通心络对高血压、高血糖合并高胆固醇血症大鼠动脉的影响及机制

目的 评价通心络对高血压、高血糖合并高胆固醇血症大鼠模型动脉功能的影响及机制.方法 将体重300～400 g的成年自发性高血压大鼠(SHR)32只随机分为普食组(SHR组)、对照组(模型组)、低剂量通心络(0.2 g/kg)干预组(通心络低组)、高剂量通心络(0.8 g/kg)干预组(通心络高组),另取8只正常血压大鼠作为正常组,高脂喂养4周建立动物模型.通心络干预4周后,行主动脉离体血管功能检查,用荧光定量PCR方法测定过氧化物酶体增殖物受体γ(PPAR-γ)mRNA表达.结果 通心络干预后大鼠离体主动脉对乙酰胆碱、硝普钠引起的舒张反应增强,通心络高组对A23187的舒张反应增强(P＜0.05),通心络剂量依赖性增加PPAR-γ基因表达.结论 通心络干预具有保护血管内皮功能及逆转血管平滑肌功能障碍等作用,其机制可能与激活PPAR-γ基因表达有关.     

脑利钠肽后处理对在体大鼠缺血再灌注后心肌损伤的影响

目的 探讨脑利钠肽(BNP)后处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用.方法 24只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为:(1)假手术组(SHAM组):只开胸,不结扎冠状动脉;(2)缺血再灌注组(I/R组):结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注 3 h;(3)脑利钠肽组(BNP组):结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注 3 h,在再灌注前10 min,开始静脉予BNP 0.01 μg/(kg ·min),BNP静脉恒速维持至再灌注结束.用2,3,5,氯化三苯基四氮唑检测缺血再灌注心肌的梗死面积,用TUNEL方法检测缺血再灌注心肌的凋亡,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的浓度以评估缺血再灌注心肌活性氧的水平.结果 SHAM组心肌无梗死,I/R组的大鼠梗死面积为(44.02±10.15)%,BNP组的梗死面积为(21.53±9.08)%(P＜0.05).SHAM组、BNP组与I/R组的心肌细胞凋亡指数分别为(3.13±1.62)%、(19.45±9.62)%和(38.46±12.31)% (P＜0.05).与I/R组相比,BNP组的缺血再灌注心肌组织中MDA减少(P＜0.05),而SOD增多(P＜0.05).结论 BNP后处理能减少在体大鼠缺血再灌注的心肌损伤,其机制与其减少心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡及降低心肌缺血再灌注损伤时的活性氧水平相关.     

三七总皂苷对急性心梗后左室重构大鼠心功能的改善作用

目的 研究三七总皂苷(PNS)对急性心肌梗塞(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠心功能的作用,并与比索洛尔的疗效作比较.方法除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随机分为正常对照组和实验组,连续4周分别灌胃给予生理盐水2 mg· kg-1、比索洛尔25 mg·kg-1和PNS40、80、120 mg·kg-1,观察PNS和比索洛尔对病鼠室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左室舒张末期内径(宽度)(LVIDd)、室间隔收缩末期厚度(IVSs)、左室收缩末期内径(宽度)(LVIDs)、左室后壁舒张末期厚度(LVPWd)、左室后壁收缩末期厚度(LVPWs)、左室射血分数(EF)、左室收缩百分率(FS)、二尖瓣口舒张早期血流速度(MV)、心率(HR)等反映心功能变化指标的影响.结果PNS高、中剂量组与比索洛尔组的MV、EF均明显上升(P＜0.01),中剂量PNS组及比索洛尔组的FS明显上升、LVIDd和LVIDs则减小(P＜0.01～0.05).结论PNS及比索洛尔均具有改善AMI后LVRM病鼠心功能的作用,可用于治疗心梗后的左室重构.     

利用酵母双杂交系统鉴定MIF与CD74胞外片段间的相互作用

目的利用酵母双杂交系统鉴定巨噬细胞移动抑制因子（MIF）与Ⅱ型穿膜蛋白CD74胞外片段间可能的相互作用区域。方法利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的人全长MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115的重组诱饵质粒,以pGADT7为载体的人CD7473-232、CD7473-109、CD74109-149、CD74149-232的重组激活域（AD）质粒。用PEG/LiAC法将上述重组诱饵质粒分别与重组AD质粒两两共转化感受态酵母菌AH109,分别观察在SD/-Trp-Leu、含X-α-gal的SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实所构建的重组质粒全部正确。3种重组诱饵质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-trp上生长,4种重组AD质粒转化的酵母菌AH109均可在SD/-leu上生长,而且上述转化的酵母菌AH109均无自身转录激活活性。只有MIF、MIF50-65、MIF1-50/65-115与CD7473-232表达质粒共转化的酵母菌AH109可在SD/-Trp-Leu-Ade-His培养基上生长,能激活MEL1报告基因,使X-α-gal变蓝。结论MIF能以功能域MIF50-65非依赖性方式与完整的CD74胞外片段相互结合,进行细胞信号转导。     

三七总皂苷改善心肌梗死后心室重构大鼠心功能作用

目的研究三七总皂苷（PNS）对急性心肌梗死（AMI）后左心室重构（LVRM）大鼠心功能作用。方法除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随机分为对照组和实验组,连续4周分别灌胃给予生理盐水、福辛普利和PNS低、中、高剂量,观察PNS对病鼠室间隔舒张末期厚度（IVSd）、左心室舒张末期内径（宽度）（LVIDd）、室间隔收缩末期厚度（IVSs）、左心室收缩末期内径（宽度）（LVIDs）、左心室后壁舒张末期厚度（LVPWd）、左心室后壁收缩末期厚度（LVPWs）、左心室射血分数（EF）、左心室收缩百分率（Fs）、二尖瓣口舒张早期血流速度（MV）、心率（HR）等反映心功能变化指标的影响。结果PNS中、高剂量组的EF、FS及MV指标均显著提高（P〈0．01～0．05）。结论PNS通过提高左心室收缩和舒张功能,降低外周阻力,对病鼠AMI后LVRM心功能有保护和改善作用。     

巨噬细胞移动抑制因子活性抑制肽的筛选和鉴定

目的：巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）参与了多种病理生理过程，如多种类型的感染以及关节炎、肾小球肾炎等自身免疫疾病以及动脉粥样硬化的发生、形成过程。本文将利用酵母双杂交技术从预制随机肽库中筛选能有效抑制MIF活性的多肽，为研制MIF活性抑制剂提供候选分子。方法：利用亚克隆技术，构建“诱饵”载体pGBKT7-MIF。将pGBKT7-MIF与预制随机肽库质粒DNA共转化酵母Y190，进行酵母双杂交实验。从SD／-Leu／-His／-Trp／＋3-AT板上挑取阳性酵母克隆，扩增并提取阳性克隆的质粒DNA，再与pGBKT7-MIF行酵母双杂交以排除假阳性克隆。测定获得的克隆质粒上短肽的编码序列，并分别人工合成一定量的短肽。利用巨噬细胞移动抑制实验和血管内皮细胞成管腔实验测定短肽对MIF活性的抑制作用。     

人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达

【目的】为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用，克隆人canstatin基因，并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin。【方法】利用RT-PCR技术，从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatln cDNA，并定向克隆入真核表达载体pSecTas2C中。用脂质体转染法，将重组质粒pSccTag2C-canstatin转入COS7细胞。培养48h后，对转化的COS7细胞行PGR和Western-blot鉴定。用MTF法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用。【结果】从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatin cDNA片段。测序结果显示，克隆的canstatin cDNA长684bp，序列与献报道一致。从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段，Westem—blot结果显示，转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达。MTF检测显示，表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖。【结论】构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin，在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin。     

缺血后适应对活性氧及心肌细胞凋亡的影响

目的观察后适应和远程后适应对大鼠缺血再灌注模型活性氧生成及心肌细胞凋亡的影响，探讨活性氧在后适应和远程后适应中的作用。方法大鼠随机分为6组：①假手术组：只穿线，不结扎；②模型组：前降支缺血30min后再灌注2h：③后适应组：前降支缺血30min后进行3个循环后适应（缺血10s，再灌注10s，然后再灌注2h;④远程后适应组：前降支缺血24min时结扎右股动脉5min，在再灌注前1min开通股动脉，前降支再灌注2h；⑤2-巯基丙酰基甘氨酸组l；⑥2-巯基丙酰基甘氨酸组2：在缺血20min时尾静脉注射2一巯基丙酰基甘氨酸20mg／kg，余处理分别同组③和（或）④。实验结束后检测血丙二醛，心肌标本行HE染色、TUNEL检测和测定Bcl-2、BaxmRNA。结果①血丙二醛活性：后适应组、远程后适应组、2-巯基丙酰基甘氨酸组1和组2分别为（14．6±1．4）、（15．6±1．5）、（14．4±1．6）、（15．0±1．4）μmol／L，低于模型组（18．3±1．9）μmol／L，（P〈0．05）；②后适应组和远程后适应组Bcl-2表达高于模型组，而Bax表达低于模型组（P〈0．05）；2-巯基丙酰基甘氨酸处理有对抗作用；④细胞凋亡率：后适应组（25．3±2．3）％和远程后适应组（26．7±2．2）％低于模型组（50．0±7．9）％（P〈0．05），2-巯基丙酰基甘氨酸处理有对抗作用。结论后适应和远程后适应均能减少活性氧的产生：后适应和远程后适应都有减少细胞凋亡作用，其心肌保护作用与减少活性氧的产生有关：提示活性氧可能在后适应和远程后适应中发挥重要作用。     

血管紧张素转换酶2基因多态性与高血压合并缺血性脑卒中

目的 研究血管紧张素转换酶2 (ACE2)基因G9570A多态性与中国南方高血压患者发生缺血性脑卒中的关系。方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)的方法，检测136例单纯原发性高血压患者及139例原发性高血压合并缺血性脑卒中患者的ACE2基因，同时测定颈动脉内膜中层厚度及血浆血管紧张素Ⅱ水平，并进行组间对照研究，探讨ACE2基因G9570A多态性与原发性高血压患者中缺血性脑卒中发病的相关性。结果 原发性高血压合并缺血性脑卒中组A等位基因频率分布高于原发性高血压组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组ACE2基因型分布不同，差异有统计学意义（P<0.05）；原发性高血压合并缺血性脑卒中组携带A/AA基因者血浆血管紧张素Ⅱ水平高于携带G/GG基因者, 差异有统计学意义（P<0.05）。在男性原发性高血压合并缺血性脑卒中组携带A基因者颈动脉内膜中层厚度高于携带G基因者, 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 原发性高血压患者中，携带A/AA基因者发生缺血性脑卒中的危险性相对较大，原因可能与其血管紧张素Ⅱ水平较高有关。     

缺血后适应心肌线粒体能量代谢研究

目的研究缺血后适应心肌线粒体能量代谢特点。方法以Langendofff离体心脏灌注系统构建缺血后适应大鼠模型，随机分为对照组．再灌注组和后适应组，每组16只。平衡20min后，对照组灌注60min;再灌注组停灌30min，再灌注30min；后适应组停灌30min之后，循环6次再灌注10s，停灌10s，再灌注28min。记录心率和冠状动脉流量。冉灌注末取心肌．用高效液相色谱法测定高能磷酸化合物三磷腺苷、二磷腺苷和一磷腺苷含量；用差速离心法提取心肌线粒体，用氧电极法测定线粒体3态呼吸、4态呼吸和线粒体呼吸控制率。结果与再灌注组比较，后适应组明显提高再灌注末的心率和冠状动脉流量，明显提高心肌内二磷腺苷和一磷腺苷含量，三磷腺苷在各组差异无统计学意义。线粒体3态呼吸和线粒体呼吸控制率改善。结论心肌线粒体能量代谢改善，是缺血后适应心肌保护的可能机制之一。