Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏树突状细胞对T细胞分化格局的改变

背景:Kinectin作为树突状细胞瘤苗可运用于肝癌临床免疫治疗.目的:检测kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞刺激T细胞亚群的分化情况.方法:运用免疫组化法检测kinectin-麦芽糖结合蛋白孵育的树突状细胞刺激增殖的T细胞中CD4+、CD8+ T细胞亚群活化情况,同时设立麦芽糖结合蛋白组、非致敏树突状细胞组及普通培养T细胞组作为比较.结果与结论:Kinectin-麦芽糖结合蛋白致敏树突状细胞刺激的T细胞组CD8+T细胞明显高于麦芽糖结合蛋白孵育树突状细胞刺激的T细胞组、非致敏树突状细胞刺激组及普通培养T细胞组(P < 0.05);各组CD4值之间、CD4/CD8值之间比较,差异无显著性意义(P > 0.05).经Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞能有效刺激自体CD8+ T淋巴细胞的增殖,Kinectin-麦芽糖结合蛋白作为肝癌相关抗原可通过致敏树突状细胞发挥较明显的抗肿瘤功能.     

融水苗族STR基因座D7S820、D13S317、D16S539的遗传多态性研究

目的：为了解广西融水苗族人群无关个体的3个短串联重复序列（short tandem repeat,STR）：D7S820、D13S317、D16S539遗传多态性分布情况.方法：用枸橼酸钠抗凝法采集融水苗族208份无亲缘关系的健康个体的血样（男102例,女106例）,酚-氯仿抽提法提取DNA,应用荧光标记复合扩增技术对血样DNA的3个STR基因座进行扩增,用ABI3100型遗传分析仪对扩增产物进行检测.结果：3个STR位点共检测出21种等位基因,62种基因型,频率分布分别在0.004 8～0.448 4和0.004 8～0.201 9之间,其中累积个人识别力0.998 6,累积非父排除率0.956 6,多态信息总量0.972 9;基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05）.结论：苗族群体的3个STR位点具有高度多态性和遗传稳定性,符合孟德尔遗传规律,可以应用于个体识别和亲权鉴定,可作为广西苗族的民族遗传学研究和法医学鉴定的基础数据.     

肝癌相关抗原Kinectin蛋白致敏树突状细胞诱导的CTL对肝癌细胞株杀伤作用的检测

目的 探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用.方法 体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP.从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量;将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力;同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果 体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP.PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强;同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达最高峰[为(65.00±1.47 )％],显著高于其他对照组(均P ＜0.001).结论 体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应.该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础.     

肝细胞癌中OY-TES-1基因mRNA的表达

 目的：检测OY-TES-1基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达水平。方法:建立实时定量PCR方法,检测56例HCC及37例配对癌旁组织中目的基因OY-TES-1及看家基因HPRT的表达,OY-TES -1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示,应用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析。结果:（1）经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1mRNA阳性率为73.21%（41/56）,癌旁组织阳性率为 64.86%（24/37）,有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1mRNA在HCC及癌旁组织中 的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）HCC中OY-TES-1mRNA水平明显高于对应的 癌旁组织（P＜0.05）,但与HCC患者的年龄、性别等临床资料无关。结论:OY-TES-1 mRNA在HCC中有较高的表达频率,其表达水平高于对应的癌旁组织,它有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原。OY-TES-1蛋白在HCC及癌旁组织中的表达及相关意义尚值得做进一步的研究。     

GCF2基因片段原核表达载体的构建与鉴定

目的 构建肝癌相关抗原GCF2基因片断(323～1 234 bp)原核表达重组质粒.方法 提取人肝癌组织总RNA,通过反转录酶合成cDNA;根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出人GCF2基因片断(编号2-5a),将此片段连接在克隆载体pGEM-T上进行测序,通过酶切、连接将...     

人肿瘤抗原分子分析的一种新技术

新近发展起的“血清学鉴定重组表达抗原克隆技术(serologicalidentificationoftumorantigensbyrecombinantexpressioncloning-SEREXapproach)”已成功在人恶性黑色素瘤,肾细胞癌,成胶质细胞瘤以及何杰金氏病,食道癌、肝细胞癌等证明多种新的肿瘤抗原,并从分子水平得到确定。本文介绍该技术的原理、程序。1.原理:利用病人自身血清含有肿瘤抗原的相应IgG抗体,筛选出自身肿瘤cDNA文库中与高滴度IgG抗体反应克隆,提交到PBK-CMV噬菌体内剪切后测定cDNA插入片段核苷酸的顺序。此法在致免疫的肿瘤蛋白与病人自身血清反应的基础上可直接确…     

三种MAGE基因在广西肝细胞癌中的表达

目的检测癌-睾丸抗原(CTA)基因MAGE-1、-3和-4在广西地区肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨CTA作为疫苗对HCC治疗的可行性.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对25例广西HCC患者癌组织中MAGE-1、-3和-4基因mRNA的表达进行检测;随机选择MAGE-1、-3和-4阳性的RT-PCR产物各2例进行DNA序列测定.结果 MAGE-1和-3表达率均为40%(10/25),MAGE-4表达率为16%(4/25).DNA测序结果表明RT-PCR产物为MAGE-1、-3和-4基因.统计学分析显示MAGE-1、-3和-4基因的表达与HCC组织分化程度及临床分期无相关性(P>0.05),与HBV感染有相关性(P<0.05);此外,MAGE-1和-3的表达与肿瘤大小及AFP水平均存在相关性(P<0.05).在所检测的标本中,56%的标本至少表达上述1种MAGE,24% 的标本至少表达2种MAGE;16% 的标本表达3种MAGE.结论 MAGE-1和-3在广西HCC中有一定频率的表达,能否用于HCC的免疫治疗值得深入探讨.     

中国毛南族和仫佬族群体STR的遗传差异性分析

目的研究中国毛南族和仫佬族6个短串联重复序列基因座（STR）：D2S1338、D8S1179、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11的遗传多态性以及他们与其他5个少数民族群体的遗传进化关系，丰富这两个群体的遗传学数据库。方法采用聚合酶链反应一短串联重复序列（PCR-STR）技术及ABI3100测序仪，研究中国毛南族（200例）和仫佬族（183例）无关个体6个STR位点的基因频率的分布特点。结果毛南族和仫佬族的6个STR位点分别共检出61和65种等位基因，其频率分布在0．0025，0．3200和0．0027～0．2842之间；共检出216和218种基因型．其频率分布在0．0050～0．1500和0．0055～0．1585之间；两者的平均H〉0．8，PIC〉0．8；累积DP达0．99999998，累积EP达0．9983以上。遗传距离和进化树结果显示：毛南族与仫佬族关系最近，彝族与水族关系最远；7个民族在进化树上被分为2类，彝族自成一类，其余6个民族聚为一类。结论毛南族和仫佬族的6个STR基因座具有高度遗传多态性的特点，实用价值较高，故以上数据可用于人类群体遗传学、法医学个体识别和亲子鉴定等研究；广西7个民族STR的遗传差异性与他们的历史文化和地理分布基本一致。     

广西金秀瑶族15个STR基因座遗传多态性

目的:了解广西金秀瑶族群体15个STR基因座的遗传多态性。方法:Chelex-100法提取样本DNA,荧光标记复合扩增基因座,ABIPrism(3100型遗传分析仪对扩增产物进行检测。结果:15个位点共检测出113种等位基因,基因频率分布在0.0029~0.5514;366种基因型,频率分布在0.0054~0.3657之间;符合Hardy-Weinberg平衡定律;杂合度(H)分布在0.5718~0.9286,个人识别力(DP)分布在0.7241~0.9601,累积个人识别力TDP为>0.9999999999,非父排除率(EP)在0.3658~0.8783,累积非父排除率CEP为0.999999998,多态信息量PIC分布在0.4953~0.8428。结论:广西金秀瑶族15个STR基因座除TPOX基因座外,其它基因座均属于高度多态性遗传标记。     

引物原位标记技术标记胎儿细胞的可行性探讨

目的探讨引物原位标记技术(PRINS)对脐血中胎儿有核红细胞(NRBC)进行标记的可行性。方法15例足月孕妇外周血经不连续密度梯度离心、制片,行PRINS技术标记胎儿细胞,显微镜下识别并计数。结果发现15例孕妇脐血细胞涂片中每例均有阳性杂交信号出现;阳性率为100%(15/15)。30张正常对照组的外周血细胞涂片中仅1例出现阳性杂交信号;阴性率为96%(29/30),假阳性率仅为4%(1/30)。结论实验结果提示PRINS法对于用脐血中分离到的胎儿细胞进行无创性产前诊断具有可行性。