自体血清培养系统获得人未成熟卵体外成熟和受精及临床妊娠成功2例

人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）技术是IVF-ET及卵母细胞单精子显微注射（ICSI）技术衍生的一种新型辅助生殖技术。在临床主要应用于难治性多囊卵巢（PCO）及多囊卵巢综合征（PCOS）的不孕患。目前，IVM培养体系仍无标准化的商业培养系统应用于临床。我中心常规采用人成熟卵泡液作为主要蛋白和营养来源的IVM培养体系，但临床应用仍存在潜在的病原学感染的风险和伦理学问题。     

原发不孕患者IVF/ICSI方案的选择

目的:探讨原发不孕患者伴有不同病因时,如何选择IVF(体外受精)/ICSI(胞浆内单精子显微注射)方案。方法:将200例200个周期行IVF方案的原发性不孕症患者,根据有无明确导致不孕的因素分为A、B两大组,再按受精率(受精卵子数/取卵所获的M II期卵子总数)高低划分为受精率高、低各两组,比较4组之间人数所占比例、优质胚胎数、妊娠率有无差异;观察受精率低人群不孕年数分布;比较受精率高、低两组平均不孕年数有无差异。结果:受精率低的患者例数在A组所占比例显著高于B组,差异有显著性(受精率高组vs受精率低组:χ2=18.632,P<0.05),B组妊娠率和优质胚胎平均数低于A组;总体受精率低的患者平均不孕年数长于受精率高的患者,但差异无显著性(受精率高组vs受精率低组:6.26±3.287 vs 5.75±2.795;P>0.05),受精率低的患者不孕年数分布在5~7年。结论:无明确病因且多年不孕的患者,需告知有不受精的风险,选择ICSI或部分ICSI是有必要的,而这部分患者如能有足够的优质胚胎移植,妊娠率则较高。     

人类成熟卵母细胞慢速程序化冷冻复苏后培养时间对纺锤体和染色体的影响

目的 研究慢速程序化冷冻人类成熟卵母细胞复苏后培养时间对纺锤体和染色体的影响.方法 慢速程序化冷冻人成熟卵母细胞102枚,选择复苏后外观存活良好的卵母细胞共64枚,随机分为A组20枚、B组22枚、C组22枚,分别培养不同时间(1、3、5 h)后进行固定、荧光染色;另取新鲜成熟卵母细胞18枚固定、染色作为对照组,采用激光共聚焦显微技术,观察并分析纺锤体和染色体的形态学变化.结果 (1)A、B、C 3组正常纺锤体比例分别为10%(2/20)、46%(10/22)、41%(9/22),均明显低于对照组(83%,15/18),差异均有统计学意义(P＜0.05);A组分别和B组、C组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).纺锤体缺失率A组为45%(9/20),明显高于对照组(6%,1/18),差异有统计学意义(P＜0.01);A组分别和B组(14%,3/20)、C组(14%,3/20)比较,差异也有统计学意义(P＜0.05);B、C组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)A组正常染色体比例为30%(6/20),与B组(68%,15/22)、C组(64%,14/22)和对照组(78%,14/18)比较均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);B、C、对照组之间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 慢速程序化冷冻复苏后培养3～5 h可以促进部分卵母细胞纺锤体和染色体形态的恢复.     

顶体酶活性与精子质量的关系

目的 研究男性不育患者精子顶体酶活性与精子质量的相关性.方法 研究中选择正常生育者,12例作为对照组;不明原因不育患者,10例;精液异常患者,19例作为研究对象,分光光度比色法检测顶体酶活性.结果 顶体酶活性与精子密度、正常形态精子率、a b级精子活力呈显著正相关,与头部畸形呈负相关性;正常生育者的顶体酶活性与精液常规正常不育者的顶体酶活性相比有显著性差异(P＜0.05);正常生育者的顶体酶活性与精液异常者的顶体酶活差异性有显著性(P＜0.01).结论 精子顶体酶活性与精液参数存在一定相关性,顶体酶活性与正常形态精子率显著正相关,顶体酶活性是评定男性生育能力的重要指标之一,尤其对不明原因不育患者检测顶体酶活性有重要的临床意义.     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

胚胎植入前染色体非整倍体检测在不同适应证中的助孕结局分析

目的 分析胚胎植入前染色体非整倍体检测(PGT-A)在不同适应证中的助孕结局。方法 回顾性分析PGT-A助孕的549对夫妻，按PGT-A适应证分6组，反复妊娠丢失(304例)、反复种植失败(57例)、高龄(38岁及以上，80例)、不良妊娠史(绒毛染色体三体或不良妊娠，24例)、男性因素不育(67例)、性染色体数目异常(17例),比较基本情况、获卵及胚胎活检情况、妊娠结局。结果 各组之间平均年龄、促性腺激素(Gn)使用天数差异有统计学意义(P<0.001)。各组之间平均获卵数、优质胚胎率、嵌合胚胎率、异常胚胎率、胚胎活检正常率及平均卵巢敏感性指数(OSI)差异有统计学意义(P=0.03、P<0.001、P=0.03、P<0.001、P<0.001、P<0.001);高龄组异常胚胎率在6组中最高，平均获卵数、平均OSI及胚胎活检正常率最低。6组每取卵周期临床妊娠率及持续妊娠率、累积妊娠率差异有统计学意义(P<0.001),6组每移植周期临床妊娠率及持续妊娠率、除男性因素不育组外其余5组之间累积妊娠率差异无统计学意义。结论 PGT-A可检出整倍体胚胎移植，...     

解冻复苏囊胚行植入前遗传学检测临床结局分析

目的 分析二次冷冻、二次活检(DFDB)囊胚和二次冷冻、一次活检(DFSB)囊胚行植入前遗传学检测(PGT)的临床结局相关资料，旨在扩大现有数据，为冻融胚胎PGT的临床价值和安全性问题提供一定的指导。方法 回顾性分析38例行解冻复苏囊胚患者的PGT周期临床资料，依据囊胚活检次数的不同，分为DFDB组和DFSB组。冷冻方法均为玻璃化冷冻。结果 DFDB组共24例患者，上个PGT周期未获诊断的囊胚共34枚，解冻后存活32枚，解冻囊胚存活率为94.12%。这32枚囊胚二次活检后，行遗传学检测，正常囊胚15枚(46.88%),异常囊胚数17枚(53.13%)。DFSB组共14例患者，共解冻复苏上个单精子胞浆内显微注射(ICSI)周期剩余的50枚囊胚，50枚囊胚解冻后均存活。活检这50枚囊胚，再进行遗传学分析，47枚囊胚诊断明确，其中正常囊胚9枚(18%),异常囊胚28枚(56.00%),嵌合体囊胚为10枚(20.00%),未获诊断的囊胚数为3枚(6.00%)。DFDB组和DFSB组分别有8例患者和5例患者解冻移植，解冻后囊胚均存活，分别临床妊娠5例和3例，各活产1例，活产婴儿均健康。结论 DF...