缺氧-复氧对培养的大鼠心肌细胞损伤与细胞凋亡的影响

目的:探讨体外培养的大鼠心肌细胞在缺氧(缺血)和缺氧-复氧(再灌注)状态下心肌细胞损伤和细胞凋亡情况。方法:常规方式培养SD大鼠心肌细胞。给予模拟缺血(缺氧)溶液、模拟复氧(再灌注)液以及终浓度为200U/mL的超氧化无歧化酶(SOD)干预处理,制备缺氧-复氧损伤组(H/R组)、SOD+缺氧-复氧损伤组(SOD+H/R组)和缺氧预处理组(HP组)模型,未经处理的为正常对照组(control组)。结果:屹H/R组的细胞存活率较对照组明显降低(P<0.01);H/R+SOD组和HP组的细胞存活率虽然较正常对照组明显降低(P<0.05),但比H/R组为高(P<0.05);亿H/R组培养液中培养液中心肌酶活性显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。役H/R组心肌细胞内的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量也明显增高,与HP组和H/R+SOD组的心肌细胞内MDA含量比较有显著性差异(P<0.05);而HP组、H/R组与对照组间比较,无明显差异(P>0.05);均提示了缺氧-复氧过程中心肌细胞损伤严重,也说明了缺氧(血)预处理或SOD均有细胞保护作用。臆H/R组心肌细胞内游离钙含量增加,显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01);逸流式细胞仪测定出H/R组心肌细胞凋亡率也明显高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。心肌细胞凋亡的数量与细胞内钙的增加呈正相关(P<0.01)。肄电镜下所见H/R组的许多细胞表现为胞浆减少,核深染、固缩状态,异染色质不均匀,部分线粒体呈空泡变性,或是肌浆网囊泡变等凋亡期或凋亡前期样改变,少数呈凋亡向坏死方面改变;而其他组则少见此些变化。结论:体外培养的心肌细胞在缺氧-复氧情况下同样可加重心肌细胞损伤,可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的。     

编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备

[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.     

巨噬细胞移动抑制因子基因的克隆和原核表达

目的：扩增、克隆人巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因，并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组MIF蛋白。方法：根据人MIF基因序列，设计、合成PCR引物，利用RT-PCR技术从人T淋巴细胞mRNA中扩增MIF基因。将MIF定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，并将构建正确的重组表达载体pGEX-4T-MIF转化工程菌BL21(DE3)，用异丙基硫代-β-D-半乳糖（IPTG）诱导表达重组MIF蛋白。用GSTrap亲合柱纯化表达产物GST-MIF，行柱上凝血酶消化，洗脱获得MIF蛋白。用巨噬细胞移动抑制试验（MMI）鉴定MIF蛋白的生物活性。结果：限制性内切酶分析和DNA测序结果表明，成功构建了重组质粒pGEX-4T-MIF，人MIF cDNA长348 bp，编码115个氨基酸。经IPTG诱导，高效表达出可溶的GST-MIF蛋白。SDS-PAGE 和 Western blotting分析显示，GST-MIF经凝血酶消化，获得13 kU的MIF蛋白。MIF蛋白对巨噬细胞移动的抑制率达30%，具有生物活性。结论：克隆、测定了人MIF基因，在大肠杆菌表达出具有生物活性的MIF蛋白。     

血管紧张素转换酶2基因型与厄贝沙坦改善高血压患者左室重构及功能的关系

背景 一些研究结果 提示血管紧张素转换酶2(ACE2)具有调节心脏结构和功能的作用,ACE2基因多态性与左室结构和功能相关,但ACE2基因型对降压药物改善高血压患者的左室重构和功能是否有影响,目前尚不清楚.目的 观察ACE2基因G9570A多态性与厄贝沙坦影响高血压患者左室结构及功能的相关性.方法 选择坐位收缩压<180 mmHg和(或)舒张压90～109 mmHg无血缘关系的汉族原发性高血压患者395例(男性205例,女性190例),均服用厄贝沙坦治疗,起始剂量150 mg/d,治疗4周后血压未达到有效标准者药量加倍,共观察48周.应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法 检测ACE2基因G9570A多态性,并随机抽取20份标本进行基因测序以核实基因分型.按性别分组分析降压幅度及左室结构和功能各参数的改变值与基因型的关系.结果 经过48周厄贝沙坦治疗,所有患者血压明显下降(P<0.01).不同亚组间血压下降幅度无统计学意义(P0.05).携带A等位基因患者左室质量和左室质量指数下降幅度及心脏功能改善程度显著高于其他亚组(P<0.05).结论 ACE2基因型与左室质量指数下降值有关.ACE2基因多态性对高血压心脏结构和功能损害的患者降压药物的选择有一定的参考价值,但需进一步深入研究.     

链球菌联合抗体测定对诊断风湿热、急性肾炎的临床价值

介绍抗链球菌脱氧核糖核酸酶B(ADNB)微量测定法,并评价了其联合抗链球菌溶血素“O”(ASO),对诊断急性风湿热(ARF)和急性肾小球肾炎(AGN)的价值,可使ARF由单项ASO测定的阳性检出率由70%提高至84%,使AGN由70%提高至81%,对帮助临床诊断A组乙型溶血性链球菌(AGS)感染及其后发症ARF和AGN具有重要价值.     

不同剂量卡维地洛对AMI大鼠心肌炎症因子和基质金属蛋白酶表达及心功能的影响

目的探讨不同剂量卡维地洛治疗急性心肌梗死后大鼠心肌炎症因子和心肌基质金属蛋白酶表达与心功能的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死（AMI）模型共48只,随机分为卡维地洛低剂量治疗组(CAR-L组,2.5 mg·kg^-1·d^-1)、卡维地洛中剂量治疗组(CAR-M组,5.0 mg·kg^-1·d^-1)、卡维地洛高剂量治疗组(CAR-H组,10.0 mg·kg^-1·d^-1)和心肌梗死对照组（AMI组）,每组12只;另设假结扎组（Sham组,12只）。连续灌胃治疗4周后,检测各组血浆炎症因子（IL-6、TNF-α、MIF）和心肌基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9水平以及超声心动图测试左室心功能。结果同Sham组比较,AMI组的组织促炎症因子IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显增高（P<0.01）,左室射血分数EF和FS%明显降低（P<0.01）。同AMI组比较,卡维地洛治疗组的IL-6、TNF-α、MIF和MMP-2、MMP-9含量明显降低（P<0.01）,而且EF和FS%值明显增高（P<0.05）,特别是CAR-M组和CAR-H组治疗效果更加明显。并且CAR-M组和CAR-H组的各项检测指标与Sham组无显著性差异（P>0.05）。结论中、高剂量卡维地洛不但可显著减少心肌梗死大鼠的促炎因子的表达,还能够明显降低心肌基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制左心室重构,改善心功能。     

大蒜素对大鼠离体肾内动脉血管张力的影响

目的观察大蒜素（Allicin）对离体肾内动脉经血管收缩剂预收缩张力的影响,探讨其对微血管的作用机制。方法显微操作下取SD大鼠肾内动脉,制备成1.8～2.0 mm长的血管条,用两根不锈钢丝穿过血管腔,固定于微血管测定仪的浴槽内,置于37℃通有混合气体（95%O₂+5%CO₂）的生理盐溶液中。平衡1小时后,分别给予受体依赖性血管收缩剂苯肾上腺素（phenylephrine,PE）1μmol·L^-1、5-羟色胺（5-hydroxy tryptamine,5-HT）2μmol·L^-1、血栓素A2类似物U46619 100 nmol·L^-1和非受体依赖性血管收缩剂60mmol·L^-1 KCL预收缩血管,采用累积给药法加入大蒜素,观察不同浓度的大蒜素对血管张力的影响。结果大蒜素对PE、5-HT、U46619预收缩内皮完整的血管环,均呈浓度依赖性的舒张血管作用;对PE预收缩用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(100 mmol·L^-1)孵育30 min保留内皮的血管环以及采用机械法去除内皮的血管环,均呈浓度依赖性的舒张血管作用,与内皮完整组无比较统计学差异;对KCL预收缩内皮完整的血管环,各浓度的大蒜素均无明显的舒张血管作用。结论大蒜素对PE、5-HT、U46619预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用,对KCL预收缩的血管环无舒张作用。提示其舒张血管的作用与受体途经有关,与L型钙通道途经无关,并且对PE预收缩血管的舒张作用不依赖于内皮功能的完整性。     

全反式维甲酸对高血压大鼠心脏氧化应激水平的影响

目的:探讨全反式维甲酸(atRA)对高血压心脏还原型辅酶I氧化酶P22亚单位(p22phox)表达以及氧化应激水平的影响。方法:采用12周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同源对照WKY大鼠,经腹腔注射at-RA,为期1月。分别采用免疫印迹、硫代巴比妥酸比色以及透射电镜技术测定atRA治疗后SHR心脏p22phox的表达、丙二醛(MDA)含量以及心肌超微结构情况。结果:与WKY对照组相比,SHR心脏组织中p22phox蛋白表达与MDA含量明显升高(P均<0.01)。而atRA治疗后SHR(低、高剂量atRA组)大鼠心脏组织中p22phox蛋白表达与MDA水平出现下调(P均<0.05),同时伴有心肌损伤减轻。结论:长期atRA治疗可降低SHR大鼠心脏组织中p22phox表达与MDA水平,提示atRA在高血压病中具有一定的抗氧化效应。     

用三七总皂苷与卡维地洛治疗AMI后大鼠改善心功能作用的疗效比较与评价

目的研究三七总皂苷与卡维地洛对心肌梗死后大鼠左室心功能改善作用的疗效并比较评价。方法手术法结扎左冠状动脉前降支建立SD大鼠AMI模型36只,将模型鼠随机分为心梗对照组（AMI组）,三七总皂苷治疗组(PNS组,80 mg·kg^-1·d^-1)和卡维地洛治疗组(CARV组,6 mg·kg^-1·d^-1),每组12只;另设假结扎组（Sh组,12只）。术后24小时开始灌胃给药,4周后对各组大鼠进行超声心动图心功能和血浆脑钠肽（NT-proBNP）浓度检测。结果 （1）与Sh组比较,AMI组左室射血分数（EF）和左室收缩百分率（FS）、室间隔舒张、收缩末期厚度（IVSd、IVSs）与左室前壁收缩末期厚度（LVAWDs）均明显降低（P<0.01）,左室舒张、收缩末期内径（LVIDd、LVIDs）显著增加,且左室后壁收缩末期厚度（LVPWDs）明显增加（P<0.05）。而二尖瓣血流E/A比值下降明显;心肌运动应变率（Radial Strain Rate）减小,达峰时间（TPK,ms）明显延长;NT-proBNP浓度显著增高（P<0.01）。（2）与AMI组比较,PNS组和CARV组的EF、FS、IVSd、IVSs与LVAWDs明显增加,而LVIDd、LVIDs和LVPWDs明显降低（P<0.01）;且心肌运动应变率明显增加,达峰时间明显缩短;NT-proBNP浓度明显降低。（3）PNS组与CARV组比较,PNS组的EF、FS和LVAWDs增加显著,LVIDd、LVIDs减小明显;而IVSd、IVSs、和LVPWDs无明显差异（P>0.05）。并且,PNS组的二尖瓣血流E峰、A峰和E峰下降速率均明显增大（P<0.05）,而E/A比值和心肌应变率、达峰时间与NTproBNP浓度两组无明显差异。结论心肌梗死后大鼠的左心室收缩和舒张功能异常严重;用三七总皂苷和卡维地洛治疗4周后均能明显改善其心功能,防止心衰;但PNS在提高EF、LVAWDs和二尖瓣血流方面更优于卡维地洛。     

Relationship between polymorphism of angiotensin-converting enzyme 2 gene and the risk factor of essential hypertension with complicated stroke

Background Essential hypertension (EH) is considered to be one of the most important risk factor of ischemic stroke. Studies about risk factors in the patients are meaningful in early forecast and effective prevention of the onset of stroke. Renin-angiotensin-aldosterone system plays an important role in the regulation of blood pressure and the development of stroke, while recent studies have found that the angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) may be a reversal agent for the development and progression of ischemic stroke. Methods The ACE2 gene was measured in 139 EH patients with ischemic stroke using polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) tests. Detailed and complete clinical and biochemical data were collected, including pulse pressure, hsCRP, IMT, HDL-C and uric acid levels. Study the correlation between angiotensin-converting enzyme 2 gene and the risk factor for onset of ischemic stroke in EH patients. Results Pulse pressure, hsCRP, IMT and uric acid levels had a positive correlation with on- set of ischemic stroke in EH patients. Among male patients , pulse pressure, hsCRP, IMT and HDL-C were higher in patients carrying A allele than B allele (P < 0.05). While these factors were different in female pa- tients carrying different genotypes in which AA allele were highest. Patients with various genotypes showed different uric acid levels but showed no significant difference. Conclusion Among EH patients with complicated ischemic stroke, those carrying the A / AA allele show high level of risk factors and is likely to have the susceptibility of recurrence of stroke.