脂联素基因多态性与北方汉族人群缺血陛脑卒中易感性关系研究

目的 探讨脂联素基因多态性与北方汉族人群缺血性脑卒中易感性的关系.方法 采用荧光定量PCR的TaqMan探针方法检测357例缺血性脑卒中首发病例及345名健康对照的脂联素基因(rs2241766、rs266729)多态性,用logistic回归分析计算各基因型与缺血性脑卒中的相关性.结果 总体人群中rs2241766等位基因T＞G突变增加了缺血性脑卒中的易感性(OR=1.55,P=0.01);调整各因素后,多因素logistic回归分析仍为缺血性脑卒中的危险因素(OR=1.55,P=0.00).rs266729多态性与总体人群缺血性脑卒中易感性无关(OR=1.13,P=0.57),但在女性中GG纯合突变增加了缺血性脑卒中的易感性(OR=3.25,P=0.04).结论 rs2241766基因多态性与北方汉族总体人群缺血性脑卒中的易感性相关;rs266729等位基因GG纯合突变可能是北方汉族女性缺血性脑卒中易感性的危险因素.     

蛋白激酶C和JNK在溶血磷脂酸诱导人肺成纤维细胞MCP-1表达中的作用

目的：研究蛋白激酶C（PKC）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）在溶血磷脂酸（LPA）诱导人肺成纤维细胞（HLF-1）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达中的作用。方法：培养HLF-1细胞,以不同浓度（0、1、3和10 μmol/L）的LPA处理细胞不同时间（0.5、6、12和24 h）后,ELISA检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用不同浓度的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（0、0.1、1和10 μmol/L）或JNK抑制剂SP600125（0、0.1、1和10 μmol/L）预孵育细胞30 min后,用LPA（10 μmol/L）刺激2或6 h后,ELISA方法检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）预孵育30 min,以浓度为10 μmol/L的LPA处理细胞不同时间（0、5、30和60 min）后,Western blot检测c-Jun蛋白磷酸化水平。结果：LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1蛋白释放,并呈剂量效应和时间效应关系。LPA的浓度为10 μmol/L时,HLF-1细胞释放MCP-1蛋白的量是对照组的2.4倍（P < 0.05）;细胞在LPA处理24 h后,MCP-1蛋白的释放量较对照组增加约1倍（P < 0.05）。LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1 mRNA的表达并呈时间效应,LPA处理2 h后,MCP-1 mRNA表达水平是对照组的5.3倍（P < 0.05）。PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I和JNK抑制剂SP600125均可显著抑制LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1 mRNA表达及MCP-1蛋白释放。Bisindolylmaleimide I的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的60%（P < 0.05）,浓度为3 μmol/L时对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达40%（P < 0.05）;而SP600125的浓度为1 μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的78%（P < 0.05）,对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达87%（P < 0.05）。10 μmol/L的LPA可显著诱导HLF-1细胞c-Jun磷酸化,同时PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I（1 μmol/L）可显著抑制LPA（10 μmol/L）诱导的HLF-1细胞c-Jun磷酸化。结论：PKC与JNK通路均参与LPA诱导HLF-1细胞MCP-1的表达。     

深圳市广州管圆线虫动物宿主感染状况调查

目的了解深圳市广州管圆线虫宿主淡水螺和鼠类动物自然感染情况。方法分层随机抽样采集深圳4个行政区域的淡水螺类和鼠类,人工消化法分离检查螺内的广州管圆线虫Ⅲ期幼虫;结合心肺病原学检查和血清抗体法检测,调查鼠类的广州管圆线虫感染状况。结果共调查深圳市4个行政区螺类358只、鼠类331只,检出广州管圆线虫感染阳性螺76只、阳性鼠50只。捕获的阳性螺种为亚马逊瓶螺和褐云玛瑙螺,阳性鼠均为褐家鼠。两种阳性螺的总阳性率为39.79%,种间差异无统计学意义(χ2=0.07,P=0.788),但大螺的感染率明显高于小螺(χ2=10.06,P=0.002)。针对鼠类的血清学抗体检查法具有与病原学心肺解剖法相当的诊断价值,褐家鼠的广州管圆线虫IgG抗体阳性率为15.38%,未成年鼠的感染率明显低于成年鼠(P<0.001),雌鼠和雄鼠的感染率分别为22.22%和9.94%,差异有统计学意义(χ2=9.29,P=0.002)。结论深圳市广州管圆线虫的主要淡水螺中间宿主为亚马逊瓶螺和褐云玛瑙螺,主要终宿主为优势鼠种褐家鼠。媒介宿主的感染率较高,是深圳地区广州管圆线虫病重要传染源。     

淫羊藿甙腹腔注射对新生大鼠卵巢发育的影响

目的应用淫羊藿甙对新生大鼠进行腹腔注射,了解其对卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响。方法用淫羊藿甙对出生后1～8d大鼠腹腔注射50mg/（kg·d）,分别取出生后2、4、8d龄卵巢,用苏木素-伊红（hematoxylin-eoxin,HE）染色观察不同发育阶段卵泡比例,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL）荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化。结果在淫羊藿甙腹腔注射组的新生的鼠中,1、2d龄卵巢内未装配卵泡比例及4、8d龄卵巢内原始卵泡比例均高于对照组;各日龄组卵巢中卵母细胞TUNEL阳性率明显低于对照组。结论淫羊藿甙可能通过延缓卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵母细胞凋亡从而增加新生大鼠卵巢中卵母细胞的储备量。     

弓形虫乙肝病毒多重PCR及芯片杂交技术的研究

目的 建立同时检测弓形虫和乙肝DNA的多重PCR和芯片杂交检测方法，为孕产妇TORCH检测的进一步研究提供实验依据。方法以病人血液及弓形虫RH腹水为样本，多重PCR方法为基础，通过基因片段筛选及引物比例调整，进行弓形虫和乙肝病毒基因片段的扩增。然后进一步建立生物芯片检测法以排除PCR假阳性。结果在确定合适的多重PCR引物比例后，扩增结果清晰可辨。在PCR体系中加入Norwalk扩增监控进一步证实了扩增结果的可靠性。芯片与PCR产物杂交的结果具有较好的灵敏性和特异性。结论 建立的针对弓形虫和乙型肝炎病毒检测的多重PCR和芯片杂交方法是有效的，芯片杂交可用于对PCR检测结果的进一步确认。     

国产和进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果研究

目的评价目前我国常用的国产狂犬疫苗和进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果,为临床选择经济有效的狂犬疫苗提供依据。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测分别经长春、辽宁和法国维尔博三种狂犬疫苗全程免疫接种的300名暴露后接种者的血清狂犬病毒中和抗体,分析比较其抗体阳转率、实际抗体水平及接种副反应。结果排除年龄、免疫-检测时间间隔等干扰因素的影响后,三种人用纯化Vero狂犬疫苗不仅抗体阳转率(分别为93.0%,93.2%,86.7%)和抗体浓度(分别为16.21±5.27,15.93±4.35,15.89±6.17IU/ml)没有统计学差异,在接种副反应方面的差别也没有显著性。结论国产与进口人用纯化Vero狂犬疫苗的免疫效果具有较好的可比性,因其价格低可以在临床推广使用。     

KL与其受体Kit在不同发育阶段大鼠卵巢卵泡中的表达研究

目的:探讨KL(kitligand)与Kit蛋白在各年龄段大鼠卵巢组织的各种细胞中的表达。方法:分别取1d、2d、4d、8d、16d、3个月、12个月龄大鼠卵巢,制备组织切片,用免疫组织化学技术观察KL及Kit蛋白在各年龄段大鼠卵巢组织各种细胞中的表达状况。结果:在实验观察期,大鼠卵巢中KL在部分早期原始卵泡和原始卵泡的卵母细胞中表达,在初级卵泡以后各级卵泡的卵母细胞中均表达,而各级卵泡的颗粒细胞均不表达。在性成熟前,随着卵巢的发育KL逐渐出现在卵巢膜细胞和间质细胞中;性成熟后卵巢的间质细胞、卵泡膜细胞、卵巢膜上皮细胞以及黄体细胞均表达大量的KL蛋白。在实验观察的各年龄段大鼠卵巢中从早期原始卵泡到窦状卵泡的卵母细胞均表达Kit蛋白,但表达量随卵泡的发育逐渐减弱;随着卵巢的发育,Kit蛋白逐渐出现在卵巢的膜上皮细胞、卵泡膜细胞和间质细胞中;Kit也在黄体细胞中表达。在一些初级卵泡至窦状卵泡的少数颗粒细胞中也观察到Kit蛋白表达。结论:KL蛋白在各级卵泡的卵母细胞中表达,在颗粒细胞中不表达,KL与其受体Kit都在卵母细胞中表达,这些结果提示卵母细胞的生长可能受自身KL-Kit信号的调节。     

深圳市褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染调查

目的了解深圳市广州管圆线虫中间宿主褐云玛瑙螺的分布、生态环境与感染情况。方法收集深圳12个不同生态环境褐的云玛瑙螺，以匀浆沉淀镜检法检查感染率与感染度。结果褐云玛瑙螺在深圳广泛分布，12个调查点中10个发现褐云玛瑙螺的存在，其中4个点标本有广州管圆线虫幼虫感染，平均感染率为31％，螺重≥55g的个体感染度显著性的高于〈55g个体（P〈0．01），褐云玛瑙螺主要分布在灌木植被、土壤腐殖质含量高的花园和草地，常在夜间活动，以雨后更为频繁。结论褐云玛瑙螺在深圳市广泛分布且高度感染广州管圆线虫幼虫，为深圳存在散发广州管圆线虫病人的主要原因。     

热量限制大鼠血清对培养海马神经元延缓衰老的研究

目的:研究利用热量限制(Calorie restriction,CR)大鼠血清培养海马神经元细胞观察细胞衰老的变化。方法:18月龄SD大鼠进行60%热量限制,对照组不限饮食,喂养6个月后,取血清,取SD新生鼠的海马,进行海马神经元原代培养,加入CR大鼠血清和对照组血清,利用衰老相关的β半乳糖苷酶(Senescence associatedβ-galactosidase,SA-β-GAL)的细胞化学法检测培养6天、12天和20天海马神经元的衰老状况。结果:SA-β-GAL阳性染色在CR组和对照组都随着培养时间延长,阳性表达率明显升高,CR组的SA-β-GAL的阳性表达较对照组明显降低。结论:通过SA-β-GAL检测提示,热量限制大鼠血清对培养的海马神经元有延缓衰老作用。     

衰老海马神经元的体外鉴定

目的:鉴定培养的海马神经元衰老状况。方法:利用SD新生鼠进行海马神经元原代培养,分别取培养6、12和20d的神经元进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)的细胞化学染色。结果:随着培养时间的延长,SA-β-GAL阳性率增加(P<0.01)。结论:海马神经元可能随着培养时间的延长而衰老细胞增加。