群体性风湿热一级预防观察

目的 探讨一种简易、经济、有效的群体性风湿热一级预防方法。方法 选取394名9~12岁小学生随机分成观察组(n=201)和对照组(n=193)两组进行甲链性咽炎早期诊断,一旦确诊甲链性咽炎,观察组即给予新青霉素或红霉素治疗,对照组则密切随访。结果 经过逐月观察和干预后,观察组甲链性咽炎发病率为1.28%,对照组为4.15%,两者差异非常显著(P<0.001)。观察组甲链带菌率为11%、对照组为19%,两者差异非常显著(P<0.001)。观察组干预后抗DNA酶B(ADNaseB)抗体平均几何均数(GMT)为146U/ml,对照组为166U/ml,两者差异非常显著。观察组甲链性咽炎患者的ADNaseB抗体平均GMT为184U/ml、对照组为267U/ml,两者差异非常显著(P<0.001)。观察组甲链感染率为17%、对照组为30%,两者比较,差异非常显著。观察组甲链性咽炎患者感染率为39%,对照组为63%,两者比较,差异非常显著(P<0.001)。结论 研究表明,本研究采用的方法进行群体性风湿热一级预防确实有效,具有流行病学意义和实用价值。     

人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达

[目的]为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用,克隆人canstatin基因,并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin.[方法]利用RT-PCR技术,从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatincDNA,并定向克隆入真核表达载体pSecTag2C中.用脂质体转染法,将重组质粒pSecTag2C-canstatin转入COS7细胞.培养48h后,对转化的COS7细胞行PCR和Western-blot鉴定,用MTT法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用.[结果]从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatincDNA片段.测序结果显示,克隆的canstatincDNA长684bp,序列与文献报道一致.从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段,Western-blot结果显示,转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达.MTT检测显示,表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖.[结论]构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin,在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin.     

用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达

目的：建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs），研究小干扰RNA(siRNA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用。 方法： 用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中。用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP)。利用T7 RNA转录试剂盒，制备可抑制GFP基因表达的siRNA（GFPsiRNA）和无关对照的RNA（control siRNA）。用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中。继续培养48 h后，检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平。 结果： 用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株，可以观察到GFP的稳定表达。HUVEC-GFP转化siRNA后48 h，GFP的荧光强度明显下降，而对照组的荧光强度无明显下降。半定量RT-PCR检测显示，GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用，抑制率达40%，而control siRNA对GFP mRNA表达水平无明显的抑制作用。 结论： 利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达。     

应用温度梯度凝胶电泳检测冠心病人β2-AR基因多态性

[目的]建立用于测定β2肾上腺素受体(β2-AR)基因多态性的温度梯度凝胶电泳(TGGE)技术,检测Arg16Gly和Gln27Glu,以确定冠心病Beta2AR基因的多态性.[方法]以经心脏造影确定为冠状动脉阻塞的病人DNA标本为模板,选择性PCR扩增β2-AR Arg16Gly,Gln27Glu区域,然后经测序确定,建立并优化TGGE技术参数.[结果]建立了分析130bpβ2-AR Arg16Gly,205 bp Gln27Glu的TGGE技术,可检测出Arg16Gly,Gln27Glu的多态性.30例样品中,13例为Arg16Arg型,5例为Gly16Gly型,12例为Arg16Gly型;22例为GIn27Gln型,1例为Glu27Glu型,7例为Gln27Glu型.[结论]所建立的PCR-TGGE技术可用于β2肾上腺素受体16及27位点基因多态性的分子筛选.     

微小RNA-199a-5p通过靶向SIRT1促进心肌纤维化相关基因表达

目的:研究微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)对心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的调控作用及其可能作用的靶基因。方法:原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;双萤光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与潜在靶基因沉默信息调节因子1(SIRT1)3’端非翻译区(3’-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测SIRT1以及纤维化标志物胶原蛋白(Col)1a1、Col3a1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达。结果:在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌成纤维细胞中,Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达增强,miR-199a-5p表达上调。在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-5p可以增强Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199a-5p与SIRT1 3’-UTR有结合作用。RT-q PCR和Western blot结果证实miR-199a-5p可在转录水平抑制SIRT1表达。过表达miR-199a-5p和沉默SIRT1均能一致性促进心肌成纤维细胞中Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。抑制AngⅡ诱导的小鼠心肌成纤维细胞中NF-κB激活,可显著降低miR-199a-5p表达。结论:SIRT1是miR-199a-5p的作用靶基因,并介导miR-199a-5p促进纤维化标志物Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。     

糖尿病性心肌纤维化中上调表达长链非编码RNA（1ncRNA）的鉴定

目的鉴定在糖尿病性小鼠心肌和糖尿病性心肌纤维化细胞模型中一致上调表达的长链非编码RNA（1ncRNA）。方法通过Masson染色检测糖尿病db／db小鼠和db／m对照小鼠心肌中的胶原含量。用小鼠lncRNA表达谱芯片检测小鼠心肌中lncRNA表达,用荧光定量PCR鉴定6个代表性的在糖尿病性心肌中高表达的lncRNAs。用33mmol／L葡萄糖分别和0．1、0．2、0．4、0．6mU葡萄糖氧化酶处理小鼠心肌成纤维细胞,通过检测纤维化相关基因仪．SMA、Collal和Col3al表达来确定合适的葡萄糖／葡萄糖氧化酶（HG／Go）处理条件。用确定条件的HG／Go处理小鼠心肌成纤维细胞,用荧光定量PCR鉴定在糖尿病性心肌和糖尿病性心肌纤维化细胞模型中一致上调表达的lncRNA。结果Masson染色显示,糖尿病db／db小鼠心肌的胶原含量显著升高,与对照小鼠比较差异有统计学意义（P〈0．01）。同db／m对照小鼠相比,糖尿病db／db小鼠心肌中lncRNA出现差异性表达,其中354个lncRNAs呈1．5倍以上高表达,292个lncRNAs呈1．5倍以上下调表达。检测的6个代表性上调表达的lncRNAs中,AK014842、AK076377和BF607975表达在糖尿病性心肌中显著上调。33mmol／L葡萄糖结合0．2、0．4mUGo可以有效上调小鼠心肌成纤维细胞中α—SMA和Col3al表达。荧光定量PCR结果显示,AK014842和BF607975在33mmol／L葡萄糖结合0．2mUGo处理的小鼠心肌成纤维细胞中表达显著升高。结论LncRNAAK014842和BF607975在糖尿病性心肌和糖尿病性心肌纤维化细胞模型中一致上调表达。     

电针镇痛与神经病理性疼痛大鼠脊髓大麻素2受体表达

目的:观察电针对慢性坐骨神经缩窄性损伤(CCI)模型大鼠的镇痛效果及脊髓背角、背根神经节大麻素2受体(CB2)表达,探讨电针镇痛可能的机制.方法:健康SD雄性大鼠共40只,随机分为CCI假手术组(n=10);CCI对照组(n=10);CCI假电针组(n=10);CCI电针组(n=10).所有大鼠均在术前、术后第9、11、13、15、16d进行机械性痛阈测定;各组大鼠于术后第16d,采用Western blot法测定脊髓背角、背根神经节CB2受体蛋白表达.结果:CCI对照组、CCI假电针组和CCI电针组大鼠在治疗前机械性痛阈较术前明显下降,与同一时间段CCI假手术组大鼠比较差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后6d,CCI电针组机械性痛阈较治疗前有一定改善(P＜0.05);CCI电针组与CCI假电针组和CCI对照组比较脊髓背角、背根神经节CB2的表达有下降的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:本研究观察到电针治疗能够在一定程度上改善CCI模型大鼠的机械性痛阈,起到一定的镇痛效果,但是本研究结果未能提示其镇痛机制有脊髓背角、背根神经节CB2的参与.     

低剂量STZ和L-NAME联合高脂饮食诱导的代谢综合征大鼠心肌纤维化

目的 建立大鼠代谢综合征(MS)模型并了解其心功能和心肌组织结构的变化特征,为其干预治疗研究提供实验平台.方法 雄性SD大鼠尾静脉推注20 mg/kg STZ后高脂饲料喂养6周并予0.04%L-NAME 和10%果糖混合溶液饮用,观察大鼠MS基本特征的变化.6周后处死大鼠并采用离体心脏功能实验评价心功能,HE染色及免疫...     

Connexin 43 gene-modified BMSCs for treating myocardial infarction

Background Stem cells have multilineage differentiation capacity,which makes bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) derived relatively easy and provides a promising alternative treatment for myocardial infarction(MI).The in vivo cardiac differentiation and functional effects of unmodified BMSCs after MI are controversial.Poor moderate survival benefits of BMSCs-implanted rats were caused by incomplete electromechanical integration induced by tissue heterogeneity between myocytes and engrafted BMSCs in th...     

减阻剂促进大鼠缺血后肢血管新生的初步研究

目的减阻剂是一类具有减少流体阻力的线性高分子化合物,聚氧化乙烯（polyethylene oxide,PEO）是目前研究较多的一类物质,本实验拟观察PEO治疗大鼠慢性缺血后肢的血流量变化及血管免疫组化表达,评价减阻剂能否促进大鼠慢性缺血后肢的血管新生。方法雄性Wistar大鼠结扎并离断右侧股动脉建立慢性下肢缺血模型后,随机分为实验组及对照组（n=6）,隔天分别静脉输注PEO和生理盐水,共治疗2周。于术前及术后第1、3、7、14、21、2 8天经静脉连续输注超声微泡造影剂,以实时成像技术分别进行心腔和骨骼肌声学造影（contrastenhanced ultrsound,CEU）,测定心腔和后肢骨骼肌的血流容积（代表血管的密度,A）及微泡速度（代表血流速度,β）,以心腔声学强度标化骨骼肌造影,计算骨骼肌的绝对血流量。第28天测量大鼠后肢骨骼肌的血流储备,予电刺激（频率120次/min）2 min后行声学造影检查。将大鼠后肢骨骼肌行免疫组化检查。结果 4周后,减阻剂治疗组大鼠缺血后肢的血流量明显高于盐水对照组（0.319±0.044）mL·g^-1·min^-1 vs.（0.211±0.040）mL·g^-1·min^-1,P=0.001,减阻剂治疗组慢性缺血后肢的血流储备亦高于盐水对照组（3.227±0.941 vs.1.867±0.551,P=0.012）。超声造影示减阻剂组的骨骼肌血管容积与生理盐水组比较有显著差异（0.446±0.111 vs.0.310±0.059,P=0.024）,免疫组化提示减阻剂组的每高倍镜下小动脉个数较盐水组的多（9.25±1.72 vs.6.23±0.86,P=0.026）。结论减阻剂能增加大鼠慢性缺血后肢的血流量及血流储备,免疫组化提示减阻剂组的小动脉数量较盐水组多,提示减阻剂可能通过增加血流剪切力促进缺血下肢的血管新生及动脉形成过程。