冻融兔卵母细胞培养不同时间再激活效应的研究

目的探讨冻融兔卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI)后,不同培养时间、不同激活方法,卵母细胞受精及胚胎发育能力。方法共收集兔卵母细胞470枚,玻璃化冷冻,解冻行ICSI后培养半小时,分为3组激活:组1(n=46):钙离子激活;组2(n=40):氯化锶(SrCl_2)激活;组3(n=33):无水酒精激活;再同样方法解冻一部分卵母细胞,ICSI后培养1 h,分为2组激活:组4(n=30):钙离子激活;组5(n=26):氯化锶激活;对照组(n=39):ICSI后直接培养,不激活。各组得到的囊胚玻璃化冷冻,受体兔HCG准备后,胚胎解冻后移植。结果卵母细胞解冻行ICSI后,组5的卵母细胞受精率、分裂率和囊胚形成率最高,分别为53.8%,26.9%和7.7%,所获囊胚的母兔可能怀孕。结论冷冻卵母细胞解冻行ICSI后,适当延长培养时间,使用合适的激活方法可能会提高卵母细胞的受精以及早期胚胎发育能力。     

玻璃化冷冻与慢速冷冻对微量精子活动力和DNA完整性的影响

目的比较玻璃化冷冻与慢速冷冻微量精子对精子活力和DNA完整性的影响。方法取70份正常精液标本上游处理后,每份标本分别进行慢速冷冻和玻璃化冷冻。观察冷冻前及2组冷冻组复苏后精子活动率和DNA碎片指数(DFI),比较两种方法的冷冻效果。结果冷冻前精子活动率和DNA碎片指数分别为(93.24±2.26)%和(6.70±5.78)%;玻璃化冷冻复苏后精子活动率及DFI分别为(63.07±6.69)%和(9.26±7.00)%;慢速冷冻复苏后精子活动率及DFI分别为(63.99±5.88)%和(9.58±6.89)%。两种方法复苏后精子活动率均较冷冻前显著性降低(P<0.05),两种方法复苏后精子DFI均较冷冻前显著性升高(P<0.05),两种冷冻方法复苏后精子活动率和精子DFI差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻和慢速冷冻均导致精子活动率下降及DNA损伤,但两种冷冻方法之间无显著差异。     

pAKt在不明原因性不孕症妇女着床期子宫内膜的表达及意义

目的研究磷酸化AKt（pAKt）在不明原因性不孕症妇女着床期子宫内膜的表达变化及意义。方法收集18份原发性不孕症、不明原因性不孕症妇女黄体中期子宫内膜组织作为研究对象，并收集30份继发性不孕症、双侧输卵管阻塞患者黄体中期子宫内膜组织作为对照。用SP免疫组化法确定两组患者子宫内膜pAKt与白血病抑制因子（UV）的组织学定位及半定量表达。结果LIF在两组患者子宫内膜的表达均主要定位在腔上皮和腺上皮胞浆，pAKt在两组患者子宫内膜的表达主要位于间质细胞且呈胞浆强表达。两组患者子宫内膜LIF与pAKt蛋白表达半定量分析（sP免疫组化法）：不明原因性不孕症患者子宫内膜LIF与pAKt表达量较双侧输卵管阻塞患者明显降低（P〈0．05），两组患者中IVF／ICSI后未妊娠者子宫内膜LIF与pAKt表达量较妊娠者明显降低（P〈0．01）。结论子宫内膜容受性降低是不明原因性不孕症患者不孕原因之一，着床期子宫内膜pAKt表达降低可能是不孕症患者子宫内膜容受性降低的原因之一。     

激光法活检对小鼠体外受精胚胎后期发育的影响

目的探讨激光法活检技术对胚胎早期发育的影响。方法对促排卵获取的小鼠卵母细胞进行体外受精和培养,然后用激光法活检收集的4细胞和8细胞胚胎,最后观察活检后胚胎的发育情况。结果共获卵母细胞360枚,受精率和卵裂率分别为92.0%和94.3%。4-细胞胚胎活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率分别为76.6%和65.6%,8-细胞胚胎活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率为70.4%和59.3%,分别与未活检对照组相比,差异无显著性(P>0.05);4-细胞活检组和8-细胞活检组的囊胚形成率及孵出囊胚率间相比较,差异也无显著性(P>0.05)。结论激光法对小鼠4细胞或8细胞胚胎进行单卵裂球活检,不影响胚胎的后期发育,是一项有效的胚胎卵裂球活检方法。     

再次体外受精-胚胎移植获卵数的改变及其影响因素的分析

目的 探讨首次体外受精( IVF) -胚胎移植( ET)/卵母细胞内单精子显微注射( ICSI )失败行再次 IVF/ICSI-ET时获卵数的变化以及相关影响因素的分析. 方法 回顾性分析222例在12个月内行2次IVF/ICSI-ET周期的患者,根据基础窦卵泡数(bAFC)将患者分为 A组(bAFC≥9)和 B组(bAFC<9),分析每组前后两周期间患者的基本情况、临床方案、获卵数、进入减数分裂中期II( MII期)卵子数、正常受精率、优胚率、累积妊娠率的变化,探讨影响前后周期获卵数发生变化的相关因素. 结果 A 组第二个 IVF 周期(cycle2)获卵数、MII期卵子数、受精率、优胚率、累积妊娠率明显高于第一个IVF周期( cycle1 ) ,前后周期中临床方案无大的变化,均以长方案为主,但 cycle2 每日的促性腺激素( Gn)使用剂量高于 cycle1 ( P <0. 05 ). B 组中相对于 cy-cle1,cycle2获卵数、MII期卵子数差异无统计学意义,而优胚率及累积妊娠率均提高,并且cycle2 中短方案明显多于cy-cle1(P<0. 05). 其中B组中有14例患者在cycle1中为长方案,在cycle2中转变为短方案,后者的获卵数以及MII期卵子数均高于前者( P<0. 05 ). 结论 对于卵巢功能正常的患者,结合患者cycle1中获卵数以及Gn使用剂量,在控制卵巢过度刺激综合征发生的情况下,cycle2中可通过适当的提高每日Gn使用剂量来提高获卵数及MII期卵子数. 相对于长方案,短方案可能更适合卵巢功能减退的患者.     

短时受精联合早期补救卵泡浆内单精子注射在非男性不孕治疗中的临床结局

目的 探讨短时受精联合早期补救卵泡浆内单精子注射(ICSI)在非男性不孕治疗中的临床应用价值.方法 回顾性分析2014年1月至2017年1月在安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心行助孕治疗的患者,选择其中首次体外受精(IVF)中卵子完全不受精,行早期补救ICSI的患者,共197例,为A组;因第1周期行IVF或补救ICSI未妊娠、第2周期行直接IC-SI的患者,共201例,为B组;以同期因单纯男性不育因素行直接ICSI的患者,共408例,为对照组(C组).分析比较各组的正常受精率、卵裂率、优质胚胎率和累计妊娠率等情况.结果 A、B、C 3组在正常受精率(80.33％、80.49％、80.59％)、卵裂率(96.09％、96.57％、96.08％)上差异无统计学意义(P>0.05);A、B组的优质胚胎率(44.86％、45.09％)、累计妊娠率(69.54％、69.65％)低于C组(57.30％,80.14％),差异有统计学意义(P<0.05),而A、B组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 短时受精联合早期补救ICSI可以降低受精失败的发生,并与重复周期行ICSI有相似的妊娠结局,值得临床推广.     

不同来源的精子显微受精治疗男性不育

目的回顾分析不同来源精子的单精子卵胞浆内注射(ICSI)治疗男性不育62个周期.方法比较采用手淫射精获得精子、睾丸活切及附睾穿刺获得精子行ICSI治疗后的受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率.结果射出精子组50个周期,受精率72.3% 、卵裂率80%、优质胚胎率40%及临床妊娠率40%;睾丸及附睾精子组12个周期,受精率64.1%、卵裂率76.3%、优质胚胎率35.2%及临床妊娠率33.3%.两组结果比较,无显著性差异.结论不同来源精子行ICSI治疗男性因素不育可以获得相似的治疗结果.     

兔卵母细胞胞质内单精子注射后二次辅助激活对兔卵母细胞发育能力的影响

目的 观察兔卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)后2次辅助激活对兔卵母细胞发育能力的影响.方法 采集兔卵母细胞500枚,玻璃化冷冻后解冻,行ICSI后培养1 h,将存活的156枚卵母细胞分为10634激活1次组(30枚,加入浓度为5 μmoL/L的钙离子载体10634激活5 min)、氯化锶激活1次组(26枚,加入浓度为10 mmol/L的氯化锶激活20 min)、10634激活2次组(33枚,加入浓度为5μmoL/L的钙离子载体10634激活5 min后培养30 min,采用同样方法再次激活)、氯化锶激活2次组(28枚,加入浓度为10 mmol/L的氯化锶激活20 min后培养30 min,采用同样方法再次激活)和对照组(39枚,未加入任何激活剂)共5组,观察各组卵母细胞的受精率、卵裂率和囊胚形成率.结果 各组兔卵母细胞的受精率、卵裂率和囊胚形成率,氯化锶激活1次组分别为54%、27%和8%,均高于10634激活1次组(分别为33%、17%和3%)和对照组(分别为33%、18%和3%),但差异均无统计学意义(P>0.05);10634激活2次组分别为82%、55%和15%,均高于10634激活1次组,差异均有统计学意义(P<0.05);氯化锶激活2次组的受精率(61%)高于氯化锶激活1次组,卵裂率和囊胚形成率(分别为21%和7%)均低于氯化锶激活1次组,但差异均无统计学意义(P>0.05);10634激活2次组的受精率、卵裂率和囊胚形成率均高于氯化锶激活2次组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 冻融的兔卵母细胞ICSI后行2次辅助激活,可能会提高卵母细胞的受精率和胚胎早期的发育能力,但是激活后的卵母细胞分裂速度较快.