小鼠DETCs表型及功能的初步研究

目的通过分析小鼠表皮内T淋巴细胞(dendritic epidermal T cells,DETCs)的形态、表型及细胞因子的表达情况,揭示小鼠DETCs活化后能够发挥抗原递呈功能。方法通过免疫荧光的方法观察DETCs的形态,通过流式细胞技术分析DETCs的表型及细胞因子的表达情况。通过DETCs和na觙ve CD4+T细胞进行共培养,观察DETCs对淋巴细胞分化方向的影响。结果 DETCs在形态上表现出抗原递呈细胞的树突状特征,活化后分泌一定水平的IFN-γ,DETCs活化后在体外与na觙ve CD4+T细胞共培养可以诱导该型T细胞向Th1方向分化。结论小鼠DETCs具有抗原递呈细胞的基本特征,是皮肤免疫微环境的重要组成部分。     

单核-巨噬细胞的异质性及其对创面愈合的调控研究进展

单核吞噬细胞系统(MPS)主要由骨髓中单核细胞前体、外周血中的单核细胞、组织中的巨噬细胞和树突状细胞(DC)组成。其中,巨噬细胞和DC分布在机体的多个组织器官,发挥免疫监控和抵御病原体入侵的作用。然而,不同部位的这些细胞在组织形态和功能上存在一定差异,即使是同一器官中的巨噬细胞也不尽相同。皮肤中的单核-巨噬细胞主要包括表皮中的朗格汉斯细胞以及真皮中的巨噬细胞和真皮树突状细胞(dDC),它们共同参与调控创面愈合过程中的炎症反应、肉芽组织生成和组织重塑,达到促进创面愈合的作用。     

儿童食物不耐受312例临床分析

目的:分析食物不耐受患儿临床症状及食物不耐受情况,为儿童食物不耐受的诊治提供临床依据.方法:采用酶联免疫吸附法,对门诊333例药物治疗效果欠佳、高度怀疑为食物不耐受相关表现的儿童进行14种食物(牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦)特异性IgG抗体检测,分析不同年龄患儿的食物不耐受情况.结果:333例疑诊为食物不耐受患儿中312例食物特异性IgG抗体水平检测结果为阳性.患儿表现为呼吸道症状105例、消化道症状53例、皮肤症状42例、神经系统症状29例、营养不良26例、心前区不适22例、泌尿系统症状11例,其他症状24例;14种食物的不耐受阳性率居前4位的是:鸡蛋、牛奶、大豆、西红柿;≤1岁组患儿牛奶不耐受阳性率最高(79.0％),4～18岁组最低(63.0％),两组比较差异有显著性(P＜0.05). 2～3岁组及4～18岁组鸡蛋不耐受阳性率分别为95.5％和89.5％,均明显高于≤1岁组(29.0％,P＜0.05).1种食物不耐受发生率在≤1岁组(61.3％)明显高于2～3岁组(26.1％)和4～18岁组(31.5％),差异有显著性(P＜0.01);2种及2种以上食物不耐受发生率在2～3岁组(73.9％)最高,明显高于≤1岁组(38.7％,P＜ 0.01),与4～18岁组(68.5％),差异无显著性(P＞0.05).结论:儿童食物不耐受可引起多系统疾病,鸡蛋和牛奶是主要的不耐受食物,对疑似患儿进行食物特异性IgG抗体检测有助于疾病的治疗和预防.     

Foxp3酵母双杂交诱饵表达载体的构建、鉴定和其毒性及自激活效应检测

目的利用酵母双杂交系统,构建人Foxp3酵母双杂交体系中的诱饵载体,并对其进行鉴定.方法获得正常人外周血 PBMC,抽提mRNA,通过巢式 RT-PCR 在人外周血PBMC中获得Foxp3基因片断,纯化后连接至 pMD18-T 载体,测序正确,EcoRⅠ、SalⅠ双酶切pMD18-T-Foxp3和酵母表达载体 pGBKT7,回收产物并连接,重组质粒命名为 pGBKT7-Foxp3,测序正确,用醋酸锂法将重组质粒转化酶母菌 AH109,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-Foxp3 在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能.结果 RT-PCR 扩增出的DNA 片段约1 203 bp,大小正确,与pMD18-T载体连接,测序正确.构建的诱饵载体pGBKT7-Foxp3,测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确.pGBKT7-Foxp3转化酵母感受态AH109,在SD/-Trp 板上生长良好,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade /-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,说明AH109[pGBKT7-Foxp3]转化成功,对酵母菌株AH109不具有毒性且不具自主激活报告基因的功能.结论成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-Foxp3,可作为酵母双杂合系统中的"诱饵", 为下一步利用酵母双杂交系统筛选Foxp3相互作用蛋白创造了条件.     

天狼猩红偏振光法在病理性瘢痕纤维化研究中的应用

目的：探讨检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中胶原的方法。方法：应用天狼猩红编振光法和图像分析技术对正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中胶原的类型、含量及分布特点进行研究。结果：正常皮肤组织中以Ⅲ型胶原为主；增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中均以I型胶原纤维为主，其含量随病程发展而增加。结论：天狼猩红编振光法是检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织纤维化程度的理想方法，可以明确纤维化过程中I、Ⅲ型胶原的变化规律。     

细节服务应用于住院患者费用清单管理的效果

目的 探讨细节管理对提高护理服务质量的作用.方法 在住院患者费用清单管理方面引入细节服务管理方法,并进行跟踪观察,予以效果评价.结果 发放一日清单后患者咨询率由11.7%降至1.63%;患者服务满意度明显提高,达到100%.结论 在临床护理工作中,将细节服务纳入护士长管理意识,有利于护理服务质量的提高.     

硬膜外阻滞麻醉与导乐联合用于分娩镇痛

目的 :分析硬膜外阻滞麻醉与导乐联合用于分娩镇痛的疗效。方法 :硬膜外阻滞麻醉与导乐联用组 (联合组 ) :随机选择无禁忌证的进入活跃期的初产妇 3 0 0例 ,单纯导乐组 (导乐组 ) :同样条件的初产妇 3 0 0例 ,对照组 :同样条件的无任何镇痛措施的初产妇 3 0 0例。结果 :联合组与后二组比较 ,镇痛效果有显著差异 (P <0 .0 1) ;联合组活跃期明显缩短 (P <0 .0 1) ,而第二、第三产程无差异 (P >0 .0 5 ) ;分娩方式、产后出血量、胎儿宫内窘迫及新生儿窒息发生率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :硬膜外阻滞麻醉与导乐联合用于分娩镇痛是一种提高产科质量、确保母婴安全的方法 ,降低了剖宫产率     

腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞成骨特性研究

目的 通过腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞(human marrow mesenchymal stem cells, hMSCs),观察被修饰细胞CTLA-4Ig蛋白表达情况,以及基因修饰对hMSCs诱导成骨特性的影响.方法 采用荧光显微镜观察腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染hMSCs的绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测确定转染率,观察对比转染前后细胞形态和细胞周期,用免疫细胞化学方法检测转染hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达,转染hMSCs成骨诱导培养3周后进行成骨特异性标记检测.结果 分离培养的hMSCs CD105表达阳性, CD34表达阴性.重组腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs的转染率为81.14%, CTLA-4Ig基因转染hMSCs(CTLA-4Ig-hMSCs)的形态无明显变化,生长良好.免疫细胞化学结果显示,CTLA-4Ig-hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达阳性,诱导培养3周的CTLA-4Ig-hMSCs,碱性磷酸酶染色呈强阳性,免疫细胞化学检测骨钙素表达阳性,钙的四环素荧光标记法显示细胞间有钙的沉积.结论 腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs能够分泌CTLA-4Ig蛋白,并保持了成骨分化潜能,可用于异基因hMSCs作为骨组织工程种子细胞的应用研究.     

S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义

目的:探讨正常人与类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,分析差异蛋白在RA发病中的作用.方法:应用固相pH梯度(IPC)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者滑膜成纤维细胞总蛋白质;应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析;应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质,并用Westem Blot、免疫细胞化学技术验证表达差异蛋白质.结果:正常人及RA患者滑膜成纤维细胞蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示896和992个点.有64个蛋白质点表达存在2倍以上的差异.选取9个在RA滑膜成纤维细胞中表达上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100A4和S100A10两个蛋白质.经Western Blot、免疫细胞化学技术验证这两个蛋白在RA滑膜成纤维细胞中表达上调,与上述结果一致,并且发现S100A4在RA滑膜成纤维细胞中的表达分布发生了变化.结论:结合蛋白S100A4和S100A10可能参与RA的发病.S100A4在细胞中的表达易位可能与RA滑膜成纤维细胞表型改变有关.     

腹部开放伤后海水浸泡对实验犬肠屏障功能的影响

目的 探讨腹部开放伤后海水浸泡对实验犬肠屏障功能的影响.方法 实验动物致伤后随机分为对照组(n=10)和海水浸泡组(n=10).对照组致伤后直接观察,海水浸泡组于致伤后立即放入人工配制的海水中,于致伤前(0 h)及出水后4、8、12、24 h取血测定血浆内毒素、谷氨酰胺、D-乳酸、双胺氧化酶(DAO)含量.实验后取门静脉血、肠系膜淋巴结进行细菌培养,并取小肠组织进行病理检查.致伤后给予乳果糖/甘露醇(L/M)肠内注入,收集24 h尿测定L/M含量.结果 海水浸泡组血清D-乳酸、DAO活性呈进行性上升趋势,8 h后与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);谷氨酰胺呈进行性下降,12 h后与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);内毒素升高,12 h后与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);24 h后尿L/M与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);门静脉和肠系膜淋巴结细菌培养,海水浸泡组出现大量菌落,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).病理结果显示,海水浸泡组与对照组比较肠黏膜损伤明显,黏膜厚度和绒毛高度均显著减小.结论 海水浸泡可导致实验犬的肠道屏障功能受损.