大鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对骨髓基质细胞的影响

目的 研究缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)形态、活力、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、电生理和神经营养因子(NTFs)表达情况的影响.方法 将体外培养的大鼠BMSCs分别置于实验组、假手术组及空白对照组培养条件中,采用组织学、台盼蓝染色、免疫组织化学、膜片钳、半定量RT-PCR等方法,观察细胞形态改变,测定活性,鉴定NSE表达,记录全细胞膜电流,检测NGF、GDNF、BDNF和bFGF在各时间点mKNA表达情况.结果 实验组细胞形态发生神经元样改变,细胞活力良好,NSE阳性率、外向K+电流峰值及电流密度、NTFs的表达水平高于其他组,但未引出动作电位.结论 大鼠BMSCs在脑缺血再灌注损伤的细胞微环境中生长良好,可以诱导分化为神经元样细胞,但无神经元的电生理特征,NTFs的表达能力明显增强.     

人胆固醇酯水解酶在RAW 264.7巨噬细胞内瞬时表达对胆固醇代谢的影响

目的:以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为研究对象,探讨人胆同醇酯水解酶(Human cholesteryl ester hydrolase,hCEH)在鼠巨噬细胞内瞬时表达,对细胞内胆固醇代谢产生的影响.方法:利用FuGENE HD转染试剂将pEGFP-Nr-hCEH质粒,转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞.24h后将巨噬细胞与氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oX-LDL)(100mg/L),共同孵育48 h.荧光显微镜观察及Western blot检测细胞内CEH的表达.油红O染色观察细胞内脂滴堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇(Free cholesterol,FC)和胆固醇酯(Cholesterol esters,cE)含量.结果:转染72 h后,荧光细胞数最多,转染率接近40%.Westernblot检测显示,hCEH蛋白在鼠巨噬细胞内大量表达并部分抑制鼠胆固醇酯水解酶(Cholestery lester hydrolase,CEH)表达.转染hCEH组与OX-LDL诱导组相比,油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内总胆同醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量明显下降.结论:hCEH基因在RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞内成功表达,减少细胞内胆固醇水平,抑制泡沫细胞的形成.     

脑动静脉畸形的介入治疗进展

<正> 脑动静脉畸形(arteriovenous malformation,AVM)是一种胚胎时期脑血管发育异常所形成的先天性血管畸形,发病率为0.01%～0.5%,多表现为脑内出血、癫癎发作等,常发生于青少年。因其能引起神经系统多种功能障碍,尤其是大量脑内出血后引发5%～10%病死率和30%～50%致残率,严重威胁人类健康。近20年来,随着显微神经外科技术     

泌尿生殖道分泌物淋病奈瑟菌耐药性分析

目的了解深圳市宝安区部分地区患者泌尿生殖道分泌物淋病奈瑟菌感染性别差异及耐药谱,分析耐药菌株的流行特点,为临床制定合理用药方案提供依据。方法淋病奈瑟菌采用TM选择性培养基进行分离鉴定,药敏结果采用K-B法。结果 219例淋病患者中男性女性感染率分别为22.80%、5.40%,其对氟喹诺酮类和四环素耐药率均达80%以上,对青霉素耐药率为72.60%,对头孢曲松、头孢噻肟和大观霉素的耐药率分别为10.05%、13.47%和2.74%,未发现对头孢西丁耐药菌株。结论淋病奈瑟菌对大观霉素和头孢西丁的敏感性较高,可作为医生凭经验治疗的首选药物,对青霉素、四环素和环丙沙星高水平耐药,尽量少用以提高疗效和减少耐药菌株的产生。     

人参皂苷对恶性脑胶质瘤细胞BT325增殖的影响

目的:探索人参皂苷对恶性脑胶质瘤细胞BT325的作用。方法:MTT法测定人参皂苷对恶性脑胶质瘤细胞(BT325)增殖的影响,采用流式细胞仪检测其对恶性脑胶质瘤细胞(BT325)周期的影响。结果:10~100μg/mL人参皂苷可抑制恶性脑胶质瘤细胞(BT325)增殖,流式细胞仪检测人参皂苷阻止恶性脑胶质瘤细胞(BT325)在G1/S期。结论:人参皂苷对恶性脑胶质瘤细胞(BT325)增殖具有抑制作用。     

CD3AK细胞治疗恶性脑质瘤体外实验

目的：提高人脑胶质瘤过继免疫治疗的效果,探讨治疗脑胶质瘤的新途径。方法：用CD3和rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞,诱导、扩增新型抗胶质瘤效应细胞CD3AK细胞,并与LAK细胞在某些生物学方面进行了比较。结果两组效应细胞增曲线均于第6天达高峰,峰值可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05）;CD3AK细胞扩增倍数明显高于LAK细胞（P＜0．05）;两组效应细胞于培养的第6、8、10天所测得的杀伤胶质瘤细胞BT325活性可见,CD3AK细胞＞LAK细胞（P＜0．05或P＜0．01）。结论CD3和rIL-2具有协同增强作用,使CD3A细胞成为较LAK细胞增殖能力、杀伤活性更强的免疫效应细胞,且rIL-2用量减少,有胶质瘤的过继免疫治疗打下了理论基础。     

小鼠结缔组织生长因子基因克隆及其真核表达载体构建

背景:研究证实结缔组织生长因子在动脉粥样硬化血管平滑肌中呈高表达,构建结缔组织生长因子真核表达载体以特异性上调结缔组织生长因子在血管平滑肌内的表达是进一步通过细胞及动物实验研究其作用机制的基础.目的:克隆小鼠结缔组织生长因子基因、构建其真核表达载体,并在血管平滑肌细胞中瞬时表达.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2007-09/2008-04在辽宁医学院省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室完成.材料:1个月龄昆明小鼠10只.真核表达载体{pcDNA3.1(+)由辽宁医学院分子生物学实验室保存.方法:以小鼠肾脏总RNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应方法获得结缔组织生长因子(CTGF)目的基因,连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定测序,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体.主要观察指标:酶切测序鉴定重组体pcDNA3.1(+)-CTGF.将pcDNA3.1(+)-CTGF转入血管平滑肌细胞,Western观察结缔组织生长因子蛋白表达.结果:酶切、测序鉴定证实成功扩增出小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,Western检测证实,重组体转入血管平滑肌细胞后,细胞内高表达结缔组织生长因子蛋白.结论:成功克隆小鼠结缔组织生长因子目的基因并构建其真核表达载体,重组体能在血管平滑肌中表达.     

PHA、CD3、与IL-2协同诱导PBMC过继免疫治疗恶性脑胶质瘤的实验研究

目的 提高人脑胶质瘤过继免疫治疗的效果,探索治疗脑胶质瘤的新途径。方法 用植物血凝素（PHA）、抗CD3单抗（CD3）和IL－2共同诱导人外周血单个核细胞（PBMC）,诱导,扩增新型抗胶质瘤效应细胞PHA－CD3AK细胞,并与CD3AK细胞在某些生物学方面进行了比较。结果 两组效应细胞增殖曲线均于第6天达高峰,峰值可见,PHA－CD3AK细胞＞CD3AK（P＜0．05）;PHA－CD3AK细胞扩增倍数明显高于CD3AK细胞（P＜0．05）;两组效应细胞于培养的第6、8、10天所测得的杀伤胶质瘤细胞BT325活性可见,PHA－CD3AK细胞＞CD3AK细胞（P＜0．05）。结论 PHA、CD3和IL－2具有协同增强作用,使PHA－CD3AK细胞成为较CD3AK细胞增殖能力、杀伤活性更强的免疫效应细胞、且IL－2用量减少,为胶质瘤的过继免疫治疗打下了理论基础。     

骨髓间充质干细胞移植治疗35例脑卒中后遗症

目的研究应用骨髓间充质干细胞移植治疗脑卒中后遗症的疗效。方法 35例脑卒中后遗症患者被随机分入移植组和对照组,其中移植组每位患者接受3次静脉注射骨髓间充质干细胞,并分别于移植前及移植后3个月进行运动功能评定（Fugl-Meyer Assessment,FMA）。对照组不给予任何手术及药物干预治疗,并分别于就诊时及自然观察3个月后进行运动功能评定（FMA）。结果 FMA结果表明,干细胞治疗组患者移植后3个月的上肢运动、下肢运动、感觉、平衡功能均较前改善（P〈0.05）;而对照组3个月后的各项评定均无明显改善（P〉0.05）。结论骨髓间充质干细胞移植可以显著改善脑卒中后遗症患者的多项神经功能,从而提高患者生活质量。     

CTGF-siRNA 转染对血管平滑肌细胞MMP-2、 MMP-9表达的影响

目的 通过特异性下调结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF) 的表达,观察其对大鼠血管平滑肌细胞中金属蛋白-2(MMP-2)、金属蛋白-9(MMP-9) 表达的影响.方法 培养大鼠血管平滑肌细胞,免疫组化方法对细胞进行鉴定,用脂质体法将以CTGF 第483 号编码区为起始设计的小片段干扰核糖核酸(CTGF483-siRNA) 对细胞进行转染,Western blot 法检测细胞中结缔组织生长因子(CTGF)、MMP-2、MMP-9 的表达.结果 经免疫组化鉴定,细胞特异性染色呈阳性反应.转染组的CTGF 表达明显降低,MMP-2、MMP-9 的表达也受到抑制(P<0.05).结论 大鼠血管平滑肌细胞中下调CTGF 的表达,可以抑制VSMC 中MMP-2、MMP-9 的表达,延缓动脉粥样硬化的发展过程,有望成为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点.