定量PCR系统的研制及应用

定量ＰＣＲ系统的研制及应用闫小君肖乐义李陕区郭晏海韩丰产王晓东郭进军苏成芝（第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词ＰＣＲ脱氧核糖核酸核糖核酸基因中图号基因及基因表达的定量是生命科学研究中经常要解决的问题，迄今尚无一种理想的方法...     

人胃癌组织基因组文库的构建

为了分离和研究人胃癌致癌基因的结构及调控。方法：我们以ｃ－ｃｙｃ癌基因扩增为指标，通过打点杂交从四对人胃癌组织及其癌旁正常组织中挑选出１例差异明显的人胃鳞状细胞癌组织。提取其基因组ＤＮＡ，经Ｓａｕ３Ａ部分酶解后回收１５～２０ｋｂ的插入片段。用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将段与λ噬菌体ＥＭＢＬ４载体臂进行重组。结果：经外包装构建了人胃癌组织基因组库。经滴度测定，库容量为１．１×１０＾６重组噬菌体。克隆效率为２     

异种Ⅰ—RNA在小鼠体内转移肿瘤特异性白细胞粘附抑制反应

I-RNA能否在体内转移特异性肿瘤免疫反应,尚缺乏直接证据。本文将山羊I-RNA注射给正常LACA小鼠,通过(51)~Cr-LAI试验检测到 小鼠获得抗S-180肉瘤和H-22肝癌的特异性LAI反应;I-RNA注射后第1天出现LAI反应,持续2个月,76天时消失;最低有效剂量为2.5μg,反应不受有效剂量递增的影响;I-RNA的活性对RNA酶敏感,不受Pronase和DNA酶的影响。     

逆转录病毒介导的HyTK基因转移及杀伤恶性黑色素瘤细胞的…

用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因导入恶性肿瘤细胞，随后应用药物丙氧鸟苷可选择性杀死肿瘤细胞。本研究中我们将ＨｙＴＫ基因克隆到逆转录病毒载体ＬＸＳＮ中，并初除其中的ＳＶ４０早期启动子，构建成重组逆转录病毒载体ＬＨｙＴＫ／Ｎ，并用该重组病毒转染小鼠恶性黑色素瘤细胞系Ｂ１６细胞，经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入了肿瘤细胞中，且不含可复制的辅助病毒。     

桔皮苷(维生素P)的定量法

已知的维生素P定量法不外以下几类:(1)用硷使维生素P溶液呈褐红色,碘液作标准液进行比色;(2)用硼酸柠檬酸试剂与维生素P结合成黄色复合体用花青素反应(cyanidine reaction)进行比色;(3)用氯化铝与维生素P结合成体或直接将维生素P提取液用分光光度计进行定量;(4)应用色层分离法进行     

抗Dystrophin特异性抗血清Anti 5－7的制备

应用作者自行制备的含ＤＭＤ基因中段缺失突变热点区ｃＤＮＡ片段的克隆菌株ＴＡＰ１０６（ｐＳＤ），表达出ＤＭＤｃＤＮＡ５－７蛋白，作为抗原制备特异性抗血清。利用彻底变性的、由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶直接匀浆制备的抗原、和电洗脱纯化使处于相对天然状态的抗原分别免疫兔，得到各为１：２５６０和１：１２８０的高效价抗血清Ａｎｔｉ５－７，为我国ＤＭＤ／ＢＭＤ蛋白诊断创造了条件。     

特异性转移因子对人胃癌细胞RNA合成及H—ras癌基因表达的影响

七十年代以来,转移因子(Transfer factor,简称TF)作为一种细胞免疫调节剂应用于多种恶性肿瘤的临床辅助治疗,取得了一定的疗效。有文献报道,TF对小鼠H_(22)腹水癌细胞具有一定抑制作用,提示TF对肿瘤细胞很可能还具有直接效应。但由于腹水中细胞成分复杂,这种抑制作用尚不能完全确认为对肿瘤的直接效应.因此进一步观察TF对肿瘤细胞的直接效应并探讨其机制,对阐明TF的     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与Hp相关性胃疾病的关系

现已确认,幽门螺杆菌（Ｈｐ）是慢性萎缩性胃炎及消化性溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生有密切关系。人群中Ｈｐ的感染率在５０％以上,其中６０％～８０％的Ｈｐ具有单拷贝的细胞毒素相关蛋白基因Ａ,产生细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）。研究表明,产生ＣａｇＡ...     

亚洲乙型肝炎病毒前C区突变检测的临床意义

１９８９年Ｂｒｕｎｅｔｔｏｅｔａｌ［１］和Ｃａｒｍａｎｅｔａｌ［２］先后报道抗Ｈｂｅ阳性的慢性肝炎患者中,发现了ＨＢＶ前Ｃ区突变株,即在前Ｃ区１８９６点ＴＧＧ转变为ＴＡＧ,产生终止码,阻止ＨＢｅＡｇ合成．后来在许多国家和地区都相继发现了相同的突变株．在我国也有许多关于前Ｃ区突变与慢性肝炎肝硬变有关的报道［６］．这些报道总体上说明１８９６点突变株在毒力上不但比野型株强,而且与野型株有相同的复制和感染能力．我们用双重ＰＣＲ方法对ＨＢＶ感染者血清中ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区１８９６点的突变率进行检测,研究其…     

结合酪氨酸蛋白激酶受体EphB2的功能短肽的筛选

目的 筛选能结合酪氨酸蛋白激酶受体ＥｐｈＢ２的功能短肽。方法 ＰＣＲ扩增ＥｐｈＢ２的配体结合区,定向克隆到融合表达质粒载体ｐＲＳＥＴ Ａ中,阳性克隆经ＩＰＴＧ诱导表达融合蛋白,并利用Ｎｉ－ＮＴＡ金属螯合亲和层析在变性条件下对表达的蛋白进行纯化,以此纯化蛋白为靶,将其包被于ＥＬＩＳＡ板上,进行３轮亲和筛选。结果 电泳分析表明：表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,纯化蛋白质的纯度大于９５％。从噬菌体