嗜人按蚊种群饲养及标本保存方法对总RNA提取影响的研究

目的 建立适合嗜人按蚊小型种群饲养方法，探讨按蚊标本不同保存方法对总RNA提取的影响，为进行相关性研究提供高质量总RNA标本提供依据。方法 拟合嗜人按蚊的生长习性，在实验室采用多种针对措施以提高按蚊的孵化率、幼虫生存率、蛹化率和羽化率；采用总RNA变性胶凝胶电泳分析乙醚麻醉和低温速冻法对总RNA降解的影响。结果在非专业饲养室中采用简便低廉的改良方法大大提高了嗜人按蚊的孵化率、幼虫生存率、蛹化率和羽化率。低温速冻法较传统的乙醚麻醉法更好得避免了标本RNA的过多降解。结论建立了一种低成本、高成功率的嗜人按蚊饲养方法和一种低降解、安全简便的差异分析用嗜人按蚊标本的保存方法。     

幽门螺旋杆菌感染者尿液中特异性IgG及亚类的检测

目的 研究幽门螺旋杆菌感染者尿液中特异性循环抗体在幽门螺旋杆菌诊断上的应用。方法采集经C^14尿素呼气实验确诊的幽门螺旋杆菌患者尿液，ELISA法测定尿液中抗幽门螺旋杆菌特异性IgG及亚类（IgG1，IgG2，IgG3）抗体；同时用健康人群尿液作为阴性对照。结果C^14尿素呼气实验幽门螺旋杆菌患者尿液中抗幽门螺旋杆菌IgG抗体的检出率为96％（47／49），其中IgG1为96％（47／49），IgG2为20％（9／49），IgG3为32％（16／49），健康人群尿液中有4％的假阳性，但在健康人群中无幽门螺旋杆菌IgG2和IgG3特异性抗体检出。结论幽门螺旋杆菌患者尿液中存在抗幽门螺旋杆菌的特异性循环抗体，提示尿液中的抗体可以作为幽门螺旋杆菌感染的诊断标志，特别是尿液中的IgGl抗体可以作为幽门螺旋杆菌病的诊断的依据。     

阿苯达唑治疗广州管圆线虫感染的免疫学效应研究

动态观察小鼠人工感染广州管圆线虫并接受阿苯达唑治疗后外周血嗜酸性粒细胞数量、循环抗原CAg、IL-5水平变化,探讨阿苯达唑治疗广州管圆线虫感染的免疫学效应.将160只BALB/c小鼠随机分组成4组:实验组、感染未给药对照Ⅰ组、未感染给药对照Ⅱ组、健康对照Ⅲ组.动态计数各组小鼠外周血嗜酸性粒细胞,采用单抗金标层析法和酶联...     

不同地理株间日疟原虫SSUrRNA基因序列比较

目的测定我国间日疟原虫不同地理株红内期SSUrRNA基因序列,比较分析其分子特征。方法收集深圳、海南、湖北和河南四地间日疟患者血样5份（其中海南2份）,并提取核酸DNA,采用PCR从核酸提取物中扩增出间日疟原虫SSUrRNA基因片段,纯化后分别与pGEM—Teasy质粒连接构建重组子并转化大肠杆菌JM109;阳性克隆以双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法测定序列,采用BLAsT和MEGA4软件分析序列相互关系特征。结果5株间日疟原虫SSUrRNA基因扩增片段大小一致,约为998bp;核酸序列测定结果显示,所克隆的SSUrRNA基因片段均含有998个核苷酸,不同地理株间SSUrRNA基因序列有9个位点存在变异的可能,两两比对的同源性均高于99．5％,其中河南与湖北株序列的同源性为100．0％;与GenBank中报道的国外6株间日疟原虫相同序列作分子系统进化分析。国内5株间日疟原虫SSUrRNA基因序列与Sa11株遗传距离小,亲缘关系接近。结论测定的国内间日疟原虫SSUrRNA基因序列在不同地理株间相对保守．其间存在的单核苷酸多态性与地理变化有一定程度的关系。     

CYP4G19基因在德国小蠊对菊酯类杀虫剂耐药中作用研究

目的通过CYP4G19基因调控表达探讨CYP4G19在德国小蠊对菊酯类杀虫剂耐药中的作用。方法广口瓶内采用药膜接触法测定野生株和敏感株德国小蠊的耐药指数,RT-PCR比较野生株和敏感株德国小蠊CYP4G19基因表达,免疫组织化学法测定CYP4G19蛋白表达。结果深圳市现场采集野生型德国小蠊,用广口瓶药膜法测得其抗性指数为3.88,提示野生品系对菊酯类杀虫剂具有抗药性;RT-PCR检测野生株CYP4G19 mRNA表达水平对比敏感株显著上调（t=4.185,P〈0.01）;野生株CYP4G19基因沉默后CYP4G19蛋白表达明显下降但仍然具有一定的抗药性。结论深圳市野生株德国小蠊已对菊酯类杀虫剂＂家虫清＂产生抗药性,对菊酯类杀虫剂产生抗药性的德国小蠊体CYP4G19基因的转录、翻译表达水平均有上调;野生株CYP4G19基因沉默后仍然表现一定的抗药性暗示德国小蠊抗药性可能涉及到多基因的调控表达。     

长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

目的探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响。方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制(CR)20%组和CR40%组,记录正常饮食(NC)组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢。卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例。结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降。CR40%组大鼠的卵泡储备数量(105.7±9.5)和原始卵泡数(55.0±6.8)与NC组(51.2±5.4,18.3±3.7)相比差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%)与对照组(35.8%±5.5%)相比差异有统计学意义(P<0.001),而成熟卵泡比例(6.8%±1.9%)和发育卵泡比例(41.2%±3.0%)与NC组(15.6%±6.2%,48.9%±4.2%)相比差异亦有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义。结论长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长。     

能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化

目的研究不同程度的能量限制(CR)下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组:正常对照组、75%CR组(喂养食物为正常对照组的75%),55%CR组(喂养食物为正常对照组的55%)和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义(P<0.05),而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。     

染料木素对成年及老年大鼠卵巢发育的影响

目的 探讨染料木素对中年、早期老年大鼠卵泡发育的影响.方法 用染料木素对4和10个月龄大鼠进行灌胃[160 mg/(kg·d)],连续用药4周后处死,分别取染料木素灌胃组(试验组)和对照组大鼠双侧卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,同时对9～10个月龄大鼠行阴道涂片,观察其动情周期变化,连续6周.结果 在染料木素灌胃组的4个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,窦状卵泡、闭锁卵泡的比例下降;在染料木素灌胃组的10个月龄大鼠卵巢内原始卵泡、次级卵泡的比例升高,闲锁卵泡的比例下降,且灌胃组的10个月龄大鼠维持着规则的动情周期.结论 染料木素能延迟中年、早期老年期大鼠卵巢内原始卵泡发育启动,抑制各级卵泡闭锁,而可能有益于延长卵巢的生殖寿命.     

金黄色葡萄球菌SEB基因的克隆及其系统发生分析

目的克隆和测定金黄色葡萄球菌深圳分离株S4070肠毒素B（SEB）基因序列,并作系统发生分析。方法采用PCR法从金黄色葡萄球菌S4070基因组中扩增出SEB基因片段,纯化后与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5α;阳性克隆质粒经双酶切法鉴定后,采用双脱氧末端终止法作序列测定,并以BLAST和MEGA4软件分析其分子特征。结果从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出约704bp的基因片段,阳性克隆质粒鉴定结果与预期一致;序列测定结果显示,所克隆的SEB基因片段含704个碱基,与GenBank中17株金黄色葡萄球菌SEB基因序列比对,无碱基的插入或缺失,同源性均为98%以上;基于SEB基因序列,采用邻位连接法（Neigh bor-joining）构建系统发生树,深圳S4070株与日本分离株NN35、NN37、NN41-F1D、NN41-F1F和NN41-F1G以及印度分离株DQ535901、DQ535902的遗传距离小,同处在一个分支群上。结论实验成功克隆了金葡菌深圳株S4070 SEB基因,不同分离株间SEB基因序列相对保守,本分离株与日本和印度分离株遗传关系较近。     

广东人群MSX1编码区（G267C和P278S）突变与非综合征性唇腭裂相关性研究

目的探讨MSX1基因编码区突变G267C和P278S与广东人群非综合征性唇腭裂（NSCL/P）发病的相关性。方法收集广东籍NSCL/P患儿100名及健康对照者91名的外周血,提取基因组DNA,应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）对MSX1基因编码区G267C和P278S突变进行研究。结果 G267C（799G〉T）和P278S（832C〉T）的突变在本次研究的广东人群中并未发现。结论 MSX1基因编码区G267C和P278S突变与中国广东人群NSCL/P没有明显的相关性。