重组抗原联合用于弓形虫病IgG免疫诊断的研究

目的以纯化的重组弓形虫RH株主要表面抗原SAG1、次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HXG-PRT）和腺苷激酶（AK）作为诊断抗原，建立间接ELISA法检测抗弓形虫IgG抗体。方法诱导表达本实验室保种的SAG1／pET28a／BL21、HXGPRT／pET28a／BL21和AK／pET28a／BL-21，获得rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组抗原。分别用不同浓度的上述抗原包被聚苯乙烯酶标板，检测疑似弓形虫感染者血清。结果混合重组抗原ELISA法的最佳rSAG1包被浓度为500ng／ml、rHXGPRT和rAK均为200ng／ml；人血清稀释度为1：20；血清1：200稀释仍示阳性；特异性试验的抑制率为72．36％，变异系数11．2％。结论成功表达了弓形虫三种重组诊断抗原，并应用组合抗原（rSAG1＋rHXGPRT＋rAK）建立了ELISA检测方法，具有高度特异性和敏感性，本试剂具有弓形虫病辅助诊断价值。     

中国优势基因型弓形虫Wh3株诱导人单核巨噬细胞THP-1偏移极化的研究

目的 研究弓形虫Wh3株感染巨噬细胞后,诱导巨噬细胞偏移分化情况.方法 获取弓形虫Wh3株、RH株和ME49株,感染人巨噬细胞THP-1,感染后6、24 h分别收集培养上清液和巨噬细胞.ELISA检测培养上清液中巨噬细胞分泌的白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TGF-β等细胞因子浓度.qR...     

褪黑素对大鼠肝纤维化的影响及部分机制研究

目的探讨褪黑素(melatonin,MEL)对大鼠肝纤维化的影响及部分机制。方法 111只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸组(N-ac-etyl-L-cysteine,NAC)组、褪黑素低、中、高剂量组(剂量分别为2.5、5、10 mg.kg-1)。采用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)制备大鼠肝纤维化模型,同时腹腔注射褪黑素,HE染色和VG胶原纤维染色观察肝脏病理改变;生化法测定肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、超氧化物歧化酶(superox-ide dismutase,SOD)活性;RT-PCR法测定肝组织中α1(I)前胶原(α1(I)procollagen)mRNA表达;原位灌注加密度梯度离心法分离正常SD大鼠肝脏星状细胞,在培养的肝星状细胞中加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)进行刺激,用MTT法测定不同浓度的MEL对肝星状细胞增殖的抑制作用。结果和模型组比较,MEL(10 mg.kg-1)组肝纤维化评分较低(P<0.05),MEL能明显降低肝匀浆MDA含量,升高SOD、GPx活性,MEL(10 mg.kg-1)组、NAC组大鼠肝组织α1(I)型前胶原mRNA表达明显减少(P<0.05);培养的肝星状细胞经LPS刺激后A值增大,与LPS组相比,LPS+NAC组和LPS+MEL(0.1 mmol·L-1)组A值明显减小(P<0.05)。结论 MEL对大鼠肝纤维化具有改善作用,其机理可能与抗氧化、抑制前胶原基因转录和抑制肝星状细胞增殖有关。     

重组果糖二磷酸醛缩酶SjLAP和亮氨酸氨基肽酶SjFBPA用于日本血吸虫病的诊断和疗效考核的评价(英文)

目的评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值。方法异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/BL21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和纯化柱纯化rSjLAP和rSjFBPA蛋白。88只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,A、B和C组(各21只小鼠),D组(25只小鼠)。A、B和C组分别感染5、15和25条日本血吸虫尾蚴。D组为不感染对照组,在实验的第1天全部处死。A、B和C组在感染后第3、7、10、14、20、30和60天,分别处死小鼠3只,采眼球血制备血清,检测其抗体水平。采用单独或联合rSjLAP和rSjFBPA为抗原,ELISA法检测小鼠血清、急性血吸虫病(38份)和慢性血吸虫病患者(96份)血清中的抗体,以健康人(90份)血清为对照,同时检测华支睾吸虫病(33份)、卫氏并殖吸虫病(40份)和钩虫病患者(37份)血清,并检测急性血吸虫病患者吡喹酮治疗(60 mg/kg,2次/d×2 d)后1年的血清(36份)、慢性血吸虫病患者吡喹酮治疗(剂量,疗程同前)后1年...     

结膜吸吮线虫病一例

淮北市人民医院于2010年1月接诊了一名眼内寄生结膜吸吮线虫患者,现报告如下。 患儿：女,14个月,淮北市百善镇人。因“发现眼内不明虫体1天”于2010年1月22日就诊。患儿家长于两月前发现女儿左眼分泌物增多、喜揉眼,于当地卫生所就诊,未能明确诊断。2010年1月21日患儿父母发现女儿左眼外眦处有乳白色线状虫体活动,当地卫生所医生用棉签挑出虫体3条,并用生理盐水保存,未给患儿其他治疗。患儿家住淮北农村,周围居民饲养犬、猫较为普遍。     

大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达.     

芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响

目的 探讨芍药苷（paeoniflorin,PAE）对血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）刺激小鼠腹腔巨噬细胞（PMs）产生转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。 方法 研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24 h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10 mg/L SEA 5 ml,培养12 h,再分别加入不同浓度的PAE（0、7.5、15、30、60及120 mg/L）,继续培养12 h和24 h。RT-PCR与蛋白质印迹（Western blotting）分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。 结果 10 mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1（235.86±3.43 ng/L）,PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1 mRNA的表达（r=-0.827,P＜0.01）和TGF-β1蛋白的表达（r=-0.952,P＜0.01）。结论 PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。     

2010~2012年安徽池州地区TEM、SHV、CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶分布特征

目的 研究池州地区分离的大肠埃希菌(E.coli)、肺炎克雷伯菌(K.pn)质粒编码的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分子流行病学特征.方法 收集2010年9月至2012年4月期间从临床标本中分离的菌株,采用法国生物梅里埃(Bio-Merieus)全自动细菌分析系统鉴定,大肠埃希菌294株,肺炎克雷伯菌178株,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定的ESBLs表型筛选和确证试验,确定该地区ESBLs的发生率,并用质粒提取试剂盒提取ESBLs阳性菌株的质粒DNA,通过特异性引物,聚合酶链反应(PCR)及核酸电泳分析上述菌株所携带的耐药基因并进行基因分型.结果 该地区17.3%的大肠埃希菌和19.7%肺炎克雷伯菌产ESBLs,其中大肠埃希菌耐药质粒编码TEM型、SHV型和CTX-M型基因的百分率分别为49.0%、37.2%、39.2%,肺炎克雷伯菌分别为48.6%、25.7%、42.8%.结论 该地区产ESBLs菌株已经达到一定的比例,并且出现有些菌株同时携带两种或两种以上应的耐药基因,临床上严格控制,合理使用抗菌药物已经刻不容缓.     

刚地弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子基因敲除虫株的构建与鉴定

目的 构建并鉴定刚地弓形虫RH株巨噬细胞迁移抑制因子(Tgmif)基因敲除虫株。方法 设计刚地弓形虫RH株Tgmif的单向导RNA (sgRNA)和点突变引物，将pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒定点突变为针对Tgmif基因的pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒。构建含有Tgmif上游1 001 bp (Tgmif-up)、二氢叶酸还原酶-胸苷酸合成酶基因(dhfr-ts)和Tgmif下游1 011 bp (Tgmif-down)等3个片段的Tgmif供体质粒，从Tgmif供体质粒PCR扩增获得Tgmif供体DNA。将pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒和Tgmif供体DNA混合后电击转染野生型刚地弓形虫RH株(RH_WT)速殖子，用乙胺嘧啶培养7 d，筛选获得稳定表达乙胺嘧啶抗性的虫株并进行单克隆筛选，PCR扩增dhfr-ts上、下游同源臂和Tgmif鉴定Tgmif基因敲除单克隆株(RH_ΔTgmif)。提取RH_ΔTgmif和RH_WT株虫体蛋白，蛋白质免疫...