实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达

利用荧光TaqMan技术 (5′核酸外切酶活性 )和一种可以实时检测荧光信号的仪器 (ABIPrism 770 0序列检测系统 ) ,在PCR反应完全封闭的情况下可实时检测PCR扩增的动力学变化 ,能够对标本扩增过程中的起始拷贝数快速、准确地定量 ,极大地克服了原有PCR技术存在的不足 ,已逐步成为PCR更新换代的新技术[1 ,2 ] 。目前常规检测 β1 转化生长因子(TGF β1 )表达多采用竞争RT PCR及内源性参比基因RT PCR ,它们都属于PCR终点法检测 ,很难对起始模板数准确定量。我们利用实时荧光定量RT PCR技术建立了检测TGF β1 mRNA表达的方法。…     

用携有存活蛋白基因的重组腺病毒载体转染树突状细胞诱导细胞毒T细胞抗淋巴瘤免疫效应

本研究探讨转染survivin（SVV）基因的树突状细胞（DC）体外诱导特异性抗淋巴瘤的免疫效应。对人外周血DC进行诱导培养,以Ad-SVV转染DC,用Westernblot鉴定Survivin的表达,用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,用混合淋巴细胞反应（MLR）测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,以ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12含量。结果表明：在MLR中,刺激应答比（S/R）为1∶5、1∶10、1∶50和1∶100时,转染Ad-SVV的DC有较强刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;转染Ad-SVV的DC组所诱发的CTL活性明显高于对照DC组;转染病毒后第2天,转染Ad-SVV的DC组的IL-12分泌水平高于对照DC组。结论：含存活蛋白基因的DC能够在体外诱导特异性CTL效应,对CA46细胞有明显的杀伤作用。     

阿扎胞苷联合CAG方案再诱导治疗儿童复发难治急性髓系白血病临床观察

目的:探讨阿扎胞苷联合CAG（阿糖胞苷+阿柔比星+粒细胞集落刺激因子）方案再诱导儿童复发难治急性髓系白血病（AML）的疗效和安全性。方法:回顾性分析2018年11月至2019年8月福建医科大学附属协和医院收治的3例接受阿扎胞苷联合CAG方案再诱导治疗的复发难治AML患儿的临床资料,分析疗效、预后及不良反应发生情况。结果:3例患儿中,2例为复发AML（分别距开始治疗18个月和8个月后复发）,1例为难治AML（2个疗程标准化疗不能达完全缓解）。在2个疗程阿扎胞苷联合CAG方案再诱导后,2例达完全缓解,1例达部分缓解,之后均桥接造血干细胞移植（HSCT）。随访16~21个月（距首次阿扎胞苷联合CAG方案再诱导的时间）,患儿均为无白血病生存。除了血液学不良反应及感染外,阿扎胞苷未增加其他不良反应。结论:阿扎胞苷联合CAG方案诱导儿童复发难治AML有较高的再缓解率和安全性,及时桥接HSCT可取得较好的预后。     

伊曲康唑注射液治疗血液病合并侵袭性真菌病临床分析

目的：探讨伊曲康唑注射液对血液病患者合并侵袭性真菌病分层治疗的疗效及安全性。方法回顾性分析160例血液病合并侵袭性真菌病患者接受伊曲康唑注射液分层治疗的疗效和安全性,并对相关影响因素进行回顾性分析。结果伊曲康唑对全部患者的总有效率为58.12%（93／160）,其中经验治疗、诊断驱动治疗和目标治疗的有效率分别为65.82%（52／160）、53.57%（30／160）、44.00%（11／160）,三组间的疗效差异无统计学意义（P＝0.054）。相关不良事件发生率为8.13%（13／160）,主要为肝功能损害。多因素分析显示伊曲康唑注射液治疗侵袭性真菌病的疗效不受年龄、真菌感染病史、是否存在粒细胞缺乏、是否初治等因素的影响。结论伊曲康唑注射液对血液病患者合并侵袭性真菌病的各个分层治疗均有良好的疗效,且安全可靠。     

下调NPM基因表达对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的抑制作用研究

目的:运用RNA干扰技术抑制核仁磷酸蛋白(NPM)的表达,研究NPM基因在慢性髓系白血病细胞株(K562细胞)增殖中的作用及其机制。方法:采用shRNA抑制NPM的表达,应用实时荧光定量PCR技术检测NPM基因的表达,MTS法检测抑制NPM基因对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的改变,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:成功构建了针对NPM基因的shRNA慢病毒载体,并感染K562细胞。检测结果显示,与对照组相比较,抑制K562细胞NPM基因的表达可以抑制细胞的增殖,减少细胞集落形成。干扰NPM基因可使G0/G1期延长,细胞周期阻滞,这可能与下调NPM基因后激活p21蛋白的表达,进而抑制CDK2/Cyclin E复合物形成有关。结论:下调K562细胞NPM基因的表达,可以通过诱导细胞周期阻滞抑制K562细胞的增殖。     

miR-155表达与FLT3-ITD+急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及机制研究

目的:研究miR-155的表达与FLT3-ITD⁺急性髓系白血病细胞系药物敏感性的关系及潜在的调控机制。方法:通过CRISPR/Cas9基因编辑工具在FLT3-ITD⁺AML细胞系MV411中实现miR-155编码基因敲除,筛选单克隆细胞,PCR及Sanger测序鉴定单克隆细胞的基因型,实时荧光定量逆转录PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。MTT法计算半数抑制率,比较MV411细胞对多柔比星、奎扎替尼以及米哚妥林的药物敏感性。转录组测序分析miR-155敲除后MV411细胞mRNA水平的变化,基因集富集分析获得miR-155敲除后的信号通路的变化水平,Western blot验证信号通路关键分子的表达。结果:通过PCR初筛和Sanger测序获得了4个基因敲除的杂合子和1个基因插入的杂合子。实时荧光定量逆转录PCR结果显示,这些单克隆细胞中成熟miR-155的表达显著低于野生型克隆。MTT结果显示,与野生型相比,miR-155基因敲除后MV411细胞对多种抗FLT3-ITD⁺AML的药物敏感性有了显著增加。RNA测序显示m...     

反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对HL60细胞Bcl-2表达的抑制作用

目的探讨Ｂｃ１－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）是否抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ及其蛋白的表达,以及不同浓度ＡＳＰＯ产生抑制作用的程度、效应发生和持续时间的差异。方法应用免疫细胞化学染色、流式细胞仪和ＲＴ－ＰＣＲ半定量法对与Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ共培养后的ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２蛋白及ｍＲＮＡ表达进行检测。结果Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能在ｍＲＮＡ水平产生抑制作用,并减少Ｂｃ１－２蛋白的合成,且在培养２４小时即出现效应,同时随着ＡＳＰＯ剂量的增加和作用时间的延长其抑制作用更显著,但７２小时后出现回升现象。结论Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能特异抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ和蛋白表达,且具浓度和时间的依赖性,同时又存在作用暂时性的问题。     

电子克隆结合RT-PCR获得两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA

本研究旨在克隆急性白血病复发相关的新EST片段全长cDNA并进行生物信息学分析。电子克隆结合RT—PCR克隆新EST片段的全长cDNA,利用生物信息学技术分析所获得的cDNA。结果获得全长序列为1904bp和3393bp的两条真核细胞翻译起始因子4E（eukaryotic initiation factor4E,eIF4E）新的剪接变异体,命名为真核细胞翻译起始因子剪接变异体1（splicing variant 1 of eIF4E）和真核细胞翻译起始因子剪接变异体2（splicing variant 2 of eIF4E）。编码的蛋白产物分别为245和132个氨基酸。二者编码的蛋白产物与eIF4E蛋白有所不同。结论：获得了两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA,这为进一步探讨与急性白血病复发的相关性提供基础。     

Venetoclax联合低剂量阿糖胞苷治疗不耐受强化化疗的初治急性髓系白血病患者：一项Ⅲ期随机、安慰剂对照试验中中国队列结果

目的:探讨Venetoclax联合低剂量阿糖胞苷（LDAC）在不能耐受强化诱导化疗的中国急性髓系白血病（AML）患者中的疗效及安全性。方法:一项Ⅲ期随机、双盲安慰剂对照试验（VIALE-C）中中国队列的结果。在本项国际临床试验中,入组了不适合接受强化化疗、新诊断为AML的18岁或以上的成人患者。在全球范围内,患者（21...     

白血病p16基因失活及其临床意义

目的：探讨ｐ１６基因失活对白血病发病及预后的关系。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）与ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ测序技术,甲基化检测技术。结果：ｐ１６基因的失活形式主要以缺失和甲基化为主。ｐ１６基因缺失与急性淋巴细胞白血病的发生密切相关,甲基化则主要发生在髓系白血病。结论：ｐ１６基因结构发生变化在高危白血病患者中比较多,ｐ１６基因的检测对于疾病的治疗及判断预后有着重要的意义。