7种立克次体甄别检测基因芯片方法的建立

目的：建立一种能同时检测7种立克次体的化学发光基因芯片法。方法根据NCBI公开发表的7种立克次体的序列设计引物和探针,制备立克次体甄别检测基因芯片。利用多重不对称PCR法扩增立克次体靶基因片段,标记的产物与基因芯片上的探针杂交,经清洗、化学发光显色后进行结果分析。在优化的多重PCR体系、杂交反应和化学发光检测条件下,评价芯片的特异性、灵敏度、重复性。用实时荧光PCR法与芯片法分别检测莫氏立克次体梯度稀释的核酸,比较两种方法的灵敏度。制备双盲模拟样本,进一步评价芯片方法的准确性。结果该研究共筛选出1对通用引物、4对特异性引物和1条立克次体属通用探针、9条特异性检测探针。该芯片检测质粒DNA的灵敏度为1．5×102～3×103拷贝／反应,检测模拟样本的灵敏度为103～104拷贝／μl。实时荧光PCR法与芯片法检测结果一致,实时荧光PCR法比芯片法灵敏度高10倍。双盲模拟样本检测符合率为100％。结论成功建立了可同时检测7种立克次体的化学发光基因芯片检测方法,为立克次体病的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的高通量检测手段。     

辐射诱发BEP 2 D恶性转化中Smad 7对TGF-β/SMADs信号通路的调控

目的 研究BEP2D细胞经辐射诱发恶性转化过程中，作为SMAD蛋白家族的抑制分子，Smad7对TGF-β／SMAD介导信号通路的调控。方法 用Northem blot检测TGF-β刺激之后，永生化BEP2D细胞及辐射诱发恶性转化的BERP 35T2细胞中Smad7 mRNA的表达水平。人工合成SMAD结合元件(SBE)重复序列，同报告基因碱性磷酸酶融合。构建好的载体同Smad7真核表达载体共转染，TGF-β刺激，通过报告基因的表达丰度来检测Smad7对TGF-β／SMADs介导的信号通路的调控。结果 Northern杂交结果表明，永生化细胞Smad7基因对TGF-β刺激的应答正常，恶性化细胞的应答降低。基因转染的结果表明，永生化细胞中SBE的基础活性较恶性化细胞高；TGF—β刺激之后，永生化细胞中SBE活性显著增强，恶性化细胞变化不明显；同Smad7真核表达载体共转染之后，两种细胞中SBE活性均显著降低。结论 在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7基因对TGF-β信号通路的反馈调节作用发生紊乱，使TGF-β信号通路持续处于抑制状态，TGF-β对细胞的负性调控作用减弱，细胞进一步向恶性化发展。     

反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。     

反义核酸技术及其应用——反义寡核苷酸(文献综述)

根据杂交互补原理寡核苷酸可特异地结合基因组DNA/RNA,从而抑制和(或)阻断其复制、转录或翻译,这一寡核苷酸被称为反义寡核苷酸(简称asON)。通过适当修饰可增加asON的稳定性、生物活性或生物利用度等,从而使asON作为药用成为可能。本文综述了近几年来asON的研究进展,如分类、修饰、作用机制、生物活性及其影响因素等,并对asON的发展前景及存在问题进行了简单的讨论。     

一种新的氨基连接臂的合成

氨基连接臂(aminolink)可用于合成5~(?)端带游离脂肪伯氨基的寡合苷酸(ODN)。该 ODN 很易与活化生物紊、荧光物等反应产生相应标记的 ODN 探针、引物等。目前,所用商品化氨基连接臂有 ABI 公司的 aminolinkⅡ及 Pharmacia 公司的 TFA-amin-olink,两种产品结构完全一样但均未公开合成方法。为立足国内,避免进门供应不及时及运输途中变质等问题,我们通过两步简单反应合成了一种新的氨基连接臂——N~6-FMOC-6-氨基已氧基-N,N-二异丙基-β-氰乙氧基膦(Ⅲ)(FMOC-aminolink)。合成步骤简述如下:     

十全大补汤组方中单味药及其复方活性部位的药效学研究

目的 介绍十全大补汤组方中单味药及其复方活性部位的药效学研究近况.方法 对近年来有关十全大补汤组方单味药及整方化学成分的药效学研究方面的文献进行检索和综述.结果 近年来对十全大补汤组方各单味药的研究已经比较深入,但就整方而言,在国内还停留在比较初步的阶段,主要的研究是整方的药理和药效作用,对基于化学成分的药理研究不多.结论 对于中国古方应该加强基于活性部位的有效成分的药效学基础研究.     

治疗青春期崩漏重在补肾

李某某,15岁学生,2005年5月30日初诊。诉13岁初潮,月经一直先后不定期,短则20日,长则二月一至,经期1周左右。时快到中考,过于紧张劳累。月经于2月2日来潮,至今已有月余,淋漓不净,虽血偶止1～2日,然继而又下,其色暗淡,凡遇劳累则血下见多,伴头昏,全身乏力,懒于行动,视物昏花。腰酸肢软,纳谷不香,舌淡边有齿痕、苔白,脉细弱。证属出血日久,以致脾肾亏虚,冲任不固。治宜益气健脾,补肾固冲。处方：熟地10g,炒杜仲10g,鹿角胶10g,焦白术10g,炒川断10g,阿胶10g（烊化）,炮姜炭6g,黑升麻10g,党参12g,黄芪12g,仙鹤草10g。     

角化棘皮瘤样倒置性毛囊角化病1例

<正>倒置性毛囊角化病(inverted follicular keratosis,IFK),是一种良性皮肤肿瘤,一般认为其起源于皮脂腺导管开口上方的毛囊漏斗部^[1]。IFK有不同的组织病理学亚型,包括乳头瘤样或疣状型、角化棘皮瘤样型、实性结节型和囊肿型等^[2-3],与不同的临床类型有关^[2,4]。本病临床少见,现将笔者诊治的1例角化棘皮瘤样IFK报告如下。     

中西医结合治疗外阴白斑37例

1 临床资料 5 a间共收治外阴白斑患者37例,年龄25～68岁,病程3 mo～28 a. 主要症状:外阴奇痒难忍,抓破后伴有局部疼痛,病区皮肤增厚似皮革,隆起有皱襞,或有鳞屑、湿疹样变,外阴皮肤暗红,有界限清晰的白色斑块. 诊断以局部病理活检为主,多见于增生型营养不良和硬化苔癣型营养不良.     

薄层色谱法纯化卟啉锰修饰的TFO

目的 筛选分离纯化卟啉锰-TFO-吖啶化合物的简单有效的方法。方法 以固相亚磷酰胺法合成吖啶，6碳氨基连接臂修饰的TFO，并以温和法切割和脱保护；四苯基卟啉四羧酸经金属化，酯化后，与上述TFO偶联；分别以变性聚丙酰胺凝胶电泳，寡核苷酸纯化柱，薄层色谱法分离纯化偶联反应产物。结果 以凝胶电泳分离偶联反应产物时，偶联反应产物带，卟啉锰活性酯带位于同一水平，未分离出独立的卟啉锰-TFO-吖啶化合物带，以寡核苷酸纯化柱分离偶联反应产物时，紫外分光光度仪检测结果显示，回收物仍为卟啉锰-TFO-吖啶化合物与游离的卟啉锰活性酯的混合物。以薄层层析分离偶联反应产物时，在卟啉锰活性单酯带后，出现一条绿色月牙型带，紫外光光谱分析显示，此带回收物同时具有寡核苷酸和卟啉锰的特征吸收峰（UVλmax=260,468nm)。质谱分析结果证实，回收物分子量实测值与卟啉锰-TFO-吖啶化合物理论一致。结论 薄层色谱法可简单有效分离纯化卟啉锰-TFO-吖啶化合物。