牙膏浸出物细胞毒性及其检测方法研究

目的在研究不同类型牙膏对体外培养的口腔粘膜细胞的毒性作用的基础上,建立牙膏、漱口液及经口药物对口腔粘膜细胞毒性检测方法。方法取兔舌,体外培养口腔粘膜细胞,采用MTT法检测牙膏浸出液OD值,并通过计算细胞相对增殖率(RGR)进行相关分析评价。结果除中草药牙膏外,氟钙、亮白、防蛀等药物牙膏的细胞毒性相对较高。另外,保健牙膏均存在使细胞相对增殖率增高的浓度区域。结论该口腔粘膜细胞毒性检测方法可用于牙膏等口腔卫生用品的安全性检测。     

年龄相关的骨髓细胞分化对成骨和破骨影响的实验研究

目的　从骨髓细胞分化角度研究年龄相关的成骨和破骨细胞分化的机理 ,探讨老年性骨质疏松症的发生机理。方法　通过骨髓细胞培养 ,应用组织形态学、流式细胞仪分析和分子生物学技术 ,采用碱性磷酸酶 (AL P)染色和骨钙素检测等手段观察青年大鼠和老年大鼠骨髓细胞分化成成骨和破骨细胞的状况。结果　青年大鼠骨髓基质细胞 (MSCs)形成成骨细胞数比老年大鼠多 (P<0 .0 1 ) ;老年大鼠骨髓细胞形成破骨细胞数比青年大鼠多 (P<0 .0 1 )。结论　大鼠骨髓细胞分化成成骨细胞的能力与年龄呈负相关 ,分化成破骨细胞的能力与年龄呈正相关。     

不同电刺激信号对大鼠雪旺细胞增殖的影响

目的研究不同的电刺激信号对大鼠雪旺细胞(RSC96)增殖的影响。方法实验使用RSC96细胞系(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库),经过2次传代培养,以1.25×10~4/孔的密度种植于24孔细胞培养板中,次日电刺激信号分别采用不同的电压(10、100、500、1 000、5 000、10 000 m V/cm)、不同的频率(0.1、1.0、100.0、1 000.0、10 000.0、1 000 000.0 Hz)、不同的脉冲占空比(5%、10%、30%、50%、70%、90%)及不同的波形(正脉冲波、矩形波、三角波、正弦波、杂波、直流波)对细胞进行电刺激,每组设置3个平行样,细胞每天刺激30 min,持续刺激4 d。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率。结果当电刺激频率为100.0 Hz、脉冲占空比为50%、波形为矩形波时,电压500 m V/cm时对细胞的增殖具有抑制作用。当电刺激频率为100.0 Hz、脉冲占空比为50%、电压为500 m V/cm时,正脉冲波、正弦波、矩形波和三角波都能够促进细胞的增殖。当电刺激波形为矩形波、脉冲占空比为50%、电压为500 m V/cm时,频率100.0~1 000.0 Hz组细胞增殖率最高。当电刺激波形为矩形波、频率为100.0 Hz、电压为500 m V/cm时,不同的脉冲占空比对细胞增殖的影响不明显。结论不同的电刺激信号条件对细胞增殖的影响较大。电压≤500 m V/cm、有规律的脉冲波形、频率为100.0~1 000.0 Hz电刺激信号能够获得较好的RSC96增殖的效果。实验所获得的优化电刺激参数在外周神经修复中具有非常大的应用前景。     

人血管内皮细胞生长因子基因体外转染皮肤成纤维细胞后的表达效应

目的：观察外源性人血管内皮细胞生长因子基因导人正常真皮成纤维细胞后，能否表达及分泌血管内皮细胞生长因子，为进一步构建转VEGF165基因组织工程皮肤在创伤修复中的应用提供新移植物。 方法：实验于2001—06／2005—06在长春吉林大学完成。①真核表达载体pcDNA3．0-hVEGF165的扩增、纯化和鉴定过程为大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备→pcDNA3．0-hVEGF165质粒DNA细菌转化→pcDNA3．0-hVEGF165质粒大量制备（碱裂解法）-质粒纯化-质粒含量纯度测定。提取的质粒载体用EeoRⅠ和xbaⅠ双酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定。②选取清洁级新生日本大耳白兔2只，无菌条件下取新生兔皮肤，尽量去除皮下组织，切成宽0．3cm小条块，Ⅰ型胶原酶消化，进行真皮成纤维细胞的分离与培养。脂质体介导真核表达质粒pcDNA3．0-hVEGF165转染体外培养的兔皮肤成纤维细胞，经G418筛选，获得阳性转染细胞克隆，并进行传代扩增。③酶联免疫吸附法检测转染后不同时间段的血管内皮细胞生长因子蛋白表达水平；原位杂交显示转基因细胞内VEGF165 mRNA的表达情况；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况；透射电子显微镜观察转染后真皮成纤维细胞的超微结构。 结果：①质粒酶切鉴定结果：提取的质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定后可得到5．4kb和0．57kb两个片段，与原质粒图谱符合，表明所提取的质粒为重组质粒pcDNA3．0-VEGF165。②pcDNA3-hVEGF165基因转染真皮成纤维细胞情况：共进行15次转染试验，35孔（皿）均有G418抗性集落形成，表明pcDNA3．0-hVEGF165经脂质体介导可有效转染正常皮肤成纤维细胞。③血管内皮细胞生长因子蛋白的表达：pcDNA3．0-hVEGF165转染成纤维细胞后，24h即有较高水平的血管内皮细胞生长因子蛋、白表达，高达（3280&;#177;2054）ng／L，并于48，72h呈下降趋势。④血管内皮细胞生长因子cDNA原位杂交检测结果：转染后成纤维细胞可见散在的阳性细胞表达hVEGF mRNA。G418应用2-4周后，可成功筛选出转基因成纤维细胞克隆，筛选后可见大量阳性的转染细胞表达hVEG FmRNA。⑤成纤维细胞的细胞周期分布及凋亡检测：转染后成纤维细胞S期细胞比例增加，G1和G2期细胞减少，表明细胞DNA的合成以及细胞的增殖活动加强。但细胞凋亡率逐渐升高。转染前为1．26％，转染后2d为2．64％，至12代时高达17135％。⑥转染后成纤维细胞超微结构观察：细胞表面有较多微绒毛，核呈不规则形，胞质内可见较多的粗面内质网、线粒体，沿膜可见一些膜包被颗粒。 结论：真核表达质粒pcDNA3．0-hVEGF165成功导人家兔皮肤成纤维细胞，在短时期内可高水平地表达分泌血管内皮细胞生长因子，在治疗缺血性疾病和促进创伤修复及以其作为种子细胞构建转基因组织工程皮肤治疗皮肤缺损等方面显示出较好的应用前景。     

左旋聚乳酸颈椎可吸收固定板的力学性能测试

背景:课题组已成功利用左旋聚乳酸的有限固定强度和可吸收的特性制成了新型颈椎可吸收固定板.目的:进行动物体内降解和力学实验,以测定新型可吸收颈椎左旋聚乳酸固定板的生物力学性能.方法:将长30 mm,宽5.5 mm,厚度为2.0 mm的试样经环氧乙烷消毒后,植入至15只兔的背部肌肉内,分别于术后1,3,5,7个月取出,观察材料的降解变化和机械性能的变化.结果与结论:植入1～5个月,外观观察材料植入体内后未发生明显改变.植入1～7个月材料体积和质量均未发生明显改变.植入1个月冲击强度未发生明显变化,植入3个月略有下降,后又逐渐上升,至7个月时达到甚至超过术前水平.植入后随着时间延长左旋聚乳酸板的弯曲强度呈逐渐下降趋势,但7个月内下降幅度并不显著.术后3～7个月扭转强度略有下降,但并不明显.结果表明,左旋聚乳酸的生物力学强度足够维持骨性融合的全过程,用其制成的颈椎前路固定板可以用于颈椎前路手术的植骨融合固定.     

可降解高分子丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)三维支架的细胞相容性和鼻软骨组织工程

目的 探讨可生物降解丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)(80∶20)三维多孔支架生物相容性及用于构建组织工程鼻软骨可行性,为临床鼻软骨缺损的修复提供新来源.方法 体外分离培养新生兔关节软骨细胞,采用计算机形态分析和MTT法检测兔软骨细胞在PLGA膜和支架表面粘附、扩展和增殖情况.将培养扩增的兔软骨细胞,按6×106 cels/ml浓度接种于预加工的人鼻软骨外形PLGA多孔支架内,抗坏血酸体外诱导培养4周,形成软骨样组织,倒置显微镜、组织切片、扫描电镜观察人工软骨的组织形态结构.结果 培养开始阶段,软骨细胞在PLGA膜表面粘附较差,以后逐渐增高,24小时接近于对照组;MTT法结果显示,软骨细胞在PLGA支架内培养7天时细胞绝对数量明显增加,而相对增殖率逐渐下降.肉眼观察,培养物为人鼻软骨外形的透明软骨样组织,具有一定弹性和硬度,表面有大量软骨基质形成;倒置显微镜下可见人工软骨周围有大量软骨细胞聚集和细胞外基质形成.组织切片及扫描电镜分析,多孔支架材料的网孔不完整,孔内有大量软骨细胞和细胞外基质,可见典型软骨陷窝样结构.结论 可生物降解PLGA制备的三维多孔支架具有较好生物相容性和可塑性,可用于组织工程鼻软骨体外构建,具有潜在的临床应用价值.     

脉冲电刺激对改性纳米羟基磷灰石／聚丙交酯-乙交酯复合材料表面成骨细胞增殖及成骨活性的影响

背景:目前,骨组织工程的研究主要集中在成骨细胞特性研究和骨修复材料研制两大领域,而对细胞与细胞外材料的相互作用,尤其是调节和促进两者间相互作用的相关研究尚未给予足够的霞视.目的:在低聚乳酸接枝纳米羟基磷灰石/聚丙交酯-乙交酯(Hydroxyapatite nanocrystals surface-grafted with L-lactic acidoligomer/Poly(lactide-co-cjlycolide),op-HNPLGA)复合材料上接种成骨细胞,观察脉冲电场刺激对成骨细胞增殖和成骨相关基因表达的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-05/2009-01在中国科学院长春应用化学研究所高分子物理与化学国家重点实验室完成.材料:op-HA和PLGA由中科院长春应用化学研究所制备.方法:实验分为PLGA无电刺激组、op-HNPLGA无电刺激组、PLGA电刺激组和op-HA/PLGA电刺激组.将op-HN/PLGA和PLGA氯仿溶液分别于盖玻片表面铺成薄膜,并接种兔成骨细胞,体外培养7 d.电刺激组刺激电压为2 V,频率为1 Hz,占空比为20%,每天刺激1 h.主要观察指标:流式细胞仪检测细胞周期,Real-time PCR检测骨形态发生蛋白2、Ⅰ型胶原蛋白、骨连接蛋白的表达.结果:脉冲电刺激组op-HN/PLGA上生长的成骨细胞S期细胞白分比明显高于其他组(P<0.05).op-HA/PLGA与PLGA比较能上调骨形态发生蛋白2、Ⅰ型胶原蛋白、骨连接蛋白3种基因表达量,并且施加脉冲电刺激组骨形态发生蛋白2、Ⅰ型胶原蛋白、骨连接蛋白3种基因表达量高于未加电刺激组.结论:op-HA/LGA复合材料是一种很好的骨修复材料,脉冲电刺激能促进成骨细胞在材料上的增殖能力,提高成骨活性相关基因的表达水平.     

以壳多糖为基质网架构建大鼠组织工程皮肤

目的 探索以壳多糖为基质网架构建组织工程皮肤的可能性。方法 将体外传代培养的大鼠表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞，分别接种在预先制备的多孔三维壳多糖基质网架的两侧，经液—气界面培养，构建出复层人工皮肤。分别用光镜和电镜观测该复层人工皮肤的组织形态及超微结构的动态变化。结果 光镜下可见，本实验构建的组织工程皮肤由表皮和真皮构成。随着培养时间的推移，表皮逐渐成熟、分化，真皮逐渐形成，基质网架逐渐降解、被吸收，并由真皮细胞所分泌的细胞外基质所取代。结论 以壳多糖为基质网架构建的组织工程皮肤，在组织结构和代谢功能上与天然皮肤极为相似。     

杂多化合物九钨三钛硅酸盐的急性毒性和致突变性研究

目的 :对杂多化合物九钨三钛硅酸盐(α -K8H2[SiW9Ti3O40]·15H2O ,简称α -Ti3)进行急性毒性和致突变性研究 ,为临床应用提供科学依据。方法 :采用小鼠经口急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及CHO细胞染色体畸变试验等方法进行检测。结果 :①小鼠经口急性毒性试验 ,LD50 为2055.36mg/kg,属低毒物质 ;②α -Ti3 浓度在31.3～500μg/皿范围内 ,无论加S9 与否 ,每皿菌落回变数均未超过阴性对照组的两倍 ;③微核试验在25、50、125mg/kg3个剂量水平 ,各剂量组对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核千分率均未见明显增加 ,与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05) ;④α -Ti3 浓度在40～320μg/ml范围内 ,无论加S9 与否 ,CHO染色体畸变率与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论 :杂多化合物九钨三钛硅酸盐毒性较低 ,在本试验条件下 ,诱变性试验结果为阴性。     

胶原/羟基磷灰石复合材料的制备及用于骨缺损修复的研究现状

通过模拟天然骨的结构,制备胶原/羟基磷灰石复合材料,与天然骨具有相似的组成、结构和性能,并具有良好的生物活性和生物降解性。本文就胶原/羟基磷灰石复合材料的制备方法、仿生形成机制、表征手段及骨缺损修复的应用等进行综述,并展望其未来发展方向。