变,分析7q31.1杂合性缺失与胃癌临床病理特征的关系.方法 在胃癌组织石蜡切片上行显微切割获得胃癌细胞.采用Chelex-100方法分别抽提切割的胃癌细胞和相应正常对照细胞的DNA.利用高密度微卫星标志结合PCR技术,检测胃癌染色体7q31.1杂合性缺失,绘制胃癌染色体7q31.1等位基因的缺失图谱,确定其常见最小缺失区域.结果 胃癌染色体7q31.1至少有一个位点存在杂合性缺失者21例,占70.0%(21/30);D7S2459、D7S523、D7S2502、D7S486、D7S480、D7S650、D7S2486各位点杂合性缺失频率分别为10.0%、6.7%、23.3%、43.3%、26.7%、26.7%、20.0%;缺失图谱分析显示常见最小缺失区域位于D7S2502～D7S480之间.统计学分析表明这一区带微卫星位点的等位基因缺失阳性率与患者年龄、性别、原发灶位置、病理分期、分化程度以及淋巴结转移不相关(P>0.05).结论 胃癌染色体7q31.1常见最小缺失区域在D7S2502～D7S480之间,在D7S486附近可能存在与胃癌相关的抑癌基因.     

医疗设备管理的SWOT分析

当前,医院之间竞争日趋激烈,有相当一部分医院的管理者不了解自身的优势和劣势,对外部环境的变化、发展的机会和挑战认识不足,只顾眼前利益,竞相购买先进设备,缺乏医疗设备战略管理思考。为此,我们利用SWOT分析方法,对当前医疗设备管理的内部优势、劣势和外部的机会、挑战等进行     

烹调油烟所致大鼠肺部病变及肺S9中SOD,MDA变化

利用动式吸入烹调油烟（浓度为（４３±４）ｍｇ／ｍ３）持续染毒６０天制备动物模型观察肺部病理形态改变,并通过分光光度法测试肺组织匀浆Ｓ９中的ＭＤＡ、ＳＯＤ,探讨其损伤机理。结果表明：ＣＯＦ染毒组肺组织病理形态改变以炎症改变为主,尚有肺泡上皮腺样化生、不典型腺样增生病变形成。阴性对照组有轻度间质性肺炎及轻度的上皮增生。Ｂ（ａ）Ｐ组肺组织炎症病变少,以鳞状上皮化生较多见。ＣＯＦ可使肺组织匀浆Ｓ９中ＭＤＡ含量增加,ＳＯＤ酶活性降低,与阴性对照组比较,差异有显著性,（Ｐ＜０．０５）。     

淮安市手足口病流行影响因素分析

目的探讨手足口病流行与气温、学生放假行为和病原学检测结果之间的关系。方法收集2011-2012年淮安市手足口病发病资料、气温、假期和病原学检测结果,利用Spearman相关分析、卡方检验方法分析数据。结果月平均气温与手足口病流行呈正相关,且在25℃以下相关性增强(r=0.71,P0.01);学生放假后手足口病发病率降低(χ2=85.86,P0.01);病原学检测阳性率与手足口上月发病人数之间呈正相关(r=0.51,P=0.01)。结论气温、假期和病毒可对手足口病流行造成影响,公共卫生防控可以从流行影响因素方面制定措施。     

南岳毛尖抑制小鼠移植性S_(180)生长作用的初步研究

本研究用南岳毛尖(一级绿茶)浸泡液灌胃处理皮下移植S_(180)的Babl/c小白鼠,观察其抑瘤效果。结果表明该绿茶可明显抑制肿瘤的生长,瘤重明显轻于对照组(P<0.05);空泡变性瘤细胞数、瘤块内坏死灶数明显多于对照组(P<0.001);瘤细胞核分裂数明显少于对照组(P<0.005),对瘤细胞有较好的杀灭作用。该研究证明南岳毛尖是一种天然防癌抗癌物质,对干预肿瘤的发生和发展有重要意义。     

DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的流式细胞术检测

目的 运用流式细胞术检测二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的作用. 方法 实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养,进行细胞形态学观察,应用流式细胞术检测凋亡率、早期凋亡细胞以及caspase-3活性. 结果 DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,PI单染法检测结果 :随着不同浓度DADS作用HL-60细胞24 h,HL-60细胞出现明显亚二倍峰,细胞周期也发生了相应的改变;Annexin V/PI 双染法检测结果 :10 mg/L DADS作用HL-60细胞4、8、12和24 h后,早期凋亡细胞显著增加,具有明显的时间依赖性(P<0.05);间接免疫荧光流式细胞术结果 显示在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有caspase-3的活化,且与作用时间呈依赖关系. 结论 流式细胞术检测结果 表明,DADS能有效诱导HL-60细胞凋亡.     

二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病HL-60细胞增殖及诱导分化

目的研究二烯丙基二硫(DADS)通过下调DJ-1对人白血病细胞系HL-60增殖抑制及诱导分化的影响。方法通过细胞形态法观察细胞分化;Western blot及免疫细胞化学检测DADS对HL-60细胞DJ-1表达的影响;针对DJ-1mRNA序列设计合成siRNA转染人白血病细胞HL-60,Western blot检测基因干扰效果;利用MTT法及间接免疫荧光检测DADS及DJ-1沉默对HL-60细胞的生长及细胞分化的影响。结果 DADS可以诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系样分化。DADS呈时间依赖性抑制DJ-1的表达(P<0.05),DJ-1干扰组细胞生长减慢(P<0.05),与DADS共同作用后可诱导HL-60细胞分化。检测细胞生长情况发现干扰组细胞生长减慢(P<0.05)。结论 DADS通过下调DJ-1抑制细胞增殖并诱导HL-60细胞分化;干扰DJ-1基因可以增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制诱导分化作用。