不同剂量卡维地洛对AMI大鼠心肌炎症因子和基质金属蛋白酶表达及心功能的影响

目的探讨不同剂量卡维地洛治疗急性心肌梗死后大鼠心肌炎症因子和心肌基质金属蛋白酶表达与心功能的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死（AMI）模型共48只,随机分为卡维地洛低剂量治疗组(CAR-L组,2.5 mg·kg^-1·d^-1)、卡维地洛中剂量治疗组(CAR-M组,5.0 mg·kg^-1·d^-1)、卡维地洛高剂量治疗组(CAR-H组,10.0 mg·kg^-1·d^-1)和心肌梗死对照组（AMI组）,每组12只;另设假结扎组（Sham组,12只）。连续灌胃治疗4周后,检测各组血浆炎症因子（IL-6、TNF-α、MIF）和心肌基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9水平以及超声心动图测试左室心功能。结果同Sham组比较,AMI组的组织促炎症因子IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显增高（P<0.01）,左室射血分数EF和FS%明显降低（P<0.01）。同AMI组比较,卡维地洛治疗组的IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显降低（P<0.01）,而且EF和FS%值明显增高（P<0.05）,特别是CAR-M组和CAR-H组治疗效果更加明显。并且CAR-M组和CAR-H组的各项检测指标与Sham组无显著性差异（P>0.05）。结论中、高剂量卡维地洛不但可显著减少心肌梗死大鼠的促炎因子的表达,还能够明显降低心肌基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制左心室重构,改善心功能。     

用权重基因共表达网络分析识别心脏重构关键节点基因

目的采用权重基因共表达网络分析方法(WGCNA)挖掘心肌梗死后心脏重构的关键节点基因,并研究其与ACE1和ACE2的关系。方法从NCBI的GEO下载2个心肌梗死后心脏重构的全基因组表达数据GSE7487和GSE738;数据初处理后,用WGCNA构建基因共表达网络,识别与心脏重构相关的模块与关键节点基因,分析关键节点基因与ACE1和ACE2的关联性;并在心肌梗死后心脏重构大鼠模型中验证它们的关系。结果分析发现在GSE7487,17个模块中有6个模块与心脏重构相关,模块基因富集于16条KEGG信号通路。在GSE738,5个模块与心脏重构相关,模块基因富集于15条KEGG信号通路,其中有10条信号通路与第一组数据结果相同,这些信号通路涉及心肌肥厚病理、氧化磷酸化、代谢等。进一步利用模块内连通性和基因重要性找到了一些心脏重构的关键调控基因,如钙依赖磷酸酶调节子(RCAN1)。RCAN1表达与ACE1表达高度相关,但与ACE2不相关。在动物模型中验证结果与上述结果一致。结论权重基因共表达网络分析方法是一个高效的系统生物学方法,应用本方法发现了心脏重构的关键节点基因,其中RCAN1可能影响ACE1-ACE2在肾素血管紧张素系统中的平衡。     

miR-199a-3p靶向Smad1促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达

目的探讨微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体 C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光 素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3’端非翻译区（3’-UTR）的结合作用;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和 Western blot 法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p 后,Smad1 及纤维化相关基因表达。Western blot 检测转染 miR-199a-3p,Smad1 siRNA 后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1 和Smad3 的激活水平。结果RT-qPCR 和 Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示 miR-199a-3p 与Smad1 3’-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot 结果证实miR-199a-3p 可在转录水平抑制Smad1 表达。 过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论 miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。     

人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定

目的:构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法:从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物,并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞(HEK293)中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs,利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果显示,重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论:成功构建了人miR-133a重组腺病毒,并在hMSCs中高效表达出miR-133a,为进行miR-133a的功能研究创造条件。     

老年人糖尿病性冠心病中医证型、血糖化血红蛋白、心肌钙蛋白I的特点

目的观察老年人糖尿病性冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）中医证型特点与糖化血红蛋白、心肌钙蛋白I的关系。方法对33例糖尿病性冠心病患者及经冠状动脉造影结果排除冠心病且确诊非糖尿病的对照组患者27例的中医证型、冠状动脉造影结果、糖化血红蛋白、心肌钙蛋白I水平进行回顾性分析。结果糖尿病性冠心病患者的中医证型中，单一证型较少，复合型或相兼证型多见，出现频度由高向低的证型分别为气虚证、阴虚证、血瘀证、痰浊证；糖尿病性冠心病患者冠状动脉血管病变以多支血管病变、狭窄程度严重为特点；糖尿病性冠心病组血清糖化血红蛋白和肌钙蛋白I浓度较对照组高，差异有统计学意义[8．18％±2．30％VS．5．68％±0．56％，P〈0．01；（4．389±1．334）ng／Lvs．（0．021±0．002）ng／L，P〈O．01]。结论老年人糖尿病性冠心病患者中医证型特点为复合证型多见，尤以气虚、阴虚证兼夹血瘀、痰浊为主，治法宜益气养阴、逐瘀化痰；定期随访检查血清糖化血红蛋白和肌钙蛋白I浓度有助于改善糖心病预后。     

高血压病患者基质金属蛋白酶3基因多态性与左室重构的关系

 目的：探讨高血压病患者基质金属蛋白酶3（MMP-3）基因多态性与左室重构的关系。方法：入选190名高血压病患者，彩色多普勒检测心脏相关指标，酶联免疫吸附法检测血清MMP-3水平，采用多聚酶链反应（PCR）和测序方法检测MMP-3基因启动子-1512位点5A和6A等位基因。结果：高血压伴左室肥厚108人，不伴左室肥厚82人；MMP-3基因型测序结果6A纯合子128人，5A纯合子9人，5A/6A杂合子53人；携带5A基因者血清MMP-3水平比携带6A基因者高，但差异无显著性；血清MMP-3水平与左室肥厚指标正相关；携带5A基因高血压患者发生左室肥厚的机率是携带6A基因者的2倍。结论：MMP-3基因多态性影响血清MMP-3水平的表达，从而对高血压病患者左室重构的发生、发展产生一定的作用。     

广东地区学龄儿童 A族链球菌上呼吸道带菌及感染情况调查

Ａ族溶血性链球菌 (ＧＡＳ)上呼吸道感染是儿童的常见病 ,其引起的后遗症风湿热 (ＲＦ)和风湿性心脏病 (ＲＨＤ)仍然是当今发展中国家儿童、青少年最常见的疾病。我们对广东地区儿童咽部ＧＡＳ带菌及感染情况进行了观察。对象采取随机整群抽样方法于 1988年 9月～ 1989年 8月 ,选择广州市两所小学和广东番禺大石镇 (农村 ) 10～ 12岁(ＲＦ易感自然人群 )学生各 10 8人 ,其中男 96人 ,女 12 0人。研究方法1.随访调查 :了解被检者家庭和社会环境状况 ,每月询问当月有关咽痛、发热、皮肤感染及用药情况 (以前学生已有自己的记录 ) ,检查咽部、…     

巨噬细胞移动抑制因子诱导血管生成相关基因的表达

【目的】研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对人血管内皮细胞表达血管生成相关基因的诱导作用。【方法】通过亚克隆,构建原核表达质粒pET22b-MIF,并转化人工程菌B121（DE3）。用Ni-亲合柱分离纯化BL21（DE3）中经IPTG诱导表达的重组MIF。用巨噬细胞移动抑制试验鉴定复性的重组MIF的活性。分别用0、30、60、120ng／mL的重组MIF处理人血管内皮细胞12h,通过Real-time定量PCR检测人血管内皮细胞中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-α、PDGF-α的mRNA表达。用体外血管生成试验检测重组MIF诱导人血管内皮细胞的成管腔作用。[结果]正确构建了重组质粒pET22b-MIF。经IPTG诱导,在大肠杆菌中以包涵体形式表达出重组MIF。复性的重组MIF对巨噬细胞移动的抑制水平达30％（P＜0.05）。重组MIF能特异地诱导HVECs中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-α、PDGF-α表达,并能特异地诱导人血管内皮细胞形成管腔结构。【结论】在大肠杆菌中成功表达出MIF,MIF能特异地诱导人血管内皮细胞中血管生成相关基因的表达。     

建立缝隙连接蛋白43基因定点突变细胞株的研究

目的定点突变是通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的 DNA片段中引入包括碱基的添加、删除、点突变等所需变化。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是实验室中改造/优化基因常用的手段。连接蛋白43(connexin43,Cx43)是心脏表达最丰富的连接蛋白,主要分布在心室,其构成的缝隙连接(gapjunction,GJ)在心肌细胞中的电偶联中起着非常重要的作用。近年来的研究表明干细胞移植治疗心肌梗死时,细胞间电偶联障碍是导致心律失常副作用的一个重要原因。己知Cx43的磷酸化状态可以调节通道的功能,磷酸化常见的是368位点的丝氨酸磷酸化。我们对缝隙连接蛋白43基因(Cx43)的特定碱基进行定点改变,从而改变对应的氨基酸序列,并对表达产物进行研究,以利于将来探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)中转染突变的Cx43对其向心肌分化能力的影响,及其磷酸化状态是否对心律失常有调控作用。方法设计引物,sense:5’-CTTCAAGCAGAGCCAGCAGTCGTGCCAGCA-3’,antisense:5’TGCTGGCACGACGACTGCTGGCTCTGCTTGAAG-3’。以已构建的Pcdh-Cx43为模板,使用Stratagene基因定点突变试剂盒进行PCR扩增,用DpnI酶识别甲基化位点并将其酶切,PCR产物转化后筛选阳性克隆,提取质粒测序验证。在293FT中与其它3个穿梭质粒一起包装,再将慢病毒颗粒转染BMSCs,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆BMSCs-mCx43,在压力培养基下传代培养。用流式细胞仪检测BMSCs-mCx43的干细胞相关表面标记表达情况,同时用western blot检测BMSCs-mCx43的蛋白表达情况。结果测序结果显示突变位点正确,荧光照片显示90%的293FT表达绿色荧光。50%的BMSCs有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞仪检测示BMSCs-mCx43细胞CD29阳性表达94%±0.8%,CD73阳性表达92%±0.7%,几乎不表达CD34和CD105,与未转染病毒的BMSCs和转染空病毒载体的BMSCs的表面标记一致。Western blot结果     

脑利钠肽后处理能减少在体大鼠缺血再灌注后的心肌损伤

目的 通过建立在体大鼠心肌缺血再灌注模型,在大鼠心肌缺血后给予脑利钠肽,探讨脑利钠肽后处理对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法 24只Sprague-Dawley（SD）大鼠,雄性,随机分为：（1）假手术组（SHAM）：只开胸,不结扎冠状动脉;（2）缺血再灌注组（I/R）：结扎冠状动脉左前降支45分钟、再灌注 3小时;（3）脑利钠肽组（BNP）：结扎冠状动脉左前降支45分钟、再灌注 3小时,在再灌注前10分钟、开始静脉予以BNP 0.01µg·kg - 1·min - 1, BNP静脉恒速维持至再灌注结束。用2,3,5,氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrzolium chloride, TTC)检测缺血再灌注心肌的梗死面积;用TUNEL方法检测缺血再灌注心肌的凋亡;检测心肌组织SOD、MDA的浓度以评估缺血再灌注心肌活性氧的水平。结果 假手术组心肌无梗死,缺血再灌注组的大鼠心梗面积为（44.02±10.15）%,脑利钠肽组的心梗面积为（21.53±9.08）%(P<0.05)。假手术组、BNP组与缺血再灌注组的心肌细胞凋亡指数分别为(3.13±1.62)%、(19.45±9.62)%、(38.46±12.31)% (P<0.05)。与缺血再灌注组相比,BNP组的缺血再灌注心肌组织中MDA减少(P<0.05)、而SOD的增多(P<0.05)。结论 BNP后处理能减少在体大鼠缺血再灌注的心肌损伤,其机制与其减少心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡及降低心肌缺血再灌注损伤时的活性氧水平相关。