SDF-1 cDNA转染人骨髓间充质干细胞的实验研究

本研究旨在探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）cDNA瞬时转染人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）前后hBMSCs中SDF-1mRNA表达的情况。在分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）和构建SDF-1-pIRES2-EGFP真核表达载体的基础上,通过脂质体介导法将SDF-1真核表达质粒转染至hBMSCs,观测绿色荧光蛋白的表达并用RT-PCR方法检测瞬时转染效率。结果发现：SDF-1-pIRES2-EGFP瞬时转染后hBMSCs的SDF-1mRNA表达增高约20%左右。结论：阳离子脂质体可以将SDF-1cDNA真核表达质粒瞬时转染入hBMSCs,但转染效率低下,不能获得足够数量的稳定转染细胞供后续实验,因此需对转染方法作进一步的探讨。     

清醒小鼠严重颅脑闭合性撞击伤后外周血TNF-α IL-1β皮质醇和肝脏GR蛋白表达的变化

目的 研究小鼠严重闭合性脑创伤后外周血中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TMF-α)的变化与肝脏肝皮质激素受体(GR)变化的关系。方法 利用BIM-Ⅲ型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤，于致伤后30min、2h、8h、24h、48h、72h采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血清中细胞因子的含量，放免法检测皮质醇含量，Western Blot免疫印迹法检测肝脏GR的蛋白水平的变化。结果 致伤后外周血中TNF-a、IL-18、皮质醇较对照组有明显升高，均具有两个峰值特征；GR在致伤2h后开始出现蛋白水平表达降低，72h仍未完全恢复正常。结论 严重颅脑外伤后外周组织存在糖皮质激素抵抗，与TNF-α、IL-1β关系密切。     

类固醇受体辅活化子-3基因敲除对炎症反应中糖皮质激素受体的影响

目的 观察类固醇受体辅活化子(SRC)-3基因敲除对脂多糖(LPS)诱导的糖皮质激素受体(GR)蛋白表达水平及核转位的影响.方法 健康清洁SRC-3 / 小鼠、SRC-3-/-小鼠各20只,雌性,体质量约20 g,分为SRC-3 / 组和SRC-3-/-组,每组设正常(N)、1 h、4 h、12 h四个时相点,每个时相点各5只小鼠.采用Western blot测定肝、脾组织GR及SRC-1、SRC-2的蛋白表达.结果 无论是SRC-3 / 组还是SRC-3-/-组,LPS刺激引起肝组织GR蛋白表达及核转位显著降低,但SRC-3-/-组降低程度明显小于SRC-3 / 组;SRC-3 / 组和SRC-3-/-组小鼠脾组织GR表达水平4 h后开始下降.但SRC-3-/-组下降幅度显著低于SRC-3 / 组,GR核转位在SRC-3 / 组显著降低,而SRC-3-/-组则无显著变化.LPS刺激后SRC-3 / 组、SRC-3-/-组肝组织SRC-1均显著降低,但SRC-3-/-组变化程度均显著小于SRC-3 / 组;两组脾组织中未能明确检测到SRC-1蛋白表达.LPS刺激后两组小鼠肝组织SRC-2蛋白表达均显著增加,但在相应时相点SRC-3-/-组小鼠显著高于SRC-3 / 组;SRC-3 / 组小鼠脾组织SRC-2蛋白表达明显降低,而SRC-3-/-组却显著增加.结论 炎症反应中GR蛋白表达及核转位显著降低,产生明显的糖皮质激素抵抗(GCR),SRC-3基凶敲除后可缓解其程度.SRC-3基因敲除对炎症反应中肝、脾组织GCR程度的不同影响,可能与SRC家族成员的不同补偿效应有关.     

氯胺酮调节炎症反应中类固醇受体辅活化子的表达

目的观察脂多糖(LPS)腹腔注射后类固醇受体辅活化子(SRC)家族蛋白表达的早期变化及氯胺酮的影响,探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法将15只健康C57/129雄性小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS 氯胺酮组,每组5只。LPS 5 mg/kg,腹腔注射；氯胺酮10 mg/kg,肌肉注射,LPS注射后15 min给予。LPS注射后4 h脱臼处死,取肝、脾、肺,采用Western blot测定SRC家族(SRC-1、GRIP-1、NCoA-3)在蛋白水平的变化。结果LPS组与正常对照组相比,肝组织SRC-1蛋向表达水平显著降低,GRIP-1、NCoA-3显著升高；肺组织SRC-1、NCoA -3显著增加,GRIP-1显著降低；脾组织GRIP-1显著降低,NCoA-3显著增加。LPS 氯胺酮组肝组织SRC-1显著高于LPS组,低于正常对照组,肺组织显著低于LPS组,与正常对照组相比明显升高；肝组织GRIP-1显著低于LPS组,高于正常对照组,而脾、肺组织显著增加,与正常对照组相比无显著差别；NCoA-3蛋白表达水平显著低于LPS组,脾、肺组织明显高于正常对照组,而肝组织相差不显著。结论LPS刺激下肝、脾、肺组织SRC家族成员的变化不同,氯胺酮可抑制LPS诱导的SRC表达变化,其对炎症反应的抑制可能是一种间接作用。     

通过基因芯片筛选创伤修复差异表达基因

目的通过基因芯片筛选同真皮间充质干细胞相关的创伤修复差异表达基因。方法利用贴壁生长的特性分离大鼠真皮间充质干细胞，用Hpure提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。PCR扩增已构建抑制消减杂交差异表达文库中485个克隆的插入片断，送北京博奥制作基因芯片。提取的RNA反转录后分别同芯片杂交，找出在细胞水平和组织水平同时高表达的克隆。将这些克隆测序，进行生物信息学分析。结果分离的大鼠真皮间充质干细胞呈纺锤形，在体外显示多向分化潜能。抽提伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA，反转录后和基因芯片杂交，发现可能同创伤愈合相关的13条基因，其中热休克蛋白70（HSP70），基质金属蛋白酶3（MMP3），白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）等可能在创伤愈合中有重要意义。结论抑制消减杂交和基因芯片结合是筛选差异表达基因的一种有效方法。伤口液刺激前后dMSCs中差异表达基因的发现能为从基因水平探讨dMSCs参与创伤愈合的分子机制提供新的研究靶点。     

放烧复合伤大鼠血清对小鼠骨髓造血祖细胞的影响

以单纯烧伤、放射损伤为对照 ,观察放烧复合伤大鼠血清对骨髓造血祖细胞的影响及细胞因子的变化。用6 0 Coγ射线全身照射 12Gy ,5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %全身体表面积Ⅲ度烧伤。伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时无菌抽取大鼠血清。按 10 μg m1蛋白加入到骨髓红系或粒系培养体系中培养。伤后 2 4小时 ,应用ELISA法检测血清TNFα水平 ,应用放射免疫法检测IL 6含量。结果显示 ,无论烧伤或放烧复合伤血清组 ,伤后 3、12、2 4、4 8、72和 96小时的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数 ,均显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且以伤后 2 4小时最高 ,烧伤组高达 342 .8%、2 6 1.6 %和 2 2 8.4 % ;复合伤组为 2 5 2 .4 %、2 0 5 .1%和 174 .2 %。但当加入放射损伤大鼠血清时 ,CFU E、BFU -E和CFU GM集落数生长较少 ,最高为 12 .7%。同时 ,烧伤组和复合伤组血清TNFα和IL 6水平显著高于正常对照组 ,更高于放射损伤组。结论 :烧伤或放烧复合伤后的血清对骨髓红系和粒系造血均有明显的促进作用 ,放射损伤后的血清则有明显的抑制作用 ;该作用与血清细胞因子变化有关。     

羊膜促进间充质干细胞表皮细胞生长的形态学特征

目的将人羊膜(humanamnioticmembrane,HAM)负载培养猪骨髓间充质干细胞(MSCs)重建皮肤真皮替代物,负载培养猪表皮细胞重建皮肤表皮替代物,并观察猪MSCs、表皮细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法将贵州小香猪的MSCs、表皮细胞原代培养,传代扩增后,分别以不同的密度接种于HAM的基质面,逐日于倒置显微镜下观察MSCs、表皮细胞的生长增殖变化情况,并于培养3～18d进行光镜、电镜观察,检测MSCs、表皮细胞在HAM上生长的形态特点。结果接种后30min内就明显见到MSCs、表皮细胞在HAM上贴附,24h内大部分贴附生长,3d形成单层完全覆盖HAM,超微结构形态良好。结论HAM是MSCs、表皮细胞在体外培养的良好载体,对MSCs、表皮细胞有明显的促增殖作用。     

microRNAs调控骨骼肌分化的分子机制

microRNA(miRNA)是一大类广泛存在于真核细胞当中的长度约22 nt的内源性单链非编码RNA,通过与靶基因mRNA的3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)结合在转录后水平调控靶基因的表达.miRNA作为调控基因表达的重要分子在骨骼肌分化调控中的作用越来越受到关注,阐明miRNA在骨骼肌增殖与分化中的作用机制具有重要的理论意义,同时也可为骨骼肌相关疾病的治疗提供新的思路.文章总结了miRNA,尤其是miR-1、miR-133和miR-206等肌肉特异性miRNA,在调控骨骼肌分化过程中作用机制的研究进展,以便于进一步工作的开展.     

促排剂的研究进展及在放射性突发事件中的应用

一般说来，在和平年代，放射突发事件有4种可能的方式：①放射性散布装置（radioactive dispersal device，RDD），又叫脏弹（dirty bomb），是将放射性物质与普通炸弹捆绑在一起，当炸药被引爆时，放射性物质就随着向周围地区喷发。②核设施遭袭击导致源项释放；③盗窃核武器或粗糙核装置；④小当量核爆炸，其中，受脏弹袭击的可能性最大。     

大鼠严重烫伤后合理应用外源性糖皮质激素进行救治的实验研究

目的 研究不同时间应用不同剂量地塞米松对严重烫伤大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的影响，为临床上合理应用外源性糖皮质激素(GC)救治严重创伤患者提供实验依据。方法 于严重烫伤后早期48h内不同时间分别给大鼠腹腔注射5mg/kg(大剂量)和0．5mg／kg(小剂量)地塞米松，应用ELISA方法检测血清TNF—α、IL-lβ和IL-6的含量改变。结果 烫伤后4h和12h应用大、小剂量地塞米松均可显著降低血清中TNF—α、IL-lβ、IL-6的含量，其中大剂量效果更加显著；烫伤后24h应用大、小剂量地塞米松均可显著降低IL-lβ、IL-6的含量，但两种剂量间无显著差别；烫伤后48h用不同剂量地塞米松对三种细胞因子的影响均不显著。结论 从对炎性细胞因子的影响来看，严重烫伤后4—12h应用大剂量外源性GC，12—24h应用小剂量GC，可产生最佳救治效果。