尿中多胺的毛细管电泳激光诱导荧光测定法

目的 :建立高效毛细管区带电泳 (CZE)激光诱导荧光 (LIF)测定人尿中多胺 (POL)的新方法。方法 :样品用 5mmol/L的HClO4分离蛋白 ,样品中多胺与异硫氰酸荧光素 (FITC)完成衍生反应后 ,用四甲基乙二胺(TEMED)作内标 ,在 15mmol/L的硼酸盐缓冲液 (pH 8.5 )中 ,运用毛细管区带电泳进行色谱分离 ,以激光诱导荧光测定法测定多胺。结果 :多胺测定在 10～ 2 0 0 μg/L范围内具有良好的线性关系 (r =0 .996 ) ,最低检测限为 16μg/L ,日内变异系数 (CV) 3.5 1%～ 4 .6 1% ,日间变异系数 (CV) 3.74 %～ 4 .83% ,方法平均回收率为 96 .0 0 %～ 99.33%。结论 :本方法简便、快速、定量可靠 ,可用于临床实验室测定人尿中多胺水平     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞株细胞周期及14-3-3σ基因甲基化的影响

目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2dC）对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响,并进一步分析5-aza-2dC处理对14-3-3σ基因甲基化状态的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞,MTT实验观察细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡比例,用甲基化特异性PCR（MSP）分析14-3-3σ基因甲基化状态。结果5-aza-2dC对4株细胞均有生长抑制作用,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。5-aza-2dC处理使4株细胞凋亡率出现剂量依赖性的增加,CNE1和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后,CNE1、CNE2、6-10B细胞出现不同程度的G0/G1期阻滞,而5-8F表现为G0/G1期和G2/M期双期阻滞。不经5-aza-2dC处理情况下4株细胞14-3-3σ基因均存在不同程度的甲基化,5-aza-2dC处理能够使14-3-3σ基因去甲基化。结论5-aza-2dC具有抗鼻咽癌作用,抑制作用强弱可能与鼻咽癌分化程度和转移潜能有一定关系,其机制可能与使14-3-3σ等抑瘤基因去甲基化有关。     

鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱的建立

目的：建立人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,初步分析其蛋白质表达情况。方法：采用双向凝胶电泳（2-DE）分离人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2总蛋白,银染显色,Image Master图象分析系统分析,从胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析获取肽质量指纹图谱（PMF）,Mascot软件搜索MSDB和SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果：获得重复性和分辨率较好的CNE-2双向凝胶电泳图谱;质谱分析了78个蛋白质点,获取77张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了48个蛋白质。结论：建立了人鼻咽癌低分化细胞系CNE-2双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为人鼻咽癌蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据。     

人支气管上皮蛋白质样品制备方法及其癌变各阶段组织2-DE图谱的建立

目的： 改良、优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变过程各阶段组织的2-DE图谱,为识别鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法：收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本。改良的脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用ImageMaster 2D软件分析双向电泳图谱。结果：应用改良的DOC-TCA法提纯的支气管上皮总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱。正常上皮、鳞状化生、不典型增生和浸润癌4种组织凝胶的蛋白质点数依次为1 190±63,1 227±69,1 272±71,1 326±82。选取同例鳞状上皮化生组织进行3次重复性检测,3块凝胶的平均蛋白质点数为1 216 ±75 ,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达 89.3% , 且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为（0.835±0.247） mm ,在SDS-PAGE方向上的偏差为（0.921±0.104） mm。结论：改良的DOC-TCA沉淀法是一种较好的支气管上皮组织蛋白质样品制备法,初步建立了分辨率较高且重复性好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱。     

鼻息肉、鼻息肉病及对照鼻黏膜蛋白质双向电泳图谱的建立

目的　建立鼻息肉、鼻息肉病及对照鼻黏膜组织蛋白质双向凝胶电泳 (2 DE)图谱。方法　收集并- 80℃冻存鼻息肉、鼻息肉病及鼻黏膜组织样本各 3例 ,双向凝胶电泳分离样本总蛋白、银染凝胶显色 ,扫描图像 ,ImageMaster 2 DEElite4 .0 1软件分析。结果　鼻息肉、鼻息肉病和鼻黏膜组织同一样本三块凝胶平均蛋白质点数分别为 82 5± 78个 ,891± 6 7个和 936± 6 2个 ;平均匹配点数分别为 6 82± 96个 ,76 7± 83个和 82 1± 78个 ,其平均匹配百分率分别为 82 .7%、86 .1%和 87.7% ;位置重复性分析 ,IEF方向平均偏差为 1.13± 0 .16mm ,SDS PAGE方向平均偏差为 1.4 5± 0 .2 1mm。鼻息肉、鼻息病和鼻黏膜三种组织各 3例样品的平均蛋白质点数分别为 876± 95个 ,95 3± 84个和 10 16± 79个。三种组织的 2 DE平均凝胶图谱 :鼻息肉、鼻息肉病和鼻黏膜蛋白质点数分别为116 2个、12 74和 1336个 ,平均匹配点数为鼻息肉与鼻黏膜之间 75 7个 ;鼻息肉病与鼻黏膜之间为 82 5个 ;鼻息肉与鼻息肉病之间为 883个。结论　本实验建立了图像清晰、分辨率高和重复性好的鼻息肉、鼻息肉病及鼻黏膜组织的固相PH梯度 2 DE图谱 ,有助于进一步识别鉴定三者差异表达的蛋白质。     

肿瘤放射抗拒性的研究进展

放疗是肿瘤的主要治疗手段之一,长期以来,国内外针对提高肿瘤疗效进行了多方努力,但总的疗效改变不明显。放射抗拒一直是制约肿瘤放疗疗效的瓶颈,是放疗失败的主要原因之一。放疗效果与肿瘤、宿主及肿瘤和正常组织的放射剂量效应有关。目前采用的各种肿瘤放疗,大多是不同个体使用相似的放疗方案,但是不同个体放射敏感性有明显差异,因此,预测肿瘤放射抗拒性针对不同个体采用不同的放疗方案具有