肾脏NOS研究进展

20世纪80年代末,一氧化氮(nitric oxide,NO)才被认识到是人体内一种生物学活性分子。近年来对一氧化氮的研究越来越受到关注。NOS是一氧化氮合成的限速酶,参与调节NO生成的重要环节。现已认识到NO既是一个有细胞毒性效应器作用的分子,是组织损伤的诱发因子和各种病变的增强因子;它又是生物体许多部分的信号分子,是先天性免疫应答的调节性效应分子,作为一种信息传递物质维持正常的生理功能。NO的这种双重性在人体的生理和病理过程中起了非常重要的作用[1]。本文主要对肾脏中NOS的分布、性质、生理及病理作用等方面的研究进展综述如下。…     

诱导型一氧化氮合酶在糖尿病大鼠早期肾皮质中的定量分析

目的 观察I型糖尿病早期大鼠肾脏中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)变化,并行定量分析.方法 成年健康SD大鼠60只,随机分成糖尿病组(DM组)和正常对照组(NC组),DM组采用一次性腹腔内注射STZ诱导制造糖尿病大鼠模型.成模后和NC组分别于第1、2和4周取材,取右肾用硝酸还原酶法和吸光度比较法测定肾组织中NO含量和NOS、iNOS的活性;左肾制作石蜡切片,行免疫组织化学染色,光镜下观察各组肾脏形态学变化及iNOS分布情况.结果 DM组大鼠肾组织中NO含量、NOS和iNOS活力较NC组均升高,具有显著性差异(P＜0.05),其中NO含量和NOS活力呈持续升高;iNOS活力却是于第2周达到高峰后随之降低.免疫组织化学染色,iNOS在DM组大鼠肾脏中,阳性部位定位于肾小球上皮细胞、系膜细胞、近端小管和远端小管上皮细胞胞浆,而且在第1、2和4周表达强度呈先高后低的变化.图像分析显示:iNOS在第2周平均光密度值显著低于第1周(P＜0.05)和第4周(P＜0.05).结论 I型DM大鼠早期肾皮质iNOS表达增加,其合成的NO在早期肾脏损害中发挥了重要作用.     

通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用

目的探讨通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用及机制。方法用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型并给予通心络灌胃,12周后测定各组大鼠心脏重量指数,胶原容积积分,免疫组化测定心肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7的蛋白表达水平,RT-PCR法检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表达水平。结果糖尿病组大鼠心脏重量指数、胶原容积积分明显增高,TGF-β1、Smad3蛋白的表达增加,Smad7蛋白的表达减少;TGF-β1、Smad3mRNA的表达增加,Smad7mRNA的表达减少,通心络组上述指标均得到改善。结论通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化有防治作用,其作用机制可能通过改善糖尿病大鼠心肌中TGF-β1、Smad3、Smad7的表达,从而减轻和延缓糖尿病大鼠心肌的纤维化有关。     

内皮型一氧化氮合酶和神经型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾发育过程中的表达

目的:观察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)在胚胎小鼠肾发育过程中的时空性表达,探讨它们在小鼠发育早期肾组织中的作用.方法:选取胚龄(E)13、14、15、16、18d及新生组(P)0d小鼠,应用免疫组织化学方法显色进行图像分析;用免疫印迹法测定各组小鼠肾组织中的eNOS以及nNOS的含量.结果:免疫组织化学显色显示,eNOS阳性表达最早出现于E14d的生肾区;E16d时在生肾区表达减弱,近端小管呈强阳性;P0d时远端小管可见弱表达,集合管也有一定程度表达,致密斑无表达.nNOS在E13d时即表达于皮质输尿管芽;E16d时近端小管弱表达,远端小管强表达;P0d时在远端小管和致密斑强表达,近端小管弱表达,集合管无表达.图像分析和免疫印迹法结果显示,eNOS和nNOS在E14d含量较少,随后逐渐增多,至P0d达到高峰.结论:在胚胎小鼠肾发育过程中,eNOS和nNOS的表达有一定的时空顺序,它们对肾组织的发育及形成起一定的作用.     

超声乳化术中不同灌注液对角膜内皮细胞的影响

目的:观察超声乳化术中使用不同灌注液(世可和平衡盐液)对兔眼角膜内皮细胞结构及功能的影响。方法:3.5月龄纯种日本大耳白兔,随机分为正常对照组、空白对照组、世可组和平衡盐液组,采用接触性角膜内皮显微镜进行角膜内皮细胞形态学定量测定。锥兰-茜素红活性染色,观察各组角膜内皮细胞微细结构的变化。结果:术后6h,各组较正常对照组细胞密度和六边形细胞百分率降低;细胞面积和六边形细胞百分率均高于正常对照组;光镜显示空白对照组角膜内皮细胞形态改变明显,而世可组和平衡盐液组角膜内皮细胞改变轻微,无细胞坏死。结论:在超声乳化术中,灌注液对角膜内皮的损伤为化学性损伤,在相同手术条件下,世可对角膜内皮细胞具有良好的保护作用。     

神经型一氧化氮合酶在1型糖尿病大鼠肾皮质中的表达

目的观察1型糖尿病大鼠肾皮质内神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达变化。方法采用一次性腹腔注射大量链脲佐菌素(STZ)的方法建立1型糖尿病大鼠模型。分别在成模后的第1,2,4周3个时间点处死动物,采用亚硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量;采用免组织化学染色法观察nNOS在肾皮质的表达;采用Western blot方法测定nNOS在肾皮质含量的变化。结果1周病程时糖尿病模型组大鼠肾皮质NO表达水平低于对照组(P<0.05),2周病程时高于对照组(P<0.05),4周病程时显著高于对照组(P<0.01)。nNOS在肾皮质中的表达部位主要在致密斑,在肾小管中也有少量的表达。糖尿病模型组大鼠肾皮质nNOS含量在1周病程时低于正常对照组,2周病程时与正常对照组无显著性差异,4周病程时高于正常对照组。结论在1型糖尿病大鼠肾脏病变的早期,肾皮质内NO的减少主要是由于nNOS合成减少造成的。     

神经型一氧化氮合酶在小鼠肾小体发育过程中的表达

目的 观察神经型一氧化氮合酶(Neuronal Nitric Oxide Synthas,nNOS)在小鼠发育不同阶段肾小体中的表达,探讨其在小鼠肾小体发育过程中的作用.方法 选取胚龄(E)12、14、16、18 d及生后日龄(P)1、3、7 d小鼠,应用免疫组织化学方法和图像分析技术检测肾小体发育各阶段nNOS的表达情况.结果 免疫组化染色显示E12d时在输尿管芽周围的生后肾组织中即可见到nNOS的阳性表达;随后,在各期肾小体中都可见到nNOS的表达,但是表达强度逐渐减弱.图像分析结果显示nNOS随着肾小体的发育,表达逐渐减少.结论 nNOS在小鼠肾小体发育早期即发挥作用,但随着肾小体的发育成熟,作用逐渐减弱.     

小牛血去蛋白提取物对超声乳化术角膜内皮损伤的修复作用

目的:研究小牛血去蛋白提取物(Deproteinized extract of calfblood,DECB)作为白内障超声乳化术中冲洗剂和术后留置剂对角膜内皮细胞损伤的修复作用.方法:采用纯种日本大耳白兔24只制作超声乳化白内障摘除术动物模型,右眼为实验组采用加入DECB的BSS(平衡盐灌注液)作为术中冲洗剂和术后留置剂,左眼为对照组采用BSS必施为术中冲洗剂和术后留置剂.术前及术后即刻,术后6,12,24,72,168h分别裂隙灯下观察角膜;使用接触型角膜内皮反射显微照相系统定量分析内皮细胞平均面积(average size)、变异系数(coefficient of variability)、细胞密度(cell density);术后即刻,术后24,72h行内皮细胞染色计算内皮细胞活性率;术后6,24h、术后3d取实验兔角膜行透射电子显微镜观察.结果:术后裂隙灯下实验组和对照组兔角膜无明显差别;术后即刻、术后6,12h角膜内皮平均面积,变异系数和内皮细胞密度(P＜0.05),差异有统计学意义;术后72h,角膜内皮细胞平均面积,变异系数,差异有显著统计学意义,内皮细胞密度(P＜0.05);术后168h角膜内皮细胞平均面积,变异系数和内皮细胞密度差异没有统计学意义.术后透射电子显微镜观察实验组和对照组兔角膜内皮细胞超微结构:实验组细胞损伤明显轻于对照组.结论:DECB能够促进超声乳化白内障摘除术角膜内皮细胞损伤的修复     

NO和iNOS在大鼠糖尿病早期肾脏中的变化

目的:观察糖尿病大鼠早期肾脏中一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide syn-thase,iNOS)活性变化,探讨NO/iNOS在糖尿病早期肾脏损害中的作用机制。方法:取成年健康SD大鼠60只,随机分成糖尿病组(DM组)和正常对照组(NC组),每组30只。DM组大鼠采用一次性腹腔内注射STZ制造糖尿病大鼠模型,成模后和NC组分别于第1、2、4周麻醉取左肾,用硝酸还原酶法和吸光光度法测定肾组织中NO含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和iNOS活性。所有数据用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。结果:①DM组大鼠肾组织中NO含量、NOS和iNOS活性分别较同批NC组有显著性差异(P<0.05);②各组大鼠中NO含量与NOS活性、iNOS活性呈正相关。结论:糖尿病大鼠早期肾脏中iNOS活性增强,催化生成的NO在糖尿病早期肾脏损害中发挥重要作用。