地拉卓干预APS IgG诱导血液单核细胞组织因子活性的实验研究

 目的 探讨药物地拉卓(dilazep)对抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)患者血清IgG诱导单核细胞组织因子(tis-sue factor,TF)表达及其抑制机制。方法 将纯化的APS血清IgG以及地拉卓等药物与新鲜分离的外周血单核细胞培养一定时间,加入外源性因子Ⅶa和Ⅹ,通过因子Ⅹa的生成情况,判断单核细胞表面IF活性;利用TF primers,采用TaqMan PCR方法,观察单核细胞TF mRNA表达情况。结果　地拉卓呈量效递增性抑制APS IgG诱导单核细胞TF活性表达,但并非影响APS IgG诱导单核细胞TF mRNA表达。腺苷受体拮抗剂--茶碱(theophylline)可中和地拉卓的这一抑制效应。结论　地拉卓通过腺苷受体途径,在转录后水平干预APS IgG对单核细胞TF活性的诱导。提示某些阻止单核细胞TF活性的药物可望成为治疗APS的新突破。     

CpG-ODN对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞T-bet表达的影响

目的：探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞（PBMC）T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法：对28例喘息性支气管炎（喘支组）患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,分别应用RT-PCR和Western blot检测CpG-ODN刺激前后患儿PBMC的T-bet mRNA和蛋白表达情况,以ELISA检测PBMC培养上清IFN-γ的变化,同时设立26例健康婴儿对照组。结果：与正常对照组比较,喘支患儿PBMC表达T-bet mRNA及蛋白明显减少（P〈0.05）,应用CpG-ODN刺激后,两组小儿PBMC表达T-bet均显著上调,但产生IFN-γ无明显增多,对照序列ODN对T-bet表达及IFN-γ的分泌无明显影响。相关分析表明,喘支患儿T-bet mRNA与IFN-γ分泌呈正相关（r=0.57,P〈0.01）,CpG-ODN刺激后,二者相关性明显下降（r=0.19,P〉0.05）。结论：T-bet在喘支患儿PB-MC中表达减少,提示T-bet表达缺陷参与了喘支的免疫病理,B型CpG-ODN作为一种免疫调节剂,可有效上调T-bet的表达,但不能诱导IFN-γ的产生。     

基于拉曼光谱和多元统计分析研究血清标本及在冠心病诊断中的应用

目的 探讨显微拉曼共焦系统在冠心病(coronary heart disease,CHD)患者血清诊断中的应用价值。 方法 选取2018年8月—2019年1月在陆军军医大学第一附属医院收集的96份血清样本,包括46例经冠脉造影明确诊断的冠心病组血清和50例体检健康组血清,运用XploRA PLUS全自动显微共焦拉曼系统,测量并分析各标本的血清拉曼光谱特征,并联合多元统计中的正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)等,使用SIMCA-P 14.1分析软件进行统计学处理。 结果 冠心病组和健康组的平均拉曼谱峰形态相似;在位移1 080.47/cm、1 102.01/cm、1 127.52/cm、1 335.46/cm、1 603.83/cm、1 657.69/cm处,冠心病组的振动强度高于健康组;在位移1 154.51/cm、1 516.81/cm处,健康组的振动强度显著高于冠心病组,这些谱峰的变化可能有利于血清拉曼光谱对冠心病的筛查;OPLS-DA模型的R2X(cum)=0.818,R2Y(cum)=0.644,模型的可预测性Q2(cum)=0.497,基于OPLS-DA冠心病组和健康组的AUC分别为0.970和0.970。 结论 显微共焦拉曼系统联合OPLS-DA分析,可对已知冠心病组和健康组血清样本进行快速便捷的区分,作为探索性实验方法,为冠心病的检测诊断提供了一种新的可能。      

剧烈运动引起肾功能异常变化的初步研究

目的了解剧烈运动对肾功能影响.方法用尿沉渣流式细胞仪(UF-100)、放射免疫等方法,测定45名健康男女学生剧烈运动前后尿红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、管型(Cast)、上皮细胞(EC)、结晶(X'TAL)、病理管型(P.Cast)、小圆上皮细胞(SRC)、总蛋白(PRO)、白蛋白(Alb)、α1-微球蛋白(α1-MG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)及电导率等指标,以评价剧烈运动前后肾功能变化情况.结果剧烈运动前后及休息后男生尿RBC、WBC、Cast、EC差异有显著性(P<0.01);女生剧烈运动后尿Cast差异有显著性(P<0.01);男女生尿X'TAL、P.Cast、PRO、SRC、Alb、α1-MG、β2-MG、RBP及NAG剧烈运动后显著增加(P<0.01或P<0.05),而电导率运动前后无明显变化(P>0.05).结论剧烈运动会导致肾功能异常变化.     

人脐带间质干细胞的分离纯化及生物学特性鉴定

近年来,间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)以其易于在体外分离培养、高增殖潜能等生物学特性,已经成为备受关注的治疗载体.本文探讨人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUCMSC)的分离培养及其生物学特性.     

骨髓间质干细胞下调免疫反应的实验研究

目的：研究骨髓间质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）下调免疫反应的作用及其机制.方法：采用流式细胞分析（FCM）鉴定MSCs的纯度,用^3H-TdR掺入法测定MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响,利用RT-PCR和Real-time PCR检测TGF-β1、IL-8、IL-10的基因表达,同时进行皮肤移植模型研究.结果：MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响与MSCs和淋巴细胞的比值有关.RT-PCR结果显示MSCs对淋巴细胞分泌TGF-β1无显著性影响,而Real-time PCR的结果显示MSCs促进淋巴细胞分泌IL-10,减少淋巴细胞分泌IL-8.皮肤移植实验显示MSCs能延长异种移植皮肤的存活时间.结论：MSCs能下调免疫反应和抑制皮肤移植排斥反应,其可能的机制是通过促进淋巴细胞分泌IL-10以及减少淋巴细胞分泌IL-8来发挥作用.     

神经干细胞条件培养液对帕金森病模型神经元损伤的保护作用

目的:探究神经干细胞条件培养液(neural stem cell-conditioned medium, NSC-CM)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson′s disease, PD)体内外模型中神经元损伤的影响及可能机制。方法:采用6-OHDA脑立体定位注射SD大鼠的内侧前脑束建立体内PD模型,并在黑质和纹状体中注射NSC-CM进行治疗;免疫组织化学染色检测黑质和纹状体中多巴胺能神经元(dopaminergic neuron, DAN)丢失情况,免疫印迹实验检测黑质中线粒体融合蛋白1(mitofusin1,Mfn1)的表达水平。采用6-OHDA处理大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞建立体外PD细胞模型,并用NSC-CM进行预处理;检测PD细胞模型的乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞活性氧水平,免疫印迹实验检测Mfn1表达水平。液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测NSC-CM成分并进行生物信息学分析;流式细胞术和激光共...     

少突胶质样细胞条件培养液通过调节Sirt1/PGC-1α通路改善SH-SY5Y细胞氧化应激损伤

目的:研究人神经干细胞来源的少突胶质样细胞条件培养液(oligodendrocytes-like conditioned medium, OCM)对人神经元氧化应激损伤的修复作用及可能机制。方法:人神经干细胞分化为少突胶质样细胞(oligodendrocytes-like, OLs),免疫荧光等方法鉴定OLs,体外观察其髓鞘形成能力。构建H₂O₂诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧化损伤模型,流式细胞术测定活性氧水平及细胞凋亡,荧光探针检测线粒体膜电位,化学发光法检测还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。蛋白质印迹法检测Sirt1/PGC-1α通路蛋白水平。结果:人神经干细胞源少突胶质样细胞(human neural stem cell-derived oligodendrocytes-like, hNSC-OLs)呈现典型的少突胶质细胞形态,表达少突胶质细胞标志物Olig2和SOX10,在体外包裹轴突形成髓鞘。OCM处理显著提高了受损SH-SY5Y细胞活力(P<0.01),活性氧水平明显降低...     

猪骨髓间质干细胞生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力

目的:建立猪骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外分离培养方法。对猪MSCs的生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力进行研究。方法:抽取猪骨髓体外培养MSCs,绘制生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期。选择第二代MSC体外诱导分化为成骨细胞和心肌细胞。通过碱性磷酸酶染色及钙沉积对成骨细胞进行鉴定;用免疫组化,透射电镜鉴定心肌细胞。结果:MSC细胞形态呈长梭形或多边形,细胞生长曲线呈S形,群体倍增时间为26h,细胞周期显示有69.22%细胞处于G0/G1期,24.44%细胞处于S期,细胞化学染色显示POX、SB阴性,PAS、α-NAE阳性,约1%细胞ALP阳性。MSC经体外诱导分化后可形成骨细胞和心肌细胞。结论:猪骨髓MSCs可在体外长期、稳定培养,具有多潜能分化活性,可以为间质干细胞系及组织工程研究提供较理想的细胞来源。为临床间质干细胞的应用研究提供动物模型,并为进一步的临床康复研究提供实验依据。     

人胚胎干细胞饲养层的制备及生物学活性

背景：建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。目的：体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。方法：取ICR小鼠13.5d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小鼠成纤维细胞,对冻存复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞形态、生长曲线、贴壁率、细胞化学染色及支持人胚胎干细胞生长特性等进行观察。结果与结论：复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞在体外传代30min时80%以上细胞贴壁,生长曲线显示细胞增殖活跃,细胞化学染色AKP、PAS、POX阴性,能长期支持人胚胎干细胞传代生长。提示此方法所获得的小鼠胚胎成纤维细胞复苏后有较高的生物学活性,可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。