多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节

目的 构建表达多药耐药相关蛋白（MRP）反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药（MDR）的作用机理。方法 以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRPmRNA5′端（含起始子密码）及MRP mNRA3′端（含终止子密码）片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体。通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌（SCLC）耐阿霉素（ADR）的细胞株GLC4／ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载（MO）、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA（Ma),MRPmRNA3′端为靶区的反义RNA（Mb)的3个细胞克隆。检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结果 经RT－PCR检测,外源片段可获稳定表达。Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14．0％和83．0％,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞MO相比,分别下降9．5％和28．4％。虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR。对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义。     

Angiostatin K (1-3)基因的原核表达和蛋白活性测定

目的 获得angiostatin K(1-3)基因的原核表达蛋白,检测其活性。方法 构建和鉴定pBV220-AK（1-3)载体并在大肠杆菌DH5α内表达,诱导后用SDS-PAGE分析、经亲和层析纯化后行Western Blot鉴定,以牛微血管内皮细胞抑制实验和鸡胚绒毛膜尿囊膜实验验证其生物学活性。结果 获得抑制牛微血管内皮细胞生长活性的angiostatinK(1-3)原核表达蛋白,其蛋白重量占菌体总蛋白的7%。结论 该项研究为抗血管生成药物治疗实体瘤奠定了基础。     

计算机辅助立体定向术中放化疗治疗脑深部肿瘤的临床试验研究

目的 报道P32Y90ACNU对42例脑深部肿瘤的治疗。方法 利用计算机立体定向术,置管定期放、化疗。结果 肿瘤消失30例(71.43％);肿瘤缩小(>50％)9例(21.46％);无变化2例(4.76％);肿瘤增大1例(2.38％)。结论 利用计算机立体定向术中置导管放化疗是治疗脑深部肿瘤方便、操作简单且行之有效的方法。     

全外显子组测序技术在产前诊断中应用的专家共识

大规模的前瞻性研究表明,在染色体核型和染色体拷贝数分析均未见异常的胎儿中,产前全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)可将结构异常胎儿的诊断率提高8.5%~10%。产前WES目前已经在国内外逐步开展,但由于胎儿表型评估的局限性、产前诊断的预测性质以及伦理学问题等,如何合理、规范地应用产前W...     

五味沙棘散对卵清蛋白诱导的过敏性支气管哮喘大鼠的保护作用及机制

目的 探究五味沙棘散对卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的过敏性哮喘大鼠的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（0.5 mg/kg）组和五味沙棘散（0.5、2.0 g/kg）组,建立OVA诱导的大鼠早期支气管哮喘模型,苏木素-伊红（HE）和Masson染色观察支气管病理情况及纤维化程度;免疫组化检测支气管间隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）的表达和分布;ELISA检测血清中免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）和白细胞介素-13（interleukin-13,IL-13）水平;亚甲基蓝法和WSP-1荧光探针法测定血清中硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）水平。建立CdCl₂诱导的支气管上皮BEAS-2B细胞损伤模型,MTT法检测细胞活性;Hoechest 33342染色法观察细胞核形态变化;MitoSOX染色检测细胞线粒体活性氧（mitochondrial reactive oxygen species,mtROS）水平;Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、核因子红细胞系2相关因子（nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2）和Kelch样ECH关联蛋白1（Kelch like ECH associated protein 1,Keap1）蛋白表达。结果 五味沙棘散能够减少支气管黏膜上皮细胞脱落和黏液分泌（P＜0.001）,降低胶原纤维的沉积和Cx43的表达及分布（P＜0.05、0.01、0.001）,降低血清中IgE、IL-13水平（P＜0.05）,升高血清中H₂S水平（P＜0.05、0.01）。五味沙棘散含药血清呈剂量相关性地抑制CdCl₂诱导的BEAS-2B细胞凋亡及mtROS水平（P＜0.01、0.001）,上调Caspase-3和Nrf2蛋白表达（P＜0.05、0.01）,下调Keap1蛋白表达（P＜0.01）。结论 五味沙棘散对OVA诱导的哮喘大鼠和CdCl₂诱导的支气管上皮细胞凋亡均具有保护作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1信号通路有关。     

应用单层厚块单次激发快速自旋回波序列产前显示胎儿畸形

目的 利用磁共振水成像的原理,采用单次激发厚层快速自旋回波(single-shot turbo spin echo, SSTSE)重T2加权序列行磁共振胎儿成像(magnetic resonance fetography, MRF),分析其成像质量及影响因素.评价其作为胎儿三维重建的一种替代方法的可行性.方法 2006年4月至2008年2月间,因产前超声筛查诊断或怀疑胎儿存在先天性缺陷以及染色体检查异常的孕妇164例,169个胎儿,羊水正常137例,其中中孕38例,晚孕99例,羊水过多18例,羊水过少9例,羊水正常者头位胎104例,臀位胎29例,横位胎4例,在常规胎儿MRI检查基础上行MRF.对MRF图像进行质量评价,分析图像质量与孕周、胎位和羊水的关系及图像质量降低的原因.结果 所有胎儿常规扫描和MRF成像均一次成功.51例胎儿体内的含液器官病理性扩张或萎陷,28例胎儿病理性积液,10例胎儿囊性病变,15例胎儿体表畸形和17例肢体畸形,以及16例母体肾盂积水和13例囊性病变在穿透胎儿表面后,也同时显示.MRF成像质量与胎儿孕龄、胎位、羊水量无统计学差异(P>0.05).运动伪影、卷积伪影、母亲膀胱过度充盈可使图像质量降低.结论 MRF提供了一种具有三维立体感的胎儿整体图像,能在1幅图像上同时捕捉胎儿的解剖和病理,具有快速、多方位、多视角、多次重复优质成像的特点,可以作为胎儿三维成像的一种替代方法.     

股骨转移性肿瘤的手术治疗

目的探讨手术治疗股骨转移性肿瘤的效果及意义。方法回顾分析我院1991-2005年经手术治疗的股骨转移性肿瘤患者临床资料,资料完整者共29例,其中男16例,女13例,年龄47~72岁,平均年龄62.3岁,转移灶在股骨颈4例,股骨粗隆部5例,股骨粗隆下8例,股骨干9例,股骨髁上3例;其中伴发病理性骨折18例。手术采取瘤段骨切除人工假体置换术12例,肿瘤切除骨水泥填充加股骨交锁髓内钉固定11例,不处理肿瘤单纯内固定的6例。结果术后所有患者疼痛明显缓解或消失,16例个人生活能够自理,8例能够基本自理,5例仍需家人护理照顾。随访4个月~2年,行瘤段骨切除并人工假体置换术者,术后5个月死亡1例,5~6个月3例,7~12个月死亡4例,12~18个月死亡2例,存活2年以上2例;行肿瘤切除交锁髓内钉内固定者,术后4个月死亡1例,4~6个月4例,7~12个月死亡3例,12~18个月死亡2例,存活2年以上1例;仅行单纯内固定者,术后4个月死亡2例,4~6个月4例。结论对于股骨转移性肿瘤宜早期积极手术,采用人工假体置换或内固定手术可以缓解疼痛,部分恢复患肢功能,便于减少长期卧床所致并发症,提高患者生存质量。     

TNF-α抑制剂在免疫检查点治疗中的应用研究进展

免疫检查点抑制剂显著提高了晚期恶性肿瘤患者的预后,但同时也会出现由免疫系统激活引起的脱靶毒性,即免疫相关的不良事件(irAEs).严重的irAEs将导致免疫治疗暂时或永久性终止,极大影响了其在临床中的应用.目前临床上处理irAEs主要应用糖皮质激素,一方面严重的不良反应对患者身体造成严重的损害,另一方面大量应用糖皮质激...     

心肺复苏中心肌损伤及心肌梗死的诊断与鉴别

目的 观察心肺复苏(CPR)患者外周静脉血中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)及心电图ST段抬高的动态变化及冠状动脉(冠脉)造影结果 ,探讨患者CPR后心肌损伤及心肌梗死的诊断及鉴别方法 .方法 选择26例CPR且自主循环恢复(ROSC)>24 h的患者,于入院后CPR 0(即刻)、4、8、12、16、20 h抽取外周静脉血检测CK-MB、cTnI活性,ROSC后每隔2 h复查心电图,CK-MB、cTnI活性升高并出现心电图ST段抬高,可疑ST段抬高型心肌梗死(STEMI)者,即进行冠脉造影及介入治疗;无ST段抬高者(C组,5例)不进行冠脉造影检查.冠脉造影显示冠脉血流通畅、未发现梗塞者列为A组(15例);若冠脉主干或分支发现梗塞.出现心肌梗死.即列为B组(6例);D组为15例健康体检者.对各组患者CK-MB、cTnI的动态变化及心电图ST段抬高的程度进行统计学分析.结果 A组CK-MB、cTni于CPR 4 h开始升高,CK-MB于12 h达峰值,cTnI于16 h达峰值,之后逐渐下降;ROSC即刻心电图出现多导联ST段抬高,之后迅速下降,于ROSC 2 h ST段降幅多超过50%.B组CK-MB、cTnl于CPR 4 h开始升高,20 h内逐渐升高;心电图于ROSC即刻出现多导联ST段抬高,2 h后升高的ST段进一步上移.C组CK-MB、cTnI于CPR后逐渐升高,分别于CPR后12 h、16 h达峰值;心电图ST段压低或无明显偏移.D组CK-MB、cTnI在正常范围内表达,心电图ST段无明显偏移.结论 CPR过程中,患者出现了不同程度的心肌损伤,部分患者出现了急性STEMI.CK-MB、cTnI在CPR后逐渐升高,但对心肌损伤与STEMI的早期鉴别无特异性价值.相对而言,心电图具有较早的预测价值:抬高的ST段于ROSC 2 h回降>50%以上,或CK-MB、cTnI酶峰分别前移至CPR 12 h或16 h内多提示心肌损伤;而ROSC 2 h后ST段无回降趋势或CPR 20 h内CK-MB、cTnI逐渐升高多提示合并STEMI,此时需行紧急溶栓或介入治疗.     

Trizivir^TM治疗80例HIV／AIDS患者临床研究

目的1．评估Trizivir^TM（AZT＋3TC＋ABC，TZV）治疗中国HIV／AIDS患者的疗效和安全性；2．HIV／AIDS患者的依从性；3．考察中国社区内HIV／AIDS患者服用固定剂量三联片治疗的可行性。方法80例HIV／AIDS患者进入治疗组。是一项单中心、开放式、无对照的临床试验。患者接受36个月的治疗，在治疗1，2，3，4，5，6，9，12，18，24，30和36个月按时到门诊随访。结果57例（71．3％）患者完成36个月治疗随访，23例（28．7％）在治疗过程中因药物不良反应、机会性感染复发、依从性不好或治疗失败而退出。57例治疗36个月后，CD4＋ T淋巴细胞计数平均增加252／μL，93．0％的患者显示病毒载量〈400拷贝／mL。在36个月的治疗期间，有4例患者出现耐药。结论TZV抗病毒效果显著，对于病毒载量〉500000拷贝／mL的患者也有很好的效果，CD4＋T淋巴细胞计数均显示明显增加。TZV不良反应较少，与其他药物的相互作用较少，服用方便，患者服药依从性好，对某些患者尤其有毒瘾者不失为一种可以选用的治疗方案。