Sir2家族去乙酰化作用和糖尿病关系研究进展

沉默信息调节因子（silent information regulator,Sir2）起初是Klar等在酵母转录基因研究中发现的一个影响酵母交配能力的Mar1基因[1],随后研究确定其参与交配型基因、端粒区和rDNA沉默、rDNA重组的抑制及DNA损失的修复。     

山稔子提取物对体外DNA氧化性损伤的保护作用

目的观察山稔子提取物对原代体外培养淋巴细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法原代培养24h的脾淋巴细胞悬液,随机分为7组,其中5组细胞用不同浓度的山稔子提取物溶液预先处理60min,再加入50μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,7组细胞共同在4℃下染毒20min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度。结果H2O2可致原代培养脾淋巴细胞的DNA严重损伤,而山稔子提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100μg/mL的浓度下,彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为85%、65%和30%（P分别〈0.05、0.01、0.01）,总彗星长度也从对照组的（52.82±6.42）μm,逐渐降低为（43.68±5.59）μm、（35.80±8.75）μm、（25.35±4.32）μm（P分别〈0.05、0.01、0.01）。结论山稔子提取物具有抗氧化作用,能在一定浓度范围内保护细胞显著降低氧自由基对DNA的氧化损伤。     

疟疾高度流行区回国人员的疟疾防制对策研究

目的探讨深圳市赴疟疾高度流行区回国人员的疟疾综合防制对策,为进一步加强我市的疟疾防制工作提供科学依据。方法对我市某高新企业赴疟疾高度流行区外派人员进行出国前健康教育、出国间药物预防和回国后健康排查并对该防制对策的效果进行分析研究。结果在疟疾相关知识健康教育前后,涉外员工的教育依从性和疟疾相关知识水平有显著提高,其中问卷回收率（Х^2=21．024,v=1,P〈0．001）、疫区知识正确性（Х^2=21．213,1,=1,P〈0．001）和态度行为正确性（Х^2=15．142,v=1,P〈0．001）增高明显。被干预人员的预防药物使用率逐年上升,疟疾发病率维持在较低水平。疟疾快速筛查方法与病原学检查结果符合率高,有助于病例的早期诊断和治疗。结论深圳市针对从疟疾高度流行区回国人员的疟疾防制对策为我市和其他涉外交流频繁地区的疟疾防制提供了重要的工作经验。     

生物反馈过程心电及脑电信号的非线性分析

目的 探讨肌电生物反馈过程中脑电、心电信号的变化规律及其非线性机制.方法 以线性及非线性动力学参数--近似熵和互近似熵分析肌电生物反馈过程中的肌电、心电和脑电信号的变化规律及其相互联系.结果 生物反馈训练可使肌电振幅明显降低[生物反馈组(0.38±0.15)μV、对照组(0.57±0.18)μV,P＜0.05]、心电近似熵明显升高[分别为:(0.80±0.19)、(0.64±0.08),P＜0.05];脑电近似熵以FP1和FP2导联升高显著(P＜0.05);FP1(生物反馈组0.48±0.16;对照组0.31±0.10)和FP2(生物反馈组0.43±0.14;对照组0.27±0.12)导联的脑电-心电互近似熵也显著升高(P＜0.05).结论 生物反馈过程中FP1和FP2导联(对应大脑额极)的电活动增加,提示额极可能是生物反馈过程中大脑有意识调节内脏功能的中枢整合部位;非线性分析有可能为阐明生物反馈的机制提供新途径.     

深圳市2007～2010年疟疾流行特征分析

目的分析深圳市近4年疟疾流行的特点,为科学制订防制策略提供依据。方法收集全市血检监测及疟疾发病资料,用描述流行病学方法分析疟疾病例在时间、地区和人群中的分布特点。结果 2007~2010年疟疾发病数为134例,平均年发病率为0.037/万;输入性疟疾病例为82例,占总病例数的61.2%;按地区分,报告病例数前三位依次是罗湖、宝安和龙岗区,分别为49、33和28例,南山、福田和盐田区分别为15、7和2例;病例主要集中在20~40岁年龄组,占总病例数的59.7%（80/134）;发病时间动态分布显示每年的6~8月为发病的高峰期;往来非洲、东南亚等疟疾高发地区的商务人员和从事野外作业的低收入群体为高危人群。结论深圳市本地疟疾疫情基本稳定,输入性疟疾的增加对深圳市的疟疾发病水平产生一定影响,应作为今后疟疾防治工作的重点。     

包虫病的免疫学诊断

免疫学实验是诊断包虫病的主要手段之一，随着免疫学和免疫学实验技术的不断发展，包虫病的免疫学诊断也获得了可喜的进步，用于包虫病免疫学实验的敏感性和特异性得到进一步提高，本文就近年来包虫病免疫学实验所有抗原的纯化，特异性抗原的分析和筛选以及各种免疫学实验的研究进展作一综述。     

阴道毛滴虫沉寂信息调节因子Sir2同源基因克隆和蛋白表达

目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究。方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coliBL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1034bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5。该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域。进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子。PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62000,与预期分子质量相符。用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Westernblotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33000处也能识别滴虫虫体全蛋白。结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命。阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础。     

白藜芦醇对缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响

目的:观察沉寂信息调节因子2激活剂-白藜芦醇干预对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及沉寂信息调节因子2表达的影响。方法:实验于2005-03/10在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。选用雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,即假手术组、缺血再灌注组和白藜芦醇组,每组10只。白藜芦醇组和缺血再灌注组大鼠结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血再灌注模型,30min后松开扎线,再灌注2h。假手术组只穿线不结扎。假手术组及缺血再灌注组给予二甲基亚砜-质量浓度为0.009的生理盐水1mL/kg,白藜芦醇组给予白藜芦醇10mg/kg,分别于缺血前15min及再灌注前1min以1mL/kg舌下静脉给药。实验结束取出心脏,应用免疫组织化学方法检测沉寂信息调节因子2同源物SIRT1及半胱氨酸蛋白酶3蛋白的表达。以背景灰度值进行标准校正,计算半胱氨酸蛋白酶3表达的相对量,其灰度值愈大则阳性强度愈大。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡情况,凋亡指数=穴视野内凋亡细胞个数/视野内所有心肌细胞个数雪×100%。结果:30只大鼠全部进入结果分析,每组10只,无脱失。①白藜芦醇组大鼠心肌细胞的SIRT1阳性细胞率显著高于缺血再灌注组(P=0.008),但低于假手术组(P=0.040)。②白藜芦醇组大鼠心肌细胞的凋亡指数显著低于缺血再灌注组(P=0.000),而缺血再灌注组则显著高于假手术组(P=0.000)。③白藜芦醇组灰度值为27.40±1.87;而缺血再灌注组灰度值为34.69±1.71,着色强度显著高于白藜芦醇组(t=9.098,P=0.000)。结论:白藜芦醇可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡,可能是通过增加沉寂信息调节因子2表达,抑制半胱氨酸蛋白酶3活性而发挥作用。     

卡氏肺孢子虫肺炎动物模型的实验观察

目的：建立卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)动物模型并观察其病理变化。方法：将Wistar大鼠随机分为A、B实验组(每组5只)和对照组(4只)。A、B实验组用地塞米松加四环素免疫抑制，对照组只用四环素。A组和对照组喂低蛋白质食物，B组喂高蛋白质食物。结果：A、B实验组病死鼠肺印片均查到PC包囊；A、B实验组病理组织学形态、感染数和死亡数无明显差异，对照组健康存活。结论：免疫功能低下时可致PCP，此模型的建立有助于PCP的研究。     

酵母双杂交诱饵蛋白LASS1合表达质粒的构建及鉴定

目的构建酵母双杂交系统诱饵蛋白大鼠LASS1融合表达质粒，为进一步筛选大鼠脑神经元内与LASS1p相互作用的蛋白奠定基础。方法应用PCR方法获得大鼠LASS1基因2个片段，分别克隆人酵母双杂交系统诱饵蛋白质粒载体pGBKT7，转染酵母菌AH109并检测重组质粒的自激活现象及毒性。利用Western印迹检测重组质粒在AH109的表达情况。结果LASS1基因的PCR产物片段大小分别为Flag（111bp）、Slag（109bp）；Western印迹结果表明2个重组质粒表达的蛋白均可以与抗c-Myc抗体在22ku处特异性反应；重组质粒转化酵母后无自激活作用。结论重组质粒pGBKT7-Flag、pGBKT7-Slag均能够存AH109内正确表达，可作为酵母双杂交系统诱饵蛋白使用。