T淋巴细胞活化检测方法的建立及在肝移植个案中的应用

1．1对象济南市中心医院2001-12～2003-05肝移植4例，分别于术前1d、肝移植术后3d、肝移植术后15d采空腹静脉血2ml，肝素钠抗凝。正常人30例，年龄24～41岁，平均35岁。1．2试剂和仪器由美国BD公司提供T淋巴细胞活化试剂盒，包括FTTC／PE／PerCP三色荧光IgGl阴性对照(批号340456)，CD4-FITC／(2D69-PE／(2D3-PerCP(批号340365)，CD8-FITC／(2D69-PE／(2D3-PerCP(批号340367)，溶血索(批号     

B细胞被动凋亡的研究进展

在细胞凋亡过程中，Fas：Fas配体之间的相互作用具有很重要的意义。T细胞的凋亡是通过Fas-依赖途径，但B细胞进行激活诱导的凋亡过程却不依赖于Fas，而是对T细胞介导的、FasL-诱导的死亡敏感。即在免疫反应中，T细胞表现为主动凋亡，而B细胞却表现为被动凋亡。     

人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测

目的:建立人外周血内皮前体细胞（EPCs）分离、诱导的方法,并利用流式细胞仪鉴定人内皮前体细胞的培养效果,为血管生成的细胞治疗研究奠定基础。方法：Ficoll密度梯度离心提取单个核细胞（MNCs）,接种在人纤连蛋白包被的培养板上,培养于EGM 2MV中,4?d后,粘附细胞用Dil AC LDL和FITC UEA 1染色,采用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。第4天到第7天,应用流式细胞仪动态检测粘附细胞表面标志CD34、CD31、KDR。结果：MNCs培养4?d后,荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下可观察到Dil AC LDL和FITC UEA 1双阳性的粘附细胞,流式细胞仪检测结果显示,CD34、CD31、KDR阳性细胞表达率分别为（2.50±1.47）%、（5.72±1.66）%、（36.24±3.24）%。第5、6和7天,CD34和CD31阳性细胞阳性率分别为（8.45±3.97）%、（22.52±3.86）%,（14.13±2.79）%、（42.76±3.67）%,（21.14±2.91）%、（54.67±3.44）%。结论：外周血中确实存在EPCs,并且在体外能被诱导分化为成熟的内皮细胞。     

siRNA干扰CHRNA5基因的表达抑制尼古丁对人肺癌细胞的促增殖作用

目的： 研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5（cholinergic receptor nicotinic alpha 5, CHRNA5 ）基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。 方法： 设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测转染后A549细胞中 CHRNA5 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测CHRNA5-siRNA对尼古丁促A549细胞增殖作用的影响。 结果： 成功构建了CHRNA5-siRNA并成功转染A549细胞。CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的 CHRNA5 mRNA 表达量明显低于si-NC转染对照组（0.196±0.044 vs 0.944±0.027, P<0.01）,CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5 蛋白表达量明显低于si-NC转染组（0.267±0.031 vs 0.745±0.035,P<0.01）。在无尼古丁作用时,CHRNA5-siRNA的转染不能抑制A549细胞的增殖。在尼古丁作用下,A549细胞增殖显著增加（P<001）,CHRNA5-siRNA转染可明显抑制尼古丁的促增殖作用（P<0.01）。 结论： siRNA下调肺癌A549细胞中 CHRNA5 的表达可以抑制尼古丁促细胞增殖作用, CHRNA5 可能是肺癌治疗的潜在靶点之一。     

大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Hedgehog信号分子的表达

背景：Hedgehog 信号通路是一个在胚胎阶段调控多种组织器官发育的重要信号通路,在成骨发育方面具有重要的作用。但Hedgehog 信号分子在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞过程中的作用尚未清楚。目的：体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化,检测 Hedgehog 信号分子在成骨诱导分化过程中的变化。方法：从大鼠骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞,进行地塞米松成骨诱导,通过免疫组化方法鉴定成骨的情况,Western Blot方法检测 Hedgehog 信号分子 SHH 和 IHH 在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达。结果与结论：成功分离得到骨髓间充质干细胞,地塞米松诱导培养 7,14,21 d 后,Ⅰ型胶原的表达量逐渐增加;在诱导成骨分化过程中,SHH 蛋白表达升高,诱导组的表达明显高于未诱导组的表达（P 〈 0.05）,而 IHH 蛋白的表达降低,诱导组的表达明显低于未诱导组的表达（P 〈 0.05）。结果提示,Hedgehog 信号分子参与地塞米松诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的过程,且 SHH 和 IHH 在间充质干细胞诱导成骨过程中的作用有差异。     

膀胱癌病人对动脉内输注rIL-2的局部免疫反应

静脉输注高剂量的rIL-2,能影响癌症病人的免疫应答,并使肿瘤消退。但是,对治疗有效的IL-2剂量却产生严重的毒性作用。因此,有的学者试图改变IL-2的运用方式以减轻其毒副作用。结果证明:局部运用IL-2治疗某些肿瘤,能够使病人产生局     

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CDl37、CDl37L的表达特点

目的：建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术，并初步探讨其表面CDl37、CDl37L的表达特点。方法：利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞，体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养，对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析，并检测CDl37及CDl37L的表达。结果：诱导培养5-7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态，无明显的增殖趋势；流式细胞仪分析显示，MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64．02％，单核-巨噬细胞系特异性表面标志CDl4表达率仅为2．34％；人类DCs表面CDl37L表达率为41．03％；CDl37表达率为9．77％，LPS刺激后表达率增加为36．06％。结论：人外周血单核细胞，体外经GM-CSF、IL-4诱导，可获得大量的未成熟DCs，其中含有少量的单核-巨噬细胞；此DCs增殖能力很弱，表明单核细胞为DCs的非增殖性前体；体外培养的人类DCs可中等量表达CDl37L，并有CDl37的表达，LPS刺激可诱导CDl37表达的增加。为进一步研究DCs以及CDl37、CDl37L的生物学特性和功能奠定了基础。     

大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Hedgehog信号分子的表达

背景：Hedgehog信号通路是一个在胚胎阶段调控多种组织器官发育的重要信号通路,在成骨发育方面具有重要的作用。但Hedgehog信号分子在大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞过程中的作用尚未清楚。 目的：体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化,检测Hedgehog信号分子在成骨诱导分化过程中的变化。 方法：从大鼠骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞,进行地塞米松成骨诱导,通过免疫组化方法鉴定成骨的情况,Western Blot方法检测 Hedgehog信号分子SHH和IHH在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达。 结果与结论：成功分离得到骨髓间充质干细胞,地塞米松诱导培养7,14,21 d 后,Ⅰ型胶原的表达量逐渐增加;在诱导成骨分化过程中,SHH蛋白表达升高,诱导组的表达明显高于未诱导组的表达(P < 0.05),而IHH蛋白的表达降低,诱导组的表达明显低于未诱导组的表达(P < 0.05)。结果提示,Hedgehog信号分子参与地塞米松诱导骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的过程,且SHH和IHH在间充质干细胞诱导成骨过程中的作用有差异。     

应用于缺血缺氧性脑病治疗的神经干细胞移植：现实与未来

背景：很多研究都揭示神经干细胞移植是治疗缺血缺氧性脑病的新方法。 目的：就神经干细胞移植治疗缺血缺氧性脑病的现状、移植策略以及发挥作用的可能机制等方面做一系统的归纳分析。 方法：检索2000年8月至2013年8月PubMed 数据库及中国知网数据库有关神经干细胞移植及缺血缺氧性脑病等方面的文献,英文检索词为“Hypoxic-ischemic encephalopathy,neural stem cel s”,中文检索词为“缺血缺氧性脑病,神经干细胞”。排除与研究目的无关和内容重复者,保留39篇文献做进一步分析。 结果与结论：神经干细胞移植能在一定程度上缓解缺血缺氧导致的神经功能的障碍,起到一定的治疗作用,给缺血缺氧性脑病患者带来新希望。但是该研究还处于实验室研究阶段,影响移植的一些关键因素,如：移植途径、时间、单纯或联合移植以及移植的细胞发挥作用的机制等还不明确,还有待科学实验来予以验证。     

多变量模型预测再生障碍性贫血免疫抑制疗法疗效的初步研究

目的 研究和评价外周血T细胞亚群、骨髓T淋巴细胞内IFN-γ表达、Th1／Th2及Tc1／Tc2值及HLA-DRB1＊1501表型在再生障碍性贫血（AA）患者免疫抑制疗法（IST）疗效预测中的价值；探讨建立临床和实验室指标多变量AA患者IST疗效预测模型的可行性。方法采用流式细胞术检测51例AA患者治疗前后外周血T细胞亚群，骨髓T细胞IFN-γ、IL-4、并分析上述指标与疗效的关系。结果 在所评价的指标中，CD8^＋细胞内IFN-γ的预测值最高，其灵敏度和特异度分别为94．3％和62．5％，阳性和阴性预测值分别为84．6％和83．3％，细胞内IFN-γ阳性且Tc1／Tc2〈50能提高阳性预测值达92．3％。以中性粒细胞绝对计数（ANC）、骨髓T细胞内IFN-γ染色、Tc1／Tc2分层和HLA-DRB1＊1501表型4个指标建立一个多变量模型，可用于诊断点的确定和个体患者治疗有效概率的预测。结论 骨髓CD8^＋T细胞内IFN-γ敏感性和特异性最好，但对细胞内IFN-γ阳性的原发性AA患者预测价值受限；CD8^＋细胞内IFN-γ阳性且Tc1／Tc2〈50预示患者有更多的机会通过IST治疗获得缓解；提示多变量AA患者IST疗效预测模型较单一预测指标更加适合临床，具有潜在的临床应用价值。