升降散抗小鼠流感病毒性肺炎的实验研究

流感，祖国医学属于“外感热病”范畴，以发病率高、流行广泛、传播迅速为主要特点。而升降散是清代名医杨栗山所创的治温十五方之首方，已广泛地应用于治疗包括流感在内的辨证为火郁证的外感热病，取得了较好的疗效。笔者曾实验证实升降散体外抗甲型流感病毒的作用，笔者将以感染流感病毒的小鼠作为动物模型，研究升降散的体内抗甲型流感病毒作用。     

RT-PCR结合地高辛标记定量检测猴免疫缺陷病毒RNA

从感染猴免疫缺陷病毒（ＳＩＶ）的恒河猴血浆和培养细胞株中分别纯化病毒ＲＮＡ，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＳＩＶｇａｇ基因特异的ＤＮＡ片段。将ＲＴ－ＰＣＲ产物用地高辛标记，检测灵敏度比凝胶电泳和斑点杂交提高１００倍。用已知拷贝数的ＲＮＡ作为定量标准，可估计待测样本中ＳＩＶＲＮＡ的拷贝数。     

DMN致小鼠肝损害凝血系统改变及复方肝毒清的干预作用

目的观察二甲基亚硝胺(DMN)诱导的小鼠肝损伤模型凝血系统改变及中药的影响。方法以DMN腹腔注射造模,观察凝血酶原时间(PT)、凝血酶原活动度(PTA)、肝组织凝血因子mRNA、凝血调控因子u-PA、t-PA、PAI-1、TAFImRNA量动态变化;并另取小鼠造模分组灌胃给药,观察复方肝毒清对u-PA、t-PA、PAI-1、TAFI mRNA的影响。结果 DMN造模后PT逐渐延长,48～96h时最长;PTA减小,36～96h之间均小于40%;F2、F11 mRNA造模后有显著升高,均在72h时达到最高;u-PA和t-PA mRNA均明显升高;PAI-1和TAFImRNA均显著降低。复方肝毒清能使PT缩短、PTA升高至40%以上、u-PA和t-PAmRNA水平显著下降、PAI-1和TAFI mRNA明显升高。结论 DMN诱导的肝损伤小鼠凝血系统有明显变化,中药复方可能主要是通过影响凝血纤溶调控因子表达而改善DMN诱导的小鼠肝损伤凝血系统的作用。     

淫羊藿、巴戟天中药提取物对恒河猴M0、M1型单核衍生巨噬细胞基因表达的影响

【目的】探讨中药淫羊藿、巴戟天提取物(中药注射液喘可治的组成)对恒河猴单核衍生的巨噬细胞在未极化(M0)、M1极化条件下基因表达的影响,分析其可能的免疫调节的作用机制。【方法】采用密度梯度离心法分离中国恒河猴外周血单个核细胞(PBMCs),采用贴壁法纯化出单核细胞,并以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5 d以使单核细胞分化成巨噬细胞;然后不加入极化因子(M0)或以干扰素γ(IFN-γ,继续培养2 d)诱导巨噬细胞极化为M1表型,同时分别加入淫羊藿、巴戟天提取物进行干预;然后提取m RNA并逆转录后,采用实时荧光定量PCR检测CCR5、CD4、CTLA-4、Fox P3、IDO、IL-10、TGF-β等基因表达量。【结果】与空白对照组比较,加入巴戟天提取物培养的M0巨噬细胞基因表达上调不明显;经淫羊藿提取物培养的M0巨噬细胞,CCR5基因表达量上调4.21倍,TGF-β上调7.66倍,Fox P3、IL-10轻度上调,而CD4、CTLA-4、IDO等基因表达改变倍数无明显变化。经巴戟天提取物刺激的M1型巨噬细胞,CTLA-4基因表达量上调3.22倍,Fox P3上调3.69倍,CCR5、CD4、IL-10、IDO基因改变倍数均无明显变化,TGF-β未测出;而由淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬细胞,IL-10的表达量上调11.83倍,Fox P3上调4.55倍,IDO、CCR5、CD4、CTLA-4基因改变倍数无明显变化,TGF-β未测出。【结论】巴戟天和淫羊藿提取物培养能够上调M1型巨噬细胞IL-10、Fox P3、CTLA-4等抑炎基因表达,淫羊藿提取物能够上调M0巨噬细胞CCR5和TGF-β等基因表达,促进病原体清除和组织修复,从而发挥多效免疫调节作用。     

健康志愿者口服青蒿琥酯片剂的生物利用度

本文报道用放射免疫测定法研究口服青蒿琥酯片剂的生物利用度,结果为静脉注射青蒿琥酯后的血药时程为二房室模型,T1/2β为33.96±4.73分钟;口服青蒿琥酯片剂后的血药时程为一房室模型,其达峰时间为53.07±20.58分钟,峰浓度为1.94±1.05mg/L(1.94±1.05μg/ml),T1/2k为41.35±17.89分钟,绝对生物利用度为40.39±14.99％。结果提示口服青蒿琥酯片剂后,在人体内的吸收速度较快,而吸收程度较差。     

重组人细胞因子基因在转基因中药细胞中的瞬时表达

目的 利用转基因中药表达人细胞因子基因，探讨培育基因修饰（GM）中药的可行性，方法 将体外扩增分别获得的人α-干扰素基因与RANTES基因酶切回收后插入中间载体，用EcoRI和HindⅢ双酶切鉴定重组子，由大肠杆菌分离重组质粒并导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，通过加入卡那霉素（Km)和利福平（Rif)筛选含重组双元载体的转化子，用叶盘共培养法转化苦瓜和夏枯草外植体。结果 经RT-PCR检测到人α-干扰素基因与RANTES基因在中药转化愈伤组织中的瞬时表达。结论 首次报道了重组人α-干扰素基因与RANTES基因在转基因苦瓜和夏枯草细胞中的表达。为探讨利用转基因中药抗病毒尤其是抗艾滋病开创了新途径。     

青蒿素对恶性疟配子体感染性的影响

将２７例携带恶性疟配子体的患者，分为Ａ、Ｂ、Ｃ３组，Ａ组日服青蒿素１２００ｍｇ共５天，Ｂ组顿服甲氟喹７５０ｍｇ，Ｃ组顿服甲氟喹７５０ｍｇ＋伯氨喹４５ｍｇ。服药后按计划逐日取血观察配子体密度变化，同时观察配子体对大劣按蚊的感染情况。结果显示：Ａ组服药后４、７、１４和２ｌ天配子体密度和按蚊感染率下降非常显著，７天以后配子体感染性明显下降；Ｂ组７、１４和２１天配子体密度显著减少，１４天和２ｌ天配子体感染性和按蚊感染率下降非常明显；Ｃ组９例４天时有５例配子体消失，全部不能感染蚊媒。说明青蒿素对恶性疟配子体感染性有抑制作用，在阻断恶性疟传播途径方面的作用明显优于甲氟喹。     

叶下珠复方治疗慢性乙型肝炎54例临床观察

应用叶下珠复方治疗慢性乙型病毒性肝炎５４例，与灭澳灵１０例作对照。结果显示叶下珠复方组治疗３个月（其中１０例治疗６个月）．临床症状体征显著改善，肝功能复常或明显改善者达８２．６％；ｅ抗原及ＨＢＶ—ＤＮＡ转阴率分别为４６．２％（２４／５２）和４６．３％（１９／４１）；疗效优于灭澳灵组（上述３项指标分别为２０％，１０％，１００％；Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。叶下珠复方组治疗３个月后ｅ抗原及ＤＮＡ未阴转中１０例延长疗程至６个月，结果ｅ抗原及ＨＢＶ—ＤＮＡ转阴分别为６例；ｅ抗原阴转患者中大部分伴随ＨＢＶ—ＤＮＡ阴转（８５．７％）及肝功能复常或改善（１００％）。ｅ抗原及ＮＢＶ—ＤＮＡ的阴转率似在成年患者及病程短者较高；而与中医证型似无明显关系。研究表明叶下珠复方治疗慢性乙型病毒性肝炎具有一定的疗效，延长疗程似可提高疗效，尚需进一步研究。     

猴免疫缺陷病毒荧光定量聚合酶链反应检测标准品的体外合成

【目的】合成猴免疫缺陷病毒(SIV)荧光定量检测标准品,并总结出核糖核酸(RNA)标准品体外合成的基本原则。【方法】首先寻找到SIV保守序列,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆于T载体,测序,然后在所测得的SIV序列中进一步寻找保守序列,设计带有T7启动子的引物,PCR扩增,将所获得的PCR产物凝胶回收纯化,用T7RNA聚合酶进行体外合成RNA,再用PCR和电泳检测验证。【结果】通过数次引物调整,最终成功合成了SIV荧光定量PCR标准品。【结论】SIV荧光定量标准品的成功合成必须遵守以下4条基本原则:①必须选择保守序列;②在选择保守序列之后还需要搜索是否含有较多潜在的终止密码或者起始密码,设计引物使这些中止或起始密码排除在PCR目标产物之外;③必须注意将启动子(如T7启动子)挂在适当的引物上,以保证所合成的RNA模板与所要定量检测的RNA模板一致,而不是互补;④合成好RNA后必须检测,以保证不含其他RNA或者未消化完毕的DNA。     

猴免疫缺陷病毒(SIV)慢性感染猴模型的建立

目的：在先前已建立了模拟人艾滋病感染者和患者的猴免疫缺陷病毒（ＳＩＶ）急性感染猴和中、晚期猴艾滋病（ＳＡＩＤＳ）模型的基础上,再摸索建立ＳＩＶ慢性感染猴模型,以期为抗区滋病药物的体内药效学介研究提供更合适的动物模型。方法：用ＳＩＶｍａｃ２５１感染恒河猴１７只,追踪观察其临床表现,体征变化,病程进展,血浆和全血病毒症规律,淋巴细胞亚群ＣＤ４的动态等。结果：临床体征有特征性,病程较长,１年内死亡２只（