不同血清微环境对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养的影响**☆

背景：骨髓间充质干细胞在培养过程中,常在基础培养基中添加一定的血清,最常见的是小牛血清和胎牛血清,但这存在着一定的生物安全性隐患。 目的：观察不同血清微环境对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养的影响。 方法：自成年大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,采用全骨髓贴壁法培养。分别以下列血清微环境培养：自身血清组：分离细胞后原代用含大鼠自身血清的培养基培养,传代后换用含胎牛血清的培养基培养;同种异体血清组：分离细胞后原代用含同种异体血清的培养基培养,以后用胎牛血清培养基培养;胎牛血清组：分离后用含胎牛血清培养基培养,以后一直用含胎牛血清培养基培养;DMEM组：分离细胞后原代用不含血清的DMEM培养基培养,传代后换用含胎牛血清的培养基培养。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态;细胞的贴比率;生长曲线;流式细胞仪观测细胞表面CD11b、CD45和CD90表达。 结果与结论：大鼠自身血清微环境及同种异体血清微环境细胞形态均一性、在融合度均高于其他组;首次传代天数低于其他组。24,48,72 h贴比率自身血清组、同种异体血清组和胎牛血清组均高于DMEM组(P < 0.01)。在细胞生长曲线中大鼠自身血清组倍增速率最快,其次为同种异体血清组,再者为胎牛血清组,而DMEM组细胞未见明显倍增现象。流式细胞仪检测含血清培养基培养条件下各组第3代细胞CD11b和CD45阳性细胞率均达到98%以上,CD90阳性率小于2%,可以得到纯度较高的骨髓间充质干细胞。但是在无血清微环境条件下,CD11b的阳性率为95.83%、CD90阳性率达2.07%,而CD45阳性率仅为64.79%,可见无血清环境下培养的骨髓间充质干细胞纯度明显低于含血清微环境。提示大鼠自身血清微环境下更有利于骨髓间充质干细胞的贴壁、生长及纯化。     

基于数据挖掘的刘新祥教授治疗肾膀胱(系)病类核心用药的研究

目的:采用数据挖掘的方法研究刘新祥教授治疗肾系病类核心用药.方法:选择数据库中2006年3月-2009年5月经刘新祥教授诊治显效或好转的肾系病病例,采用数据挖掘关联性分析提取常用药物、核心用药、常用药物配对.结果:在最低条件支持度≥10%,最小规则置信度≥60%的条件下,规则频度最高的用药是熟地、山药、山茱萸、熟大黄、肉苁蓉、女贞子、旱莲草、黄芪、土茯苓、芡实、当归、丹参、党参、柴胡、淫羊藿、白术、白花蛇舌草、巴戟天、凤尾草.药物配对有熟地、山茱萸;熟大黄、肉苁蓉;女贞子、旱莲草;山药、芡实;白术、茯苓;当归、丹参;丹参、淫羊藿;黄芪、党参;土茯苓、白花蛇舌草;黄芪、芡实;山药、熟地;芡实、当归;芡实、土茯苓;黄芪、土茯苓.在最低条件支持度≥30%,最小规则置信度≥60%的条件下,规则频度最高的用药是山药、黄芪、芡实、丹参、当归、党参、土茯苓.药对有山药、芡实;当归、丹参;黄芪、党参;黄芪、芡实;芡实、当归;黄芪、当归;芡实、土茯苓;黄芪、山药;黄芪、土茯苓.结论:刘新祥教授治疗肾系病类常用药物为肾安汤,核心用药围绕益气、固摄、通络、化浊之法.     

心血瘀阻证模型大鼠心肌微环境p38信号通路的变化及在骨髓间充质干细胞移植中的作用

目的探讨急性心肌梗死心血瘀阻证模型大鼠心肌微环境p38信号转导通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的影响。方法 48只SD大鼠随机分为健康对照组、假手术组(急性心肌梗死模型)、模型组(急性心肌梗死心血瘀阻证模型)、注射1组(急性心肌梗死心血瘀阻证模型大鼠于梗死区边缘心肌组织的3个位点注入共100μl的BMSCs细胞悬液)、注射2组(急性心肌梗死模型大鼠注射同注射1组)、注射3组(正常健康大鼠于相同注射部位注射同注射1组),每组各8只。检测磷酸化p38(p-p38)信号转导蛋白、心肌结蛋白Desmin、肌球蛋白重链MHC和心脏转录因子GATA-4 mRNA的表达。结果模型组和注射1组p-p38蛋白明显高于假手术组和健康对照组(P0.05);注射1组p-p38蛋白高于模型组、注射2组和注射3组(P0.05)。Desmin-Brdu和MHC-Brdu双染细胞在注射1组中可见,注射2组和注射3组未见表达。注射3组大鼠GATA-4 mRNA心肌组织中未检出表达,注射1组大鼠心肌组织中GATA-4 mRNA高于注射2组(P0.05)。注射1组大鼠p-p38与GATA-4 mRNA含量表达呈正相关(P0.05),而与DesminBrdu、MHC-Brdu无明显相关性。结论急性心肌梗死心血瘀阻证模型大鼠p38信号转导通路激活,可促进移植的BMSCs向心肌细胞方向分化。     

家系冠心病血瘀证差异基因的研究分析

目的探讨冠心病血瘀证家系差异基因的功能及目标通路。方法应用Affymetrix公司的Human Genome U133 Plus2.0芯片检测家系冠心病血瘀证组(A组)、家系冠心病非血瘀证组(B组)、家系非冠心病血瘀证组(C组)、家系健康人组(D组)的基因表达谱,通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析基因功能;通过Biocarta及KEGG通路找到每一个差异基因所在通路。结果家系冠心病血瘀证差异基因主要以炎症因子为主。当P0.05时研究发现,家系冠心病血瘀证的差异基因表达主要涉及到如下几类基因系的表达改变;1趋化因子;2白介素细胞因子;3基质金属蛋白酶MMPs系;4成纤维细胞生长因子。结论家系冠心病血瘀证相关差异基因,主要涉及到炎症、斑块形成、内皮损伤方面。     

秋水仙碱治疗冠心病的Meta分析和试验序贯分析

目的:秋水仙碱在冠心病治疗中的作用存在争议,本研究旨在通过Meta分析和试验序贯分析评估秋水仙碱在冠心病患者中预防主要不良心血管事件的效果及安全性.方法:检索中国知网、维普数据库、中国生物医学文献数据库、万方数据库、PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science数据库,对比较...     

中药及天然化合物靶向自噬调控动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是众多缺血性心血管疾病共同的病理基础，其形成过程涉及血管内皮损伤、血小板活化等多个方面。血管内皮损伤是AS斑块产生的始动因素，内皮受损处招募单核细胞分化为巨噬细胞，并吸收氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)慢慢转变为泡沫细胞。平滑肌细胞(smooth muscle cells, SMCs)则不断增殖、迁移，作为纤维帽中唯一产生间质胶原纤维的细胞，很大程度上决定了斑块是否破裂。AS形成过程中不断放大的炎症反应招募血小板黏附至血管内皮受损区域，并刺激血小板过度聚集。自噬活动与血管病变和血小板异常激活有关，过度自噬被认为是斑块稳定的不利因素。因此，精确调节不同类型血管细胞自噬和血小板自噬以治疗AS可为防治动脉粥样硬化性缺血性心血管疾病提供新的治疗视角。目前，AS的治疗策略仍主要集中在使用高强度他汀类药物降低血脂水平，药物通常会引起明显的副作用。因此开发更安全、有效的药物和治疗模式是现阶段研究的重点方向。中药及天然化合物具有靶向自噬治疗AS的潜力，已在我国心血管疾病的防治中发...     

基于中西医临床病证特点的稳定性冠心病动物模型分析北大核心CSCD

冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)是严重危害人类健康的慢性非传染性疾病,稳定性冠心病(Stable coronary heart disease,SCAD)是临床常见的冠心病类型之一,其发病率是心肌梗死的2倍,发病趋势逐渐年轻化,故建立合适的稳定性冠心病动物模型对其诊断及研究有重大意义。本文基于稳定性冠心病的中西医临床病证特点,病因病机、临床诊断标准和中医辨证分型,对目前常见的稳定性冠心病动物模型进行归纳总结,现有造模方法主要有饮食诱导法、手术干预法、药物诱导法、基因敲除法以及各种方法的串联结合。因此,本研究综合分析具有中西医临床病证特点的各类稳定性冠心病动物模型,分析模型的优缺点及其与中西医临床特征的吻合度,为以后的稳定性冠心病模型的建立提供参考意见,使其更加贴近于临床。     

基于自噬机制的中医药干预糖尿病心肌病的研究进展

自噬是一种细胞内溶酶体分解代谢的过程，也是糖尿病心肌病（DCM）发病的重要机制。自噬对DCM具有双向调节作用，在生理状态下，正常水平的自噬可促进受损心肌细胞及代谢产物的正常分解，从而减少有害物质对机体的损害，同时为心肌细胞提供能量。在病理状态下，心肌细胞的自噬过度抑制会引起受损细胞和代谢产物的不断蓄积，而受损细胞及代谢产物会对心肌细胞造成损害，最终加剧DCM患者的心功能障碍。而心肌细胞的自噬过度激活会导致大量心肌细胞自噬性死亡，引发心肌病理性重构和心功能障碍，从而导致DCM进展加重。因此，恢复正常自噬水平是保护心肌细胞和改善DCM预后的关键手段。中医药可通过干预自噬来发挥治疗DCM的作用，其作用效果可概括为促进细胞自噬（补其不足）和抑制细胞自噬（损其有余）2个方面，最终使自噬微环境恢复平衡，自噬强度调整到最佳水平，DCM渐趋缓解。     

基于肝主疏泄理论探讨心脏X综合征的证治

心脏X综合征是指具有典型劳力性心绞痛或心绞痛样不适症状，但冠状动脉造影检查提示正常或无明显异常的一组临床综合征，占心绞痛的10%～15%。其发病机制尚不明确，现代临床广为接受的病因是冠状动脉微血管功能障碍造成的心肌缺血。中医学认为心脉气血正常运行依赖于肝木条达疏泄之功，本文基于肝主疏泄的生理特性，提出“肝之疏泄不利”是心脏X综合征的核心病机，以疏利通达肝气为基本疗法，总结中医药治疗经验，以期为心脏X综合征提供更广阔的中医药诊疗思路。     

从气、痰、火、虚辨治双相情感障碍

认为双相情感障碍主要与气、痰、火、虚有关，肝气郁结是其始动病机，痰气交阻和痰火交结是其抑郁相和躁狂相转化的关键病机，气阴两虚是其迁延不愈的关键病机。临证将双相情感障碍分为肝气郁结证、痰气交阻证、痰火交结证、气阴两虚证，分别予金玉疏肝散、开郁温胆汤、清心化痰汤、百合生脉饮加减治疗，并善用贯叶金丝桃理气、化痰、清热。重视气、痰、火的同防同治，根据其病机演变和偏盛程度灵活加减药物。