中国人肠上皮细胞γ射线损伤的差异表达基因

小、肠是电离辐射的敏感组织.γ射线照射后小肠上皮干细胞的损伤,肠道组织形态和生理功能改变的文献报道较多[1],但肠道辐射损伤分子机制的研究尚未见报道.我们采用mRNA差异展示技术,分离正常的和经60Coγ射线照射的人肠上皮细胞株HIEC细胞的差异表达基因,拟从分子水平探讨电离辐射对人肠上皮细胞损伤的分子机制,为建立辐射损伤的分子诊断标准打下基础.     

抗Dystrophin特异性抗血清Anti5—7的制备

应用作者自行制备的含ＤＭＤ基因中段缺失突变热点区ｃＤＮＡ片段的克隆菌株ＴＡＰ１０６，表达出ＤＭＤｃＤＮＡ５－７蛋白，作为抗原制备特异性抗血清，利用彻底变性的，由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶直接匀浆制备的抗原，和电洗脱纯化使处于相对天然状态的抗原分别免疫兔，得到各为１：２５６０和１：１２８０的高效价抗血清Ａｎｔｉ５－７，为我国ＤＭＤ／ＢＭＤ蛋白诊断创造了条件。     

人骨形成蛋白cDNA 1,2A和3在大肠杆菌中的克隆、表达及活性

骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Protein,简称BMP)是一类可以诱导异位宿区间充质细胞分化成软骨和骨细胞的蛋白质,在促进骨修复中具有较高的应用价值,为了在大肠杆菌中有效地表达人BMP,我们将人BMP1,BMP2A和BMP3的cDNA分别插入表达载体中,获得预期结果。1 材料和方法 人骨形成蛋白cDNA 1,2A和3由口腔医学院杨连甲教授赠送,表达载体pBV220由张德震博士赠送,表达载体pSM43由陈苏民教授构建.人BMP1 cDNA先以“缺口双链”定位插入突变技术,将其5’端信号肽序列去掉,并引入起始密码ATG,将经改造的人BMP1 cDNA 5’端1.44     

人胃癌组织基因组文库中异常高表达基因及c—myc阳性克隆的筛选

为了研究人胃癌组织中癌基因及其调控序列是否存在结构上的改变，首先需要分离并获得所需研究的基因，方法：用人胃癌异常高表达基因ｃＤＮＡ片段和ｃ－ｍｙｃ基因为探针，经同位素标记，对所构建的人胃癌组织基因组库进行二轮噬菌斑原位杂交筛选，结果：从该基因组库中分别筛选得到２个和６个阳性克隆。结论：为进一步探讨胃癌发生的机理，以及对这二个基因进行亚克隆和序列分析奠定了基础。     

抗鼠疟iRNA体外传递疟原虫抗原特异性白细胞粘附抑制反应

疟疾免疫是一个复杂而重要的问题,其中细胞免疫的作用正受到越来越多的重视。免疫核糖核酸(iRNA)能够传递特异性免疫反应,并己开始用于某些疾病的预防和治疗。故本实验制备了抗约氏疟原虫(Plasmodium yoelii yoelii)iRNA,通过白细胞粘附抑制(LAI)试验,观察其体外传递特异性细胞免疫反应的效应,以期将iRNA用于疟疾免疫机理的探讨和实际应用。     

间日疟原虫特异性DNA片段的克隆和鉴定

本文从间日疟患者血液中分离出间日疟原虫,将其基因组 DNA 片段克隆到载体 pUC12质粒中,构建了间日疟原虫 DNA 文库。利用质粒的遗传标志初步筛选重组克隆;用~(32)P 标记的间日疟原虫DNA,人白细胞 DNA 和恶性疟原虫 DNA 为探针分别作菌落杂交,差异筛选出4株间日疟原虫特异的重组克隆,命名为 pVA1—4。然后酶切鉴定其插入片段,并用 Southern blot 分析,表明重组质粒 pVAl 含有间日疟原虫特异性 DNA 片段。     

冷暴露大鼠下丘脑、垂体、脾淋巴细胞内神经白细胞素mRNA的变化

神经白细胞素(NLK)是既作用于神经系统又作用于免疫系统的蛋白质(Mr 56 000),其表达调控于mRNA水平.150只SD纯系雄性大鼠分为对照组和冷暴露1,2,3,4周组.RNA打点杂交结果表明,大鼠冷暴露期间神经内分泌系统(垂体、下丘脑)和免疫系统(脾淋巴细胞)中 NLK mRNA的变化均一致,即RNA杂交点灰度比值:1周时增加到原值的1.63-11.31倍,2周时降低到原值的0.63倍,3周时再次增加到原值的1.92-21.09倍.这是对寒冷环境的一种普遍性反应.体外培养的淋巴细胞内合成蛋白质与上清中分泌蛋白质经SDS-PAGE放射自显影图谱分析表明淋巴细胞内NLK与其mRNA含量变化不呈平行关系,与对照组相比,冷暴露1周组NLK电泳条带极浅,而冷暴露2,3,4周组NLK放射自显影电泳条带明显增浓.这很可能是冷适应动物Ig合成增加的一个主要原因.     

幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A的表达纯化及其临床研究

目的　 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法　构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果　重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论　我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发     

采用改进的差示PCR分离胃癌差异表达基因

目的:建立优化的mRNA差示PCR分离胃癌差异表达基因的方法。方法:以胃癌7901与胃粘膜GES—1细胞株为研究对象,探索mRNA差异PCR技术的最佳条件,优化并改进差示cDNA片段的后续处理方法。结果:①优化了mRNA差异PCR的循环参数;②改进了差示cDNA片段的后续处理方法;③运用优化方法及GQS—960型成像及基因定量分析系统从胃癌7901与胃粘膜GES—1细胞株中分离出了154个差异表达的cDNA片段,对其中的部分片段进行了测序、检索及克隆。结论:建立了可靠的mRNA差示PCR技术的优化条件及后续处理方法。