结晶型硫化镍诱发细胞恶性转化过程中基因组总体DNA甲基化的改变

Objective To observe the effect of crystalline NiS on genome DNA methylation profile in in vitro cultured cells.Methods 16HBE Cells were treated with crystalline NiS at 0.25,0.50,1.00 and 2.00 μg/cm2 for 24 h and three times at total.DAC treatment was given at 3 μmol/L for 72 h.5-mC immunofluorescence and SssI emthyltrasferase assay methods were applied to investigate if the hypomethylation of genome DNA involved.Results The results of 5-mC immunofluorescence showed that the fluorescence intensity of NiS-treated cells were decreased in some degree, and transformed cells were decreased dramatically.By the SssI methylase assay, an average of (81.9 ± 7.3 )% methylated CpG were found in negative control cells.By contrast, ( 77.9 ± 6.2) %, ( 75.3 ± 6.8 ) %, ( 59.5 ± 4.9 ) %, ( 67.4 ±5.1 ) % methylated CpG were observed in cells treated with NiS for three times at dosage of 0.25,0.50,1.00and 2.00 μg/cm2 which were abbreviated as NiS0.25, NiS0.50, NiS1.00, NiS2.00 respectively.The ANOVA analysis results showed that there was a significant difference in the 5 groups above ( F = 124.95,P ＜0.01 ).The results of Dunnett-t test showed that the methylated CpG of both group NiS1.00 and NiS2.00were significantly decreased compared with the negative control group(t values were 7.64,4.89 respectively,P ＜0.01 ).For methylated CpG, (46.2 ±4.1 ) % and (43.6% ±4.3)% were observed in NiS-transformed cells (NSTC1 and NSTC2) which were dramatically decreased compared with the negative control group(t values were 12.79,13.56 respectively, P ＜ 0.01 ).Conclusion Genomic DNA methylation levels were decreased during NiS induced malignant transformation.     

核因子-κB1基因启动子区多态性与广东地区鼻咽癌的关联研究

目的 探讨核因子-κBl (NFKB1)基因启动子区-94ins/delATTG多态与鼻咽癌易感性的关系.方法 应用病例对照研究的方法,采用TaqMan基因型检测法对300例鼻咽癌原发病例和300例健康对照进行基因型检测,运用SAS9.13软件对研究位点基因型与鼻咽癌进行关联分析.结果 NFKB1基因-94ins/delATTG多态位点基因型分布在鼻咽癌病例和对照组中的差异有统计学意义(P=0.01),且鼻咽癌的发病风险随着-94ATTTGins等位基因个数呈显著的剂量效应关系(Ptrend=0.003),以-94del/delATTG基因型为参照,-94ins/insATTG基因型携带者发生鼻咽癌的危险性增高(Adjusted OR=2.02,95％CI=1.26～3.23),-94insATTG等位基因携带者发生鼻咽癌的危险是-94del/delATTG的1.65倍(Adjusted OR=1.65,95％CI=1.09～2.49).结论 NFKB1基因启动子区-94ins/delATTG多态与鼻咽癌相关,该位点insATTG等位基因可能是鼻咽癌的一个遗传易感基因.     

反式—BPDE诱发人支气管上皮细胞系P53基因突变的研究

目的 检测苯并（a）芘的代谢产物反式－BPDE诱发的人支气管上皮细胞系P53基因突变,探讨苯并（a）芘在人肺癌发生中的作用。方法 用银染PCR－SSCP方法检测P53抑癌基因第5、6、7、8外显子的突变情况。结果 经反式－BPDE处理的人支气管上皮细胞系,20d,后P53基因第8外显子出现点突变。结论 结果提示,P53基因突变可能是苯并(a)芘诱发肺癌的早期分子事件。     

反式二羟环氧苯并(a)芘所致人支气管上皮细胞POLK基因高表达

目的观察不同剂量反式二羟环氧苯并(a)芘(anti-BPDE)处理对人支气管上皮细胞(16HBE)POLK基因表达的影响。方法分别以0.25、0.50、1.00、2.00μmol/L的反式-BPDE1次或3次处理16HBE细胞,采用TaqmanMGB探针实时定量聚合酶链反应方法相对定量POLK和POLZ基因表达,同时对反式-BPDE转化的16HBE及肺癌H1299细胞POLK基因表达进行了分析。结果反式-BPDE1次处理及3次处理可诱导正常16HBEPOLK基因高表达。反式-BPDE转化16HBE和肺癌H1299细胞POLK基因表达明显增高,分别是正常16HBE的2.25和5.49倍。结论反式-BPDE处理可致16HBEPOLK基因高表达。     

前列腺癌的Gleason评分及PSA、PAP、P504S免疫表达分析

目的分析转移性与非转移性前列腺癌的Gleason评分及免疫表达的差异,为临床护理提供依据。方法选取我院泌尿外科收治的经病理组织形态学确诊的无转移性前列腺癌患者45例和转移性前列腺癌患者36例,对其前列腺组织标本的Gleason评分及相关标记物PSA、PAP、P504S的免疫表达进行分析。结果转移性前列腺癌患者的Gleason评分[（7．36±1．22分]高于无转移性患者的评分[（6．55±1．12）分],经秩和检验,差异有统计学意义（P〈0．05）。≥71岁患者的免疫组化PSA、PAP含量≥（＋＋）的阳性患者多于≤70岁的患者,差异有统计学意义（P〈0．05）。81例前列腺癌中,71例P504S呈阳性表达,占87．7％。结论Gleason评分及PSA、PAP、P504S的免疫表达,能较准确地评估病情,促进护理随访和咨询质量。     

二氧化硅对人支气管上皮细胞TGF—β1基因产物表达的影响分析

目的分析人支气管上皮细胞（16HBE）在二氧化硅（SiO2）粉尘染毒后TGF-β1基因产物的表达情况,为探索矽肺新的治疗途径提供基础资料。方法以16HBE作为靶细胞,以灭菌SiO2粉尘配置30μg／ml及60μg／ml两种不同浓度的悬浮液（以含10％FBS的DMEM培养基定溶）,以不同浓度的SiO2粉尘悬液分别培养16HBE靶细胞8h、16h、24h、32h,各做三个平行实验孔,同时,做10％FBS的DMEM空白对照;以免疫细胞化学方法检测TGF—β1基因产物的表达。结果在经30ug／ml及60ug／mlSiO2粉尘悬浮液培养8h、16h、24h、32h后,各实验孔16HBE细胞扫描灰度值均较对照组细胞低,结果提示,16HBE细胞经SiO2粉尘染毒后TGF—β1基因产物表达增加。结论体外实验条件下,SiO2粉尘可上调16HBE细胞TGF-β1基因产物的表达。     

硫化镍转化人支气管上皮细胞基因差异表达芯片的研究

背景与目的近年研究发现硫化镍(NiS)可引起人支气管上皮细胞(humanbronchialepithelialcell,16HBE)发生恶性转化及转化细胞致癌性,其机制可能与NiS引起基因突变、多种转录因子的异常表达有关。为此,本研究利用NiS恶性转化的体外培养细胞模型,用cDNA微阵列技术研究经NiS转化后的16HBE细胞基因的差异表达,从基因组水平探讨NiS所致细胞恶变的相关基因差异改变。方法分别提取16HBE和经NiS单独处理发生转化的NiS16HBE细胞的总RNA,逆转录合成cDNA并以Cy3dCTP和Cy5dCTP荧光素分别标记制作探针。探针混合后与含4000个人类基因的芯片杂交。以ScanArray4000扫描仪扫描芯片,以GenPixPro3.0软件分析荧光信号,然后对差异表达的基因进行生物学信息分析。结果NiS16HBE细胞样本与16HBE细胞样本比较,呈现差异表达的基因有151个(3.78%),其中81个(53.64%)上调,70个(46.36%)下调。结论NiS的转化作用与应激反应基因、免疫相关基因、DNA合成和修复基因、代谢相关基因、原癌基因和抑癌基因等多类基因的异常表达有关。     

叶绿酸对恶性转化细胞周期及体外生长的影响

目的研究叶绿酸对反式7，8二羟9，10环氧苯并(a)芘(反式BPDE)恶性转化人支气管上皮细胞系(16HBE)体外生长及细胞周期影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(FCM)，同时观察正常人支气管上皮细胞(16HBE)、反式-BPDE恶性转化细胞系、叶绿酸抗反式-BPDE恶性转化细胞系生长曲线和生长周期的变化以及经叶绿酸处理后的影响。结果BPDE恶性转化细胞系增殖活性明显大于正常细胞系(16HBE)，经100μmol／L叶绿酸抗BPDE恶性转化细胞组增殖活性较转化组有一定降低。经同样浓度叶绿酸处理的正常细胞组，未见降低细胞增殖活性作用。反式-BPDE恶性转化细胞组G0／G1期细胞周期比例明显少于正常组细胞。但经叶绿酸抗转化组G0／G1期比例有所提高，而经同样浓度叶绿酸处理的正常细胞组G0／G1期细胞周期比例无明显改变。结论对正常细胞无影响的一定浓度叶绿酸有抑制反式-BPDE恶性转化人支气管上皮细胞增殖活性的作用，并通过提高恶性转化细胞G0／G1期细胞周期比例而影响细胞周期的进程，从而改变恶性细胞的增殖和分化。     

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的 研究苯并（a）芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘（反式-BPDE）诱发人支气管上皮细胞系（16HBE）恶性转化的基因和蛋白表达的改变，探讨苯并（a）芘致癌的分子机制。