烧伤小鼠IFIT1表达的初步观察

目的 观察烧伤小鼠干扰素诱导表达蛋白IFIT1的表达变化,初步探究其表达变化的原因.方法 实验小鼠致TBSA 15%Ⅱ度烧伤,1 d及7 d后处死,取肝、肺及脾组织.脂多糖掺入小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7的培养基中,至终浓度0.1～1.0μg/ml,作用6 h.提取组织及细胞RNA,进行半定量逆转录-聚合酶链式反应,提取组织及细胞裂解上清,进行免疫印迹检测.结果 小鼠肝、肺、脾组织IFIT1的转录在烧伤后1 d升高,伤后7 d恢复至伤前水平;肝、肺、脾IFIT1的蛋白水平在伤后1 d一致升高,伤后7 d仍能检出升高.体外实验,细菌脂多糖显著激活RAW264.7细胞的IF-IT1转录及蛋白表达.结论 烧伤小鼠伤后早期IFIT1表达迅速升高,此变化与同期的内毒素血症引起的细胞应激有关.     

大鼠严重创伤后早期下丘脑c-fos和CRH mRNA的表达

目的 探讨严重创伤后下丘脑c-fos蛋白和CRH mRNA表达变化的关系。方法 以大鼠右肺中部重度撞击伤加右股骨中段骨折为模型，采用Western印迹和RT-PCR方法观察大鼠下丘脑组织内c-fos蛋白和CRH mRNA表达变化。结果 伤后下丘脑c-fos含量30min达高峰，以后迅速下降；CRH mRNA表达的变化明显迟于c-fos的变化，创伤后下丘脑CRH mRNA含量于2h增加最为明显，然后持续增加，12h达最高。结论 严重创伤后早期下丘脑迅速增加的c-fos对CRH mRNA的上调可能起关键的作用。     

羊膜负载骨髓间充质干细胞与表皮细胞对放创性皮肤损伤促愈合研究

目的探讨治疗放创性全厚皮肤缺损创面的方法及效果. 方法贵州小香猪8只,每只背部脊柱两侧均有放创性全层皮肤缺损圆形创面(Ф3.67cm)各3个,共48个创面.将经处理的人羊膜(human amniotic mambrane, HAM)分别负载自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)和表皮细胞,移植到其左侧24个创面作为实验组(A组);以单纯无种植细胞的HAM敷盖其右侧前16个创面(B组);以单纯油纱布敷盖其右侧后8个创面(C组).B、C作为对照组.观察移植后1～3周内各组创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色及vWF免疫组织化学检测.用图像分析法测算各组各时间点创面平均面积(cm2),并计算其愈合百分率. 结果 C组于伤后 22～23天愈合,B组于伤后19～21天愈合;A组于伤后15～17天愈合,较B、C组分别提前6～7天和5～6天,愈合质量好.移植15～17天,A组与B、C组创面平均残留面积及愈合面积百分率比较,差异有统计学意义(P＜0.01). A组创面的新生上皮已完全覆盖整个创面,肉芽组织生长旺盛,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量丰富,可见胶原沉积;B、C组创面仍见许多炎性细胞浸润,肉芽组织中vWF、成纤维细胞和毛细血管含量少,胶原沉积不明显. 结论 HAM负载自体MSCs和表皮细胞植入对放创性全厚皮肤缺损创面有较好的促愈合作用,愈合质量较高.     

外周血MSCs的分离培养及对G-CSF的动员反应

目的建市多种种属外用血间充质干细胞（MSCs）的分离培养方法，探讨其对粒细胞集落刺激因子（G—CSF）的动员反应。方法用percoll（1．131g/mL）分离多种种属外周血单个核细胞，进行贴壁培养MSCs。以G-CSF作为动员剂，培养骨髓和外周血来源的MSCs，计数动员前后的成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）。结果对多种种属进行外周血MSCs分离培养，成功率不同。在本实验条件下．可以稳定的直接分离培养出大鼠外周血的MSCs。G—CSF动员后，骨髓来源MSCs的CFU-F数昔显著高于对照组（P〈0．01）；外周血来源MSCs的CFU-F数量也显著高于对照组（P〈0．01），接近4倍。结论不同种属外周血MSCs分离培养难易不同，其直接原因是生理条什下外周血中存在的MSCs量少导致的。G—CSF可以有效地动员大鼠骨髓和外周血MSCs。     

继发性胰腺感染对重症胰腺炎患者预后的影响

目的　观察继发性胰腺感染 (SPI)对重症急性胰腺炎 (SAP)患者预后的影响。方法　回顾性研究 1980年 1月 1日— 1999年 12月 31日收治的 6 0例 SAP患者的临床资料 ,分析与 SPI发生相关的情况。结果　 6 0例 SAP患者发生 SPI2 9例 ,未发生 SPI(NSPI) 31例 (4 8.3%比 5 1.7% ) ,两组患者在性别、平均年龄、Ranson分值、中华医学会 (CMA)高危因素分值等方面没有明显差异 ,但 SPI患者的平均住院时间、住院费用、急性生理与慢性健康状况评价体系 (APACHE )分值、发热天数、院外滞留时间、白细胞升高持续天数、发病到排便的时间、手术次数等均明显高于 NSPI患者。其中 SPI患者死亡 7例 ,NSPI患者死亡 1例 (病死率 2 4 .14 %比 3.2 3% )。病原菌调查发现 ,SPI组单一感染 14例 (占 4 8.3% ) ,混合感染 15例 (占 5 1.7% ) ;病原菌种类 :肠杆菌科 2 7例 (埃希氏菌属 2 5例 ,克雷伯氏菌属 1例 ,摩根氏菌属 1例 ) ,假单胞菌属 8例 (铜绿假单胞菌 7例 ,施氏假单胞菌 1例 ) ,霉菌 2例 ,其它类型细菌 5例 (枯草芽孢杆菌 2例 ,革兰厌氧球菌 1例 ,醋酸钙不动杆菌 1例 ,表皮葡萄球菌 1例 ) ,仅有 2例血培养发现大肠杆菌。结论　 SPI的实质是肠源性感染 ,且严重影响了 SAP患者的预后 ,现有的治疗措施难以有效阻止肠源性感染     

全身辐射损伤大鼠伤口中性粒细胞凋亡及W11-a12促进伤口愈合的作用

目的：促愈合药W11-a12能显著提高伤口中性粒细胞(neutrophils，Neu)的数量和功能，观察合并全身放射损伤大鼠伤口Neu凋亡率的变化，并观察促伤口愈合药W11-a12的作用。方法：实验于1999—05／10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。将健康成年大鼠随机分为单纯创伤组和6Gy放射复合伤组。6Gy放射复合伤组动物在接受6Gyγ射线全身照射后立即在背部致创伤，伤口局部给予生理盐水或W11-a12(每伤口10mg)。从埋入伤口的海绵分离伤口细胞，分别采用TUNEL法、Western blot及RT—PCR方法检测伤口Neu凋亡率、Neu中Bcl-2蛋白、mRNA含量，透射电镜观察伤口凋亡的Neu。结果：伤后3，6，12，24及48h 6Gy放射复合伤组伤口Neu凋亡率变化曲线呈“∧”型，而单纯创伤组呈“∨”型。伤后6，12，24h 6Gy放射复合伤组Neu凋亡率分别为(9．90&;#177;2．26)％，(12．50&;#177;1．83)％和(18．16&;#177;5．56)％，显著高于单纯创伤组的(6．44&;#177;1．96)％，(2．74&;#177;1．22)％和(7．38&;#177;2．10)％(t=2．01．2．81，2．52，P&;lt;0．05)，同时Neu中Bcl-2蛋白及mRNA表达均低于单纯创伤组。W11-a12使用组与对照组伤口Neu凋亡率无明显差异。结论：全身电离辐射后伤口Neu凋亡率增加且变化规律与单纯创伤组明显不一致，这与电离辐射引起伤口愈合延缓有关。6Gy放射复合伤组动物伤口Neu中Bcl-2蛋白及mRNA表达均降低是其凋亡增加的分子机制。而W11-a12通过其他方式提高伤口Neu数量和功能。     

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞（CFU－GM）培养法。结果 伤后3－7d，有基质细胞贴壁的CFU－GM生长明显低于无贴壁组；伤后14d贴壁层形成后，放射损伤组的CFU－GM生长明显低于正常对照组；放射损伤后3－7d，骨髓基质细胞可抑制正常CFU－GM生长，用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞，其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子（CSF）时，基质细胞贴壁层对CFU－GM生长仍显示一定刺激作用，结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤，但在放射损伤造血修复与重建过程中，骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”双重的动态平衡调控作用。     

骨髓间充质干细胞对放创复合伤创面的促愈作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞对放创复合伤创面的促愈作用。方法 利用自体骨髓来源的间充质干细胞移植于局部合并放射损伤的创面，采用荧光示踪技术、形态学观察、胶原染色、成纤维细胞和毛细血管计数、羟脯氨酸含量测定等多种指标，观察了间充质干细胞对放创复合伤创面的促愈使用。结果 间充质干细胞能加快创面愈合，促进肉芽组织生长和胶原合成。结论 骨髓间充质干细胞对放创复合伤创面有明显的促愈效应。     

放射及复合烧伤大鼠腹腔灌洗液对骨髓造血祖细胞生长的影响

目的　观察放射损伤、烧伤及放烧复合伤腹腔灌洗液对骨髓体外造血的影响。方法60 Coγ射线全身照射 1 2Gy、5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %TBSAⅢ度烧伤。伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和 72h无菌抽取腹腔灌洗液 ,按 40 μg ml加入到骨髓红系、粒系培养体系中培养。 结果　伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和72h,烧伤组和复合伤组的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数均显著高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,且以伤后 2 4h最高 ,烧伤组高达 2 1 5 7%、2 0 2 3 %和 2 4 1 2 % ,复合伤组为 1 88 1 %、1 4 7 7%和2 0 4 6 %。但当加入放射损伤大鼠腹腔灌洗液时 ,仅有很少的CFU E、BFU E和CFU GM集落生长。结论　烧伤与放烧复合伤后的腹腔灌洗液对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用 ,照射组则显示明显的抑制作用     

人防御素5研究进展

目的　探讨人防御素 5 (humandefensin 5 ,HD 5 )的分子结构、抗菌活性、基因表达等特点 ,展望HD 5作为抗肠源性感染新药的开发前景。方法　采用文献回顾的方法对有关HD 5研究资料进行综合比较和综述。结果　HD 5是一种不含糖链的碱性阳离子多肽 ,相对分子质量为 ( 3～ 5 )× 10 3 ,成熟肽由 32个氨基酸残基组成 ,富含精氨酸、半胱氨酸 ;分子内含有 3对由半胱氨酸形成的二硫键 ,并以此行使其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、螺旋体、原生动物、有包膜病毒等的抗菌功能。HD 5的编码基因DEFA5位于第 8条染色体P2 1 pter区 ,全长4 4 9bp。其中 1～ 4 0为 5′端非翻译区 ,4 1～ 97为信号肽序列 ,98～ 2 2 6编码HD 5前片段 ,2 2 7～ 32 2为HD 5成熟肽编码序列 ,PolyA序列位于 4 33～ 4 38。 结论　HD 5是一种广谱、高效、不产生耐药性的内源性抗微生物小分子肽 ,如能解决其大量生产的难点 ,则可望成为新型抗肠源性感染新药