Leber遗传性视神经病变的研究进展

Leber遗传性视神经病变(Leber's hereditary optic neuropathy,LHON)是一种主要累及青壮年男性,导致视神经退行性变的母系遗传病.线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变为LHON发病的主要分子基础.LHON不完全外显和男性好发的特征表明,其他因素(如mtDNA单体型、核修饰基因和/或环境因素等)在LHON发病中起着重要作用.     

Leber遗传性视神经病相关的三种原发性线粒体突变的无创检测方法建立

目的：建立1种Leber遗传性视神经病（LHON）相关的3种原发性线粒体突变11778G＞A、14484T＞C和3460G＞A的无创检测方法。方法：研究对象为在温州医科大学附属眼视光医院就诊的3例（WZ1481、WZ1478、WZ1435）基因检测确定为m.11778G＞A、m.14484T＞C和m.3460G＞A突变的LHON患者。采集3例LHON患者和2例野生型健康对照的静脉血样及口腔黏膜细胞样本,然后分别用手工法和试剂盒法提取全基因组DNA,分析比较2种样本、2种方法提取的DNA的纯度及浓度有无差别。最后以携带m.11778G＞A、m.14484T＞C和m.3460G＞A突变的LHON患者和野生型的口腔黏膜细胞和外周血提取的全基因组DNA作为模板,通过PCR扩增分别包含以上3种突变的DNA片段,然后进行焦磷酸测序、斑点杂交和Southern blot分析PCR产物。结果：口腔黏膜细胞和血液提取的DNA浓度的差异无统计学意义（P＞0.05）。手工法提取的口腔黏膜细胞DNA纯度低于试剂盒法提取的口腔黏膜细胞和血液DNA的纯度,差异有统计学意义（P＜0.05）。口腔黏膜细胞提取的DNA产量与血液相似。DNA测序结果显示血液样本和口腔黏膜细胞样本具有很好的一致性,对照组均检测不到突变,而突变组可以检测到相应的突变。斑点杂交和Southern blot的结果也一致,对照组均为阳性而突变组均为阴性。结论：口腔黏膜细胞DNA可用于筛查和鉴定LHON的3个主要线粒体突变。本研究建立了一种方便、无创的方法来检测LHON相关的m.11778G＞A、m.14484T＞C和m.3460G＞A突变。     

11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系分析评估

目的：通过对11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行临床和分子遗传学特征等分析评估,探讨线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变在母系遗传非综合征型耳聋发生发展中的作用。方法：PCR扩增2 650例中国汉族非综合征型耳聋样本的线粒体12S rRNA、线粒体tRNASer(UCN)基因以及GJB2基因。对11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行听力学检测、耳聋相关热点基因突变检测以及家系资料等综合分析。结果：在2 650例中国汉族非综合征型耳聋患者中,14例携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变,突变率为0.53%。在这11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的家系中,同时携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变和线粒体12S rRNA A1555G、12S rRNA C1494T或GJB2 c.235delC的家系分别为3、1和2个。临床资料分析表明,这11个中国汉族非综合征型耳聋家系母系成员在听力损失严重程度、发病年龄以及耳聋外显率方面存在较大差异。同时携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变和线粒体12S rRNA A1555G、C1494T或GJB2 c.235delC突变家系的耳聋平均外显率分别为29.4%、42.9%和19.0%。前两者的外显率明显高于只携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变家系的耳聋平均外显率（为14.0%）。结论：线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变可能与线粒体12S rRNA A1555G和C1494T原发突变存在协同作用,共同影响非综合征型耳聋的表型。     

线粒体DNA突变与头颈部鳞状细胞癌

线粒体DNA参与编码氧化磷酸化复合体系中的13种多肽链亚单位,线粒体DNA突变可以引起细胞氧化呼吸功能紊乱.肿瘤细胞能量代谢异常是其特点之一,因此线粒体DNA突变与肿瘤的发生可能存在某种联系.本文就线粒体DNA突变在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展进行综述.     

核修饰基因和线粒体DNA突变致耳聋的机制及其功能研究

线粒体突变是导致耳聋的重要原因之一,可以引起综合征和非综合征型耳聋,这些突变主要位于线粒体12S rRNA和tRNA基因上.     

携带CYB m.15024G>A突变的原发性高血压家系遗传学分析

目的:探讨线粒体细胞色素B(CYB) 15024G>A突变在原发性高血压发生发展中的作用。方法:分析课题组前期收集的高血压患者的线粒体全基因组测序结果，对其中一例携带线粒体CYB 15024G>A突变的高血压患者及该例先证者的家系开展临床资料采集及分子遗传学检测，将外周静脉血标本来源的淋巴细胞转化为永生化淋巴细胞系，并对其进行线粒体蛋白质、腺苷三磷酸（ATP）、线粒体膜电位和细胞内活性氧检测。结果:该原发性高血压家系外显率为42.9%，发病年龄为46～68岁。线粒体全基因组测序结果显示母系成员均携带高度保守的线粒体CYB 15024G>A突变，该突变影响线粒体CYB的二级、三级结构和蛋白质折叠自由能，从而改变其结构稳定性及突变位点周围电子传递功能区结构。与对照组比较，携带线粒体CYB 15024G>A突变的细胞株线粒体CYB表达量、ATP产量和线粒体膜电位水平下降，且活性氧水平升高，差异均有统计学意义（均P<0.01）。结论:线粒体CYB 15024G>A突变影响呼吸链亚基结构及线粒体功能，进一步导致细胞功能障碍，表明该突变可能在原发性高血压中发挥作...     

线粒体DNA继发突变对Leber遗传性视神经病变的影响

Leber遗传性视神经病变(Leber hereditary optic neuropathy,LHON)是一种多发于青壮年的母系遗传性疾病,可导致双眼严重的急性无痛性、且一般是永久性的双侧中心视野缺失。三个线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）原发突变ND4 G11778A、ND1 G3460A和ND6 T14484C是其致病的主要因素,但家族间及家族内不同成员之间的表型差异表明存在其它的修饰因子,包括核及线粒体遗传修饰因子,环境因素。本综述主要阐述mtDNA继发突变对LHON表型表达的影响。     

线粒体外膜电压依赖阴离子通道在携带mtDNA A4263G突变的细胞株凋亡中的作用

目的: 研究线粒体外膜电压依赖的阴离子通道（voltage-dependent anion channel,VDAC）在携带线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）A4263G突变的细胞株凋亡中的作用。方法: 对该家系的4名母系成员（3名血压异常者,1名血压正常者）和3名遗传背景相同的对照者建立了传代淋巴细胞系。采用流式细胞仪检测线粒体膜电势;用激光共聚焦显微镜观测VDAC与Bax蛋白结合的情况。结果: VDAC及凋亡相关蛋白Bax在携带mtDNA A4263G的细胞株中重表达增高,而淋巴细胞sKCa通道的表达没有明显差异;mtDNA A4263G突变携带者的线粒体膜电势与正常者比较平均降低32%（P<0.05）;而加入环孢霉素A（CsA为VDAC拮抗剂）后,线粒体膜电势升高,与正常者之间的差异消失。携带突变者线粒体外膜的VDAC可与Bax蛋白结合,而正常对照者二者没有结合,在加入CsA后,可抑制突变者线粒体外膜VDAC与Bax蛋白的结合。结论: 线粒体VDAC表达异常可导致mtDNA A4263G携带突变的细胞株凋亡增加。     

常染色体显性视神经萎缩的分子遗传学研究进展

常染色体显性视神经萎缩 (Autosomal Dominant Optic Atrophy , ADOA), 亦称Kjer型，是一种常见的遗传性视神经病变。该病常在儿童期发病（平均发病年龄为7岁），发病率约1:10 000-1:50 000，表现为隐匿性渐进性视力减退，双颞侧视盘苍白，中心或旁中心暗点，色觉障碍(常表现为蓝黄色盲)。组织病理学表现为：视网膜神经节细胞退行性变。 OPA1编码一种保守的动力相关GTPase，OPA1突变是ADOA发病的主要原因，目前已发现117个ADOA相关OPA1突变，包括：31.6%缺失和插入突变， 16.2%无义突变，25.6%错义突变和28.8%剪接突变。这些突变分布于OPA1基因编码区，但多数位于GTPase区。另外，本病还与OPA3 (19q13.2-q13.3)、OPA4 (18q12.2-12.3)及OPA5 (22q12.1-q13.1)基因突变有关。个体间的表型差异表明：其他遗传因素，个人因素以及环境因素可能与ADOA发病有关。     

与线粒体DNA A1 555G突变有关的非综合征型耳聋

在氨基糖甙类抗生素引起的耳聋中,有一部分患者表现为对这类抗生素的特殊敏感性,这类患者常常是由于其线粒体DNA的12s rRNA基因有A1555G的突变.后来又有研究发现,携带A1555G突变的人,可以在没有使用氨基糖甙类抗生素的情况下出现先天性或者后天性的非综合征型的耳聋,而且这种耳聋的临床表现具有多样性.这种临床表现的多样性可能是由于环境因素、核基因和线粒体的单体型的影响.本文简要介绍了这些因素对与mtDNA A1555G突变有关的耳聋的表现型的影响以及药物性耳聋发生的简要机理.