阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3基因的克隆、表达与免疫原性分析

目的 研究小鼠对阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）半胱氨酸蛋白酶3（TvCP3）重组蛋白的免疫应答。 方法 用PCR方法从阴道毛滴虫基因组DNA扩增TvCP3基因编码序列,分别用编码前体酶和成熟酶的基因片段构建重组表达质粒pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C,转化入大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3）后进行诱导表达,通过金属螯合层析法（immobilized metal affinity chromatography,IMAC）纯化表达产物重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠。BALB/c小鼠分为TvCP3免疫组、TvCP3C免疫组和对照组3组,每组6只,分别用TvCP3重组蛋白、TvCP3C和PBS免疫小鼠。第1次25 μg/只,福氏完全佐剂乳化;第2次25 μg/只,福氏不完全佐剂乳化;第3次与第4次12.5 μg/只,水剂。前3次免疫间隔2周,第4次间隔1周。末次免疫后1周用ELISA测定血清抗体滴度。采集高滴度小鼠血清制备免疫血清,通过蛋白质印迹（Western blotting）分析抗体所识别的阴道毛滴虫虫体或其分泌物中的特异性抗原组分。 结果 重组表达质粒 pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C均能在E. coli BL21（DE3）中高效表达,重组蛋白占菌体总蛋白的25%以上;ELISA结果显示,纯化的重组蛋白TvCP3和TvCP3C免疫小鼠4次后血清抗体效价分别达1︰204 800和1︰102 400;Western blotting分析显示,小鼠免疫血清能特异性识别表达产物中的目的蛋白,以及阴道毛滴虫虫体或分泌物中的特异性抗原组分。 结论 重组表达质粒pET28b-Tvcp3和pET28b-Tvcp3C可在E. coli BL21（DE3）中高效表达,纯化的表达产物具有良好的免疫原性。     

早期高危宫颈癌术后同期放化疗研究进展

宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一,位居全球2012年新发病例和死亡病例第四位。早期高危宫颈癌术后需要辅助治疗。术后同期放化疗较术后单纯放疗降低盆腔外复发率并提高生存率,较术后序贯放化疗延长中位生存时间和生存率。术后同期放化疗后巩固性化疗较术后单纯同期放化疗提高生存率。回顾性研究表明术后同期放化疗与术后单纯化疗疗效相当,但仍需进一步研究。影响术后同期放化疗疗效的因素主要包括化疗方案、放疗技术、手术与同期放化疗的时间间隔、多发盆腔淋巴结转移和盆腔淋巴结清扫个数等。术后同期放化疗不良反应主要包括血液学不良反应和胃肠道不良反应,其中血液学不良反应最常见。放疗技术的进步可改善不良反应发生率。     

早期高危宫颈癌术后IMRT同期或序贯化疗临床研究

目的 评价早期高危宫颈癌患者术后IMRT同期化疗或序贯化疗疗效和急性不良反应。方法 回顾分析2009—2017年收治的105例早期(ⅠB1-ⅡA2)高危宫颈癌术后患者临床资料,将患者分为IMRT同期化疗(C-IMRCT)组73例和IMRT序贯化疗(S-IMRCT)组32例。比较两组5年DFS、OS率及复发率、转移率和急性不良反应。采用Kaplan-Meier法计算生存率并Logrank检验和单因素预后分析,复发、转移、不良反应比较采用连续性校正χ²检验。结果 C-IMRCT、S-IMRCT组中位随访时间分别为20、23个月(P=0.813)。C-IMRCT、S-IMRCT组5年DFS分别为72.6%、72.5%(P=0.918),OS分别为82.8%、78.5%(P=0.504)。两组复发、转移情况均相近(P=0.598、1.000)。单因素预后分析未显示病理因素影响患者预后。急性不良反应主要为1、2级急性血液学毒性且两组总发生率相近(46.6%∶41.9%,P=0.884),胃肠道反应(腹泻)、尿路感染均相近(P=0.854、0.271)。结论 IMRT同期化疗治疗早期高危宫颈癌术后患者的生存率值得临床进一步研究。