血管紧张素转换酶2基因多态性与原发性高血压合并脑卒中的关系

目的研究血管紧张素转换酶2（ACE2）基因G9570A多态性与我国南方汉族人原发性高血压合并脑卒中的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，检测156例原发性高血压患者，158例原发性高血压合并脑卒中患者及169例健康人群的ACE2基因，并进行组间对照研究，推测ACE2基因G9570A多态性与原发性高血压合并脑卒中发病的相关性。结果男性和女性原发性高血压组G等位基因频率分别为69．8％、57．1％，高于对照组的55．0％、44．2％，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组ACE2基因型分布不同，原发性高血压组GG基因型的频率为32．8％，高于对照组的15．9％，差异有统计学意义（P〈0．05）。男性和女性原发性高血压合并脑卒中组A等位基因频率分别为57．3％、62．3％，高于原发性高血压组的30．2％、42．9％，差异有统计学意义（P〈0．01）；两组ACE2基因型分布不同，原发性高血压合并脑卒中组AA基因型的频率为37．7％，高于原发性高血压组的18．6％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论ACE2基因G9570A多态性与我国南方汉族人原发性高血压合并脑卒中可能具有一定相关性。携带A／AA基因的人群发生原发性高血压合并脑卒中的危险性相对较大。     

Lox-1基因501G＞C和3''''UTR*188C＞T多态性与急性心肌梗死发病的相关性

目的检测Lox-1501G〉C和3’UTR^＊188C〉T多态性在中国汉族人群中的分布及其与急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）发病的相关性。方法利用荧光染料SYBR Green Ⅰ标记定量PCR产物，通过PCR生长曲线和融解曲线分析结果进行多态位点的基因分型。分别检测汉族202名AMI患者及161名健康人群Lox-1 501G〉C和3’UTR^＊188C〉T多态性。随机选取30份经荧光定量PCR分型的标本进行DNA测序鉴定。结果AMI患者和健康人群的Lox-1 501G等位基因频率分别为0．834和0．798，Lox-1 501C等位基因频率分别为0．166和0．202，Lox-1 501G〉C基因型频率在AMI组和对照组问差异无统计学意义[OR0．687，95％CI（0．226—2．093）；P=-0．507]。AMI患者和健康人群的Lox-1 3’UTR^＊188C等位基因频率分别为0．681和0．674，Lox-1 3’UTR^＊188T等位基因频率分别为0．319和0．326．Lox-1 3’UTR^＊188C〉T基因型频率在AMI组和对照组亦无统计学意义[OR 0．947，95％CI（0．623-1．439）；P=0．80]。结论中国汉族Lox-1基因501G〉C和3’UTR^＊188C〉T多态性与AMI发病无关。     

人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段的克隆及原核表达

[目的]扩增、克隆人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.[方法]根据人CD74基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术,从人Raji B细胞中扩增CD74基因片段.将CD74基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体pGEX-4T-CD74,并转化工程菌BL21(DE3).用IPTG诱导BL21(DE3)中导入的CD74基因的表达,并行SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用GSTrap亲合柱纯化重组CD74蛋白,通过体外血管生成实验鉴定重组CD74蛋白对巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的阻断作用.[结果]扩增出人CD74基因片段,并成功构建了重组质粒pGEX-4T-CD74.测序结果显示,克隆的CD74 cDNA长480 bp,序列与文献报道一致.经IPTG诱导,特异表达出可溶性的44 KDa的重组蛋白,其可被人CD74抗体识别.体外血管生成实验结果显示,重组CD74蛋白能特异地阻断MIF的促血管生成作用.[结论]克隆了人CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.     

血管生成素1基因真核表达质粒的构建及测序

目的:构建血管生成素1(Ang1)的真核表达质粒psecTagBk-Ang1。方法:用PCR方法从人心脏文库中扩增Ang1基因全外显子片段, 并定向插入真核表达载体psecTagBk中, 用限制性内切酶酶切和测序鉴定克隆的Ang1基因。结果:扩增出人Ang1cDNA片段, 测序结果显示扩增的Ang1cDNA包括长为1497bp、1494bp的2种剪切体, 分别编码498和497个氨基酸残基。限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒psecTagBk-Ang1。结论:发现2种共存的Ang1cDNA剪切体, 并成功构建真核表达质粒psecTagBk-Ang1。     

Upregulation of miR-29b contributes to the anti-fibrotic effect of macrophage migration inhibitory factor in diabetic myocardial fibrosis

Background Macrophage migration inhibitory factor(MIF) possesses proinflammatory function when secreted from the cells, and it also exhibits antioxidant properties based on its intrinsic oxidoreductase activity.However, the role of MIF in cardiac fibrosis is not well known. In the present study, the effect of MIF on fibrosis-associated gene expression and the underlying mechanism were examined. Methods The collagen content in mouse myocardium was detected by Masson staining. Expressions of MIF and fibrosis-associated Col1a1, Col3a1 and α-SMA in mouse myocardium or mouse cardiac fibroblasts were detected by quantitative real-time PCR and Western blot assay, respectively. Mature miR-29b expressions in mouse myocardium and cardiac fibroblasts were determined by real-time PCR. Smad3 activation in MIF-treated cardiac fibroblasts was also detected by Western blot assay. Results Compared with the db / m control mice, the collagen content was significantly increased in the myocardium of diabetic db / db mice. MIF was up-regulated, but miR-29b was down-regulated in the diabetic myocardium. Quantitative real-time PCR and Western blot assay showed that MIF could inhibit fibrosis-associated Col1a1, Col3a1 and α-SMA expressions in mouse cardiac fibroblasts.Smad3 activation was inhibited, but miR-29b was up-regulated in MIF-treated cardiac fibroblasts. Enforced expression of miR-29b significantly suppressed Col1a1, Col3a1, and α-SMA mRNA and 1protein expressions in cardiac fibroblasts. Conclusions MIF possesses the anti-fibrosis activity through inhibiting Smad3activation and through up-regulating miR-29b expression, and miR-29b can inhibit fibrosis-associated Col1a1,Col3a1 and α-SMA expressions in cardiac fibroblasts.     

血管紧张素转化酶2基因多态性与高血压合并缺血性脑卒中

目的研究血管紧张素转化酶2（angiotention-converting cnzyme 2，ACE2）基因G9570A多态性与中国南方高血压患者发生缺血性脑卒中的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性的方法，检测单纯原发性高血压136例及原发性高血压合并缺血性脑卒中患者139例的ACE2基因．同时测定颈动脉内膜中层厚度及血浆血管紧张素Ⅱ水平，并进行组间对照研究，探讨ACE2基因G9570A多态性与原发性高血压患者中缺血性脑卒中发病的关系。结果原发性高血压合并缺血性脑卒中组A等位基因频率分布高于原发性高血压组（P〈0．05）；两组ACE2基因型分布不同（P〈0．05）；原发性高血压合并缺血性脑卒中组携带A／AA基因者血浆血管紧张素Ⅱ水平高于携带G／GG基因者（P〈0．05）。在男性原发性高血压合并缺血性脑卒中组携带A基因者颈动脉内膜中层厚度高于携带G基因者（P〈0．05）。结论原发性高血压患者中，携带A／AA基因者发生缺血性脑卒中的危险性相对较大．可能与其血管紧张素Ⅱ水平较高有关。     

舒芬太尼预处理对H9C2细胞缺氧复氧损伤后细胞活力和乳酸脱氢酶活性的影响

目的 观察舒芬太尼预处理对H9C2细胞缺氧复氧损伤后细胞活力和乳酸脱氢酶（LDH）的影响及其浓度依赖性。方法 采用培养的H9C2心肌细胞进行实验,以细胞处于缺氧环境而后进行复氧作为损伤模型。细胞分为正常对照组（NC组）、缺氧复氧损伤对照组（HR组）、舒芬太尼预处理组（SF组）。根据不同浓度舒芬太尼(1×10-11、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L),SF组又分为SF11、SF10、SF9、SF8、SF7、SF6组,每组6孔。处理后MTT法测定细胞活力,检测培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）活力。结果 培养的H9C2细胞经过缺氧3 h复氧3 h之后出现明显的损伤。与NC组相比,HR组培养液上清中LDH活力明显升高、细胞活力显著下降。给予不同浓度的舒芬太尼预处理15 min后再进行缺氧复氧,这种损伤可被抑制。与HR组相比,舒芬太尼预处理组培养液上清中LDH活力降低、细胞活力提高,并发现当舒芬太尼的浓度达到10-9mol/L时其保护效果已基本达到最大,浓度再增大时,保护效果的增加已无显著性差异。结论 舒芬太尼预处理可明显增强H9C2细胞抗缺氧复氧损伤能力,具有浓度依赖性。     

人血管内皮生长因子(VEGF_(165))在大肠杆菌中的表达及鉴定

[目的]克隆人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白。[方法]用 PCR技术,从人心脏cDNA文库中扩增VEGF165 cDNA,并定向克隆人原核表达载体pET-28a中。用IPTG诱导VEGF165在大肠 杆菌BL21(DE3)中表达。用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165,Western-blot鉴定。根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖 的特性,用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性。[结果]从人心脏cDNA文库中扩增出VEGF165 cDNA片段。克隆的 VEGF165 cDNA长576 bp,编码191个氨基酸残基,序列与文献报道一致。SDS-PAGE电泳显示,经IPTG诱导,高效表达出25 ku 的rVEGF165,主要存在于包涵体中,约占菌体总蛋白的20％。MTT检测显示,复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静 脉血管内皮细胞增殖。[结论]克隆、测定了人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165。     

β2受体阻断药降低梗死后心肌细胞环磷腺苷的含量

目的研究心肌梗死后2-8周心肌细胞β2受体对环磷腺苷(adenosine cyclophosphate,cAMP)含量影响的动态变化,探讨心肌梗死后β2受体在交感神经激动作用中所占地位。方法Wistar大鼠20只随机分为:正常对照组、心肌梗死后2周组、4周组、8周组。分离心肌细胞,每组制备35份样品,按给药不同随机分为7小组,用酶联免疫方法测定心肌细胞环磷腺苷含量。结果在正常和梗死后2、4、8周心肌细胞,β2受体激动可使心肌细胞环磷腺苷含量(pmol／105 cells)分别升高98％、134％、148％和151％(P<0．05)。心肌梗死后,选择性β2受体阻断药对β受体激动引发的心肌细胞环磷腺苷含量的抑制程度增高,选择性β1受体阻断药对其的抑制程度下降,非选择性β受体阻断药对β受体激动引发的正常和心肌梗死后心肌细胞环磷腺苷含量升高均能抑制。结论心肌梗死后β2受体在β受体激动引发的心肌细胞环磷腺苷含量升高作用中所占比例升高。心肌梗死后β2受体在交感神经激动产生的正性肌力和正性变时作用中地位可能提高。     

三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠血流动力学作用

目的:研究三七总皂苷(PNS)对急性心肌梗塞(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠血流动力学的影响。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支建立AMI模型,术后24 h随机分为对照组和实验组,连续4w分别灌胃给予生理盐水和PNS低、中、高剂量,观察PNS对病鼠心脏冠脉流量(CF)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LV-EDP)、左心室舒张压(LVDP)、等容收缩期左心室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、左心室收缩峰压(LVPP)、左室收缩速度(VPM)等心功能变化指标及心肌细胞病理结构和心脏指数改变的影响。结果:PNS可显著提高病鼠LVSP、CF、VPM及±dp/dtmax(P<0.01或P<0.05),显著降低LVEDP及LVPP(P<0.01或P<0.05),能显著改善病鼠左室心肌细胞形态结构的病理改变及心脏指数(P<0.01)。结论:PNS可通过扩张冠脉血管增加病鼠心脏冠脉流量,降低冠脉阻力,调整室壁顺应性,减轻心肌细胞结构病理损伤,明显改善左心收缩和舒张功能,对AMI后心脏血流动力学有改善作用。