CIM，mCIM 和MHT 筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的方法评价

目的 评估碳青霉烯类抑制法(carbapenem inactivation method,CIM)、改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和改良Hodge试验(modified hodge test, MHT )对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力。方法 以PCR检测碳青霉烯酶基因作为金标准,对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant enterbacteriaceae,CRE)和50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌,分别进行CIM,mCIM和MHT表型筛选试验,评估三种方法的表型筛选能力。结果 120株CRE中,93株携带碳青霉烯酶耐药基因,表型筛选试验显示,CIM,mCIM和MHT的敏感度分别是95.6%,96.8%和95.8%,特异度分别为72.7%,92.3%和50%。三种方法筛选碳青霉烯酶,差异有统计学意义(χ²=12.796,P<0.05)。与PCR结果相比较,CIM,MHT和mCIM的一致率分别为90%,95%和77.4%,Kappa值分别为0.898,0.949和0.771。mCIM和CIM试验与PCR高度一致。50株碳青酶烯类敏感的肠杆菌科细菌PCR检测和三种方法均为阴性。结论 三种表型筛选方法均有较高的敏感度,但mCIM较CIM,MHT具有更高的特异度和一致率,是筛选CRE的有效方法。     

抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。     

血清透明质酸和层粘蛋白检测在日本血吸虫性肝纤维化程度判断的作用

目的观察晚期日本血吸虫患者血清中透明质酸(HA)与层粘蛋白(LN)水平,探讨HA与LN在日本血吸虫性肝纤维化中诊断价值。方法358例晚期血吸虫患者,采用B超对肝纤维化程度进行分级。随机选取HBsAg阴性的早期肝纤维化患者39例、晚期肝纤维化患者29例,检测患者血清HA与LN水平。结果日本血吸虫性晚期肝纤维化患者血清HA与LN水平分别为(273.42±216.54)g/L、(152.48±43.32)g/L,其浓度显著高于早期肝纤维化组(P<0.01)和正常对照组(P<0.01)。早期肝纤维化患者血清HA与LN水平分别为(48.88±30.96)g/L、(125.05±19.72)g/L,与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论在日本血吸虫性肝纤维化患者中,血清HA与LN水平不能作为肝纤维化的早期实验室诊断指标,但是可以作为肝纤维化发展的重要标志物。     

日本血吸虫信号蛋白14-3-3在虫卵的定位及其免疫诊断价值初探

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在虫卵内的定位和重组Sj14-3-3(rSj14-3-3)的免疫诊断价值。方法从日本血吸虫尾蚴感染42 d的兔肝脏中分离虫卵,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Sj14-3-3基因在虫卵期的转录水平;兔肝组织石蜡切片免疫组化染色,观察内源性Sj14-3-3在虫卵内的分布和表达丰度。利用纯化的rSj14-3-3和可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从日本血吸虫成熟虫卵中检出760 bp左右的基因片断;免疫组化显示Sj14-3-3主要分布在虫卵内毛蚴的体壁和两边的侧腺。检测急性、慢性患者和正常人血清抗rSj14-3-3抗原的抗体阳性率分别为91.0%、78.9%、0.0%;上述标本中抗SEA抗体的阳性率分别为97.4%、88.9%和2.5%。结论用ELISA检测抗SEA抗体和rSj14-3-3抗体诊断血吸虫病具有高度的特异性和敏感性,而Sj14-3-3在成熟虫卵阶段高表达,可能是SEA的主要组分,具有实用价值。     

血清前白蛋白检测在晚期血吸虫病诊断中的临床意义

目的探讨晚期血吸虫病（简称晚血）患者血清前白蛋白（PA）的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白（ALB）,比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血清PA水平在不同的血吸虫性肝损害程度的差异均有显著性（P〈0．05）;而血清ALB水平在血吸虫性肝损害程度Ⅰ级与Ⅱ级间的差异无显著性（P〉0．05）,而在Ⅰ级与Ⅲ级间的差异有显著性（P〈0．05）。结论检测PA较ALB能更灵敏地反映血吸虫性肝损害程度,并对晚血肝损害的早期诊断、病情判断和预后有一定的参考价值。     

抗利什曼原虫药物在利什曼病患者的单核细胞和体外培养的THP1细胞内引起γ-干扰素受体1的上调

人类利什曼病在许多国家有很高的发病率和死亡率。WHO (2 0 0 0 )年报告 ,全世界有 12 0 0万患者 ,每年新发皮肤利什曼病病例 10 0万～ 15 0万 ,内脏利什曼病病例约 5 0万。传统的治疗药物是用含锑的复合物 ,如葡萄糖酸锑钠 (SAG)、葡甲胺、喷他脒、两性霉素B等。这些药物至今仍是治疗内脏利什曼病的首选药物。但在本病高发地区 ,尤其在印度比哈尔 ,抗药现象已成为严重的问题。γ 干扰素(IFN γ)是有效的抗利什曼原虫的细胞因子。IFN γ受体包括两个亚单位 :受体 1(IFNGR1)和受体 2 (IFNGR2 ) ,并在所有细胞表面表达。在体外U937…     

高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

目的 探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。 方法 将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。 结果 每个肝脏获得约1克左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。 结论 该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。     

日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶的重组表达及其在血吸虫生活史各阶段的表达分析

目的 目的 在大肠杆菌中原核表达、 纯化日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶 （rSjFBPA）, 观察其在血吸虫生活史各阶段 的表达。方法 方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板扩增rSjFBPA基因, 克隆至pET28a （+） 质粒后, 再转化入E. coli BL21。 含重组质粒的菌株经IPTG诱导后, 采用SDS?PAGE和Western blotting分析鉴定重组蛋白rSjFBPA是否表达, 用层析法纯 化rSjFBPA并用SDS?PAGE鉴定其纯度。同时, 用RT?PCR方法分析SjFBPA在血吸虫尾蚴、 童虫、 成虫和虫卵各阶段的表 达情况。结果 结果 经PCR扩增出目的基因, 含目的基因的TA克隆质粒经双酶切和测序鉴定, 证明插入片段与预期目的基 因序列相符。Western blotting结果显示, 表达后的重组蛋白可与His?tag单克隆抗体发生特异性反应。经镍亲和层析法 制备了纯化的重组SjFBPA蛋白, 纯化重组蛋白浓度达4 mg/ml。RT?PCR结果显示, SjFBPA在日本血吸虫尾蚴、 童虫、 成 虫和虫卵阶段均有表达。 结论 结论 SjFBPA基因被成功克隆和表达, 其在日本血吸虫尾蚴、 童虫、 成虫和虫卵各阶段均有表 达。