载体介导的人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向RNA干扰

目的运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人DNA聚合酶β基因在支气管上皮细胞中的表达,为研究DNA聚合酶β在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备。方法利用分子克隆技术构建含pU6启动子的人DNA聚合酶β基因RNA干扰特异性绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFP-C1-U6-dsRNA”;以脂质体法将载体重组子转染人支气管上皮细胞,同时以空白细胞和空载体转染细胞作对照;在经G418筛选后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果,以蛋白印迹法分析转染后细胞中的DNA聚合酶β表达情况。结果在转染重组子的细胞中,DNA聚合酶β的表达明显下调,仅相当于正常细胞的17·3%。结论人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向抑制成功。     

结晶型硫化镍对人支气管上皮细胞PTEN基因和miR-22表达的影响

目的分析结晶型硫化镍(NiS)诱导转化人支气管上皮细胞第35代(16HBE-T35)及其前期第18代细胞(16HBE-T18)PTEN基因及miR-22的表达水平,探讨PTEN基因与miR-22在化学致癌过程中的相互关系。方法以16HBE-T35和16HBE-T18细胞为实验组,蒸馏水处理组分别为其相应的对照细胞(16HBE-N35和16HBE-N18),用茎环结构逆转录引物实时定量RT-PCR检测4种细胞miR-22成熟体表达量。运用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测四种细胞PTEN mRNA和蛋白表达量。结果 16HBE-T18细胞和16HBE-T35细胞中miR-22的表达水平分别是16HBE-N18细胞的(0.27±0.09)倍和(3.50±0.31)倍。16HBE-T35细胞的PTEN蛋白表达水平是16HBE-N35细胞的(0.48±0.26)倍,但16HBE-T18细胞和16HBE-N18细胞之间PTEN蛋白表达水平无明显差异。结论在NiS诱导的恶性转化细胞16HBE-T35中,PTEN蛋白表达水平下降,而miR-22表达水平增高。恶性细胞中,miR-22可能在转录后影响PTEN蛋白的表达。     

妇康喷雾剂的毒理学评价

妇康喷雾剂的毒理学评价王家骤，佘素贞，徐德祥，孙美芳，魏凌珍，纪卫东，高步刚妇康喷雾剂具有温肾壮阳、疏通经络、固敛收摄、解毒止痒功效，主治女性性冷淡、阴冷症及阴痒带下。为保障临床使用者的安全，对其进行了毒理学系列研究。１材料与方法妇康喷雾剂由蛇床子、...     

L-02肝细胞对氢醌所致DNA损伤耐受实验模型的初步建立

目的确定氢醌（hydroquinone,HQ）对L-02肝细胞的染毒剂量和染毒时间,从而为进一步的DNA损伤耐受机制研究提供科学依据。方法采用噻唑蓝（MTT）比色法测定不同浓度（0、5、10、20、40、80、160和320umol／L）的HQ于不同时间（6、12、24和48h）作用之后L-02肝细胞的相对存活率。结果在相同的作用时间（6、12或24h）条件下,在0-320umol／L范围内,随着HQ浓度的增加,各剂量组L-02肝细胞的存活率以剂量依赖性方式逐渐减少;其中160和320umol／L组L-02肝细胞的存活率与对照组相比较有明显地减少（P〈0．01）;而在48h时间组内,HQ染毒剂量达到80umol／L就可引起L-02肝细胞存活率的明显降低（P〈0．01）。在相同浓度（5、10、加和40umol／L）的HQ作用下,随着HQ作用时间的延长,各剂量组细胞的存活率之间差异没有统计学意义（P〉0．05）;当HQ染毒时间达到48h时,80、160和320umol／L的HQ染毒组L-02肝细胞的存活率与6h对照组比较有明显地减少（P〈0．01）。结论可以将80umol／L的HQ染毒24h作为L-02肝细胞耐受DNA损伤的最大剂量和最长时间的界限。     

NBSl基因8360G〉C（Glul85Gln）多态位点与南方人群肺癌的相关性

目的：研究DNA双链断裂修复基因NBSl编码区8360G〉C（Glul85Gln）多态与我国南方人群肺癌发病的关联。方法：应用病例对照研究方法,采用PCR—RFLP技术检测300例肺癌患者与正常对照8360G〉C多态位点的基因型．用SAS9．13软件分析该位点变异与肺癌发病的关系。结果：NBSl的8360G〉C基因型频率在肺癌与对照中的分布差异有显著性（P：0．0230）;携带GC变异基因型个体发生肺癌的危险性是GG基因型携带者的1．28倍（adjustedOR=1．28;95％CI：1．04—1．59;P：0．025）,携带cc变异基因型个体的危险性则是1．93倍（adjustedOR=1．89;95％CI=1．43—2．5l;P〈0．001）,且存在显著的等位基因剂量一效应关联（Ptrend=0．0049）。结论：NBSl编码区8360C变异基因型与我国南方人群肺癌发病有关,它可能是我国南方人群肺癌发病的一个遗传相关因素。     

胫骨平台骨折18例手术治疗分析

胫骨平台骨折多为严重暴力所致,常见于高处坠落伤、交通事故伤及日常摔伤。由于致伤力的大小、作用时间、伤者骨质的强度及受伤时肢体位置不同,骨折呈多种形态,如劈裂、压缩、粉碎骨折和单、双髁骨折,也可合并半月板、韧带损伤,如治疗不当极易造成残疾,因此多采用手术复位内固定。总结我科2001-01/2006-12收治的18例胫骨平台骨折,采用不同的手术方法及早期行膝关节功能锻炼,疗效满意,现报告如下。     

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的研究苯并(a)芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的基因和蛋白表达的改变,探讨苯并(a)芘致癌的分子机制.方法应用含4096条人类全长基因的cDNA芯片检测反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因表达谱的变化;应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster2D 3.10分析反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点.结果BPDE诱发的恶性转化细胞与阴性对照细胞比较,cDNA芯片结果显示差异表达基因有143条,其中52条基因在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达增高,91条基因在恶性转化细胞中表达降低;二维凝胶电泳显示有72个蛋白斑点出现表达差异,其中44个蛋白斑点在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达升高,28个蛋白斑点在恶性转化细胞中表达降低,对其中7个表达明显差异的蛋白斑点的鉴定显示,原癌基因v-erbb2同源3、锌指蛋白127、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、KIAA0471蛋白在恶性转化细胞中高表达,而钙结合蛋白5、锌指蛋白Aiolos、Kelch样蛋白3在恶性转化细胞中低表达.结论反式-BPDE诱发16HBE恶性转化的基因表达谱和蛋白表达谱发生了显著的变化,这些表达改变的基因和蛋白可能参与了BPDE诱发细胞恶变的过程.     

SPSS软件在医学统计学教学中应用的探讨

目的 探讨SPSS软件对医学统计学教学的怍用。方法 教研室自1999年起在研究生、本科生的医学统计学教学中结合SPSS软件进行计算机辅助教学实践。结果 使用SPSS软件辅助医学统计学教学，激发了学生的学习积极性，提高了学生对实际资料的统计分析能力，明显地提高了教学效果。结论 使用SPSS软件来辅助医学统计学教学的方法对提高医学统计学的教学效果有重要的意义，值得推广。     

镉恶化转化16HBE细胞中核苷酸切除修复基因的表达

目的 探讨氯化镉恶性转化人支气管上皮(16HBE)细胞过程中核苷酸切除修复基因ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白动态变化规律.方法 用反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞不同阶段(第5、15、35代细胞及成瘤细胞)ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着转化代数的增加,ERCC1基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,到第35代细胞后表达明显下降(P＜0.01);而ERCC2基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镉化物的致癌机制可能与ERCC1基因表达水平下调有关.     

叶绿酸抑制细胞恶性转化的基因表达分析

目的 采用cDNA微阵列技术探索人支气管上皮细胞经叶绿酸抗转化处理后基因的差异表达。方法 人支气管上皮细胞株16HBE分别经二羟环氧苯并芘（BPDE）单独处理及叶绿酸与BPDE联合处理后，提取2种细胞的总RNA，逆转录合成cDNA并以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP荧光素分别标记制作探针。探针混合后与含4000个人类基因的芯片杂交。以ScanArray4000扫描仪扫描芯片，以GenPixPro 3．0软件分析荧光信号，然后对差异表达的基因进行生物学信息分析。结果 叶绿酸与BPDE联合处理的细胞样与BPDE单独处理的细胞样比较呈显差异表达的基因有106个，其中67个(63．9％)下调，另39个(36．8％)上调。结论 叶绿酸的抗转化活性与应激反应基因，免疫相关基因，DNA合成和修复基因，代谢相关基因等多类基因的调节有关。