Wnt3a促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

背景:Wnt信号通路是细胞增殖分化的关键调控环节,但与骨髓间充质干细胞神经分化的联系并不十分明确.目的:寻找促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的Wnt信号分子.方法:首先体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞并传代,行形态学观察,并以流式细胞学方法检测细胞表型CD44,CD9,CD34和CD45.采用碱性成纤维细胞生长因子分别联合Wnt3a或Wnt5a的方案诱导分化,应用免疫组化和反转录-聚合酶链反应方法比较Wnt3a和Wnt5a对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响.结果与结论:骨髓间充质干细胞为长梭形,CD9,CD44高表达,CD34,CD45低表达.Wnt3a诱导组的巢蛋白和神经元特异烯醇化酶呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白无明显表达,诱导后细胞的活力良好.Wnt5a诱导组巢蛋白呈弱阳性表达,而神经元特异烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白阴性.反转录-聚合酶链反应结果显示,Wnt3a诱导组巢蛋白在诱导前后均有表达,神经元特异烯醇化酶在诱导后5 d可见明显的扩增条带,10 d后更加明显.胶质纤维酸性蛋白在诱导10 d后出现较弱的扩增条带.Wnt5a组、对照组骨髓间充质干细胞在诱导后10 d巢蛋白有微弱表达,神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白几乎无表达.提示Wnt3a分子能够促进体外培养的骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化.     

GDF-15对糖尿病小鼠肝损伤保护作用的实验研究

目的 探讨GDF-15对STZ所致C57BL/6J小鼠糖尿病肝脏损伤保护作用.方法 将成模小鼠随机分为模型组、对照组及GDF-15注射组.监测血糖和体重.30 d后采集样本,检测各组小鼠血清中ALT、AST以及肝组织中TG、TC、SOD、MDA、HK及PK的表达.ELISA检测各组小鼠血清及肝组织中TNF-α、IL-1...     

miR-217靶向调控胰岛素分泌细胞诱导分化NeuroD1基因表达

目的：实现骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向胰岛素分泌细胞（insulin-producing cells,IPCs）的诱导分化并验证分化过程中miR-217靶向调控NeuroD1基因表达。方法分离培养BMSCs,应用大鼠胰腺损伤提取物（rat pancreatic extraction,RPE）将其诱导分化为IPCs。采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-217和NeuroD1基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT-PCR检测诱导分化过程中miR-217和NeuroD1的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测发现miR-217和NeuroD1基因二者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-217能结合到NeuroD1 mRNA的3＇UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明,miR-217的表达水平与NeuroD1表达呈负相关。结论 miR-217能调控IPCs诱导分化过程中NeuroD1的表达。     

不同粘弹剂对角膜内皮细胞影响的对比研究

目的　研究超声乳化过程中 ,应用不同粘弹剂对角膜内皮细胞的影响 ,并作对比分析。方法　 7只纯种日本大耳白兔 ,随机抽出 1只兔 2只眼制成正常角膜内皮电镜切片 ,其余分为两组 :AmviscPlus组和海诺特组 ,双眼行超声乳化术 ,用接触性角膜内皮显微镜分别观察术前和术后即时角膜内皮细胞密度 ,并在透射电镜下观察正常和术后即时角膜内皮细胞超微结构的变化。结果　术后即时内皮细胞损失率 ,AmviscPlus组 8 85 % ,海诺特组 9 2 3% ,两组内皮细胞密度分别与术前相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而两组间内皮细胞损失率无显著性差异 (P >0 0 5 )。术后即时角膜中央 1mm区域内取材的透射电镜切片示两者的内皮变化无明显差异。结论　两种不同的粘弹剂在超声乳化术中对角膜内皮细胞均具有明显的保护作用。     

DECB对超声乳化角膜内皮损伤修复的促进作用

目的研究小牛血去蛋白提取物（deproteinized extract of calf blood，DECB）作为白内障超声乳化术中冲洗剂和留置剂对角膜内皮细胞修复的促进作用。方法采用12只纯种日本大耳白兔制作白内障超声乳化术动物模型，右眼为实验组，采用加入一定浓度DECB的BSS（必施）作为术中冲洗剂和术后留置剂，左眼对照组采用BSS（必施）为术中冲洗剂和术后留置剂。术前、术后即刻、术后6h、1天、2天、3天、7天使用接触型角膜内皮反射显微照相系统定量分析内皮细胞平均面积（averagesize）、变异系数（coefficient of variability）、细胞密度（celldensity）；术后即刻、1天、3天行内皮细胞锥蓝-茜素红联合染色，光镜下观察内皮细胞。结果角膜内皮细胞面积、变异系数和内皮细胞密度比较，术后6h、1天、3天，差异有统计学意义（P〈0．05）；术后1天、2天，差异有显著统计学意义（P〈0．01），内皮细胞密度0．01〈P〈0．05，其差异有统计学意义；术后7天角膜内皮细胞面积、变异系数和内皮细胞密度，差异无统计学意义（P〉0．05）。光镜下观察内皮细胞：术后即刻两组无差异，角膜内皮细胞成规则的六边形镶嵌结构，可见缝隙连接和连接复合体；术后1天实验组内皮细胞可见细胞不规则改变，突起增多，未见核蓝染；对照组内皮细胞不规则改变明显，突起增多，细胞边界不清，可见核蓝染和崩解的细胞，术后3天两组内皮细胞仍然呈不规则的六边形，无明显差异。结论DECB作为超声乳化白内障摘除术中灌洗剂和术后留置剂，能够促进角膜内皮细胞损伤的修复。     

二甲双胍对糖尿病大鼠心肌保护作用的形态学观察

目的:观察传统的降糖药二甲双胍对糖尿病大鼠心肌的保护作用。方法:实验于2004-03/10在锦州医学院试验动物中心完成。①取雄性SD大鼠一次性尾静脉注射新鲜配置的20g/L链脲佐菌素溶液60mg/kg制备糖尿病模型,取造模成功(空腹血糖≥13.9mmol/L)大鼠50只单纯随机分为糖尿病组10只,胰岛素组和二甲双胍组各20只,另取10只尾静脉注射枸橼酸钠缓冲液的正常大鼠为正常对照组。②成模后第4天起,糖尿病组隔天皮下注射鱼精蛋白胰岛素1～2U/次维持存活,胰岛素组皮下注射普通胰岛素(4～6U/次,每天两三次),二甲双胍组灌胃二甲双胍20～30mg/(kg·d),正常对照组每天灌胃等量生理盐水。实验过程中胰岛素组和二甲双胍组大鼠空腹血糖控制在6.4mmol/L以下。③治疗12周后,大鼠断头处死,采血测血糖和血浆胰岛素,取左心室心肌组织,常规制作电镜切片,JEOL1200EX电子显微镜观察。结果:60只大鼠进入结果分析。①空腹血糖水平:胰岛素组和二甲双胍组显著低于糖尿病组[(7.84±3.6),(8.16±3.13),(14.00±4.00)mmol/L,P<0.05],与正常对照组比较差异不显著[(5.76±0.84)mmol/L,P>0.05]。②空腹血浆胰岛素水平:二甲双胍组与正常对照组比较差异不明显[(11.01±4.21),(9.48±3.56)mU/L,P>0.05],但低于胰岛素组和糖尿病组[(33.86±14.73),(23.39±13.85)mU/L,P<0.05]。③心肌超微结构:糖尿病组大鼠心肌纤维内肌节紊乱,肌原纤维变性,线粒体增多,常有肿胀变性。经二甲双胍和胰岛素治疗后糖尿病大鼠心肌超微结构病理改变明显减轻。结论:二甲双胍能抑制糖尿病大鼠的心肌病变,对心肌有良好的保护作用。     

超声乳化术中3种黏弹剂对角膜内皮保护作用的比较

目的:观察超声乳化过程中,3种黏弹剂对角膜内皮细胞的保护作用。方法:实验于2003-06/2004-01在锦州医学院实验动物中心实验室和锦州市亚东眼科医院实验动物手术中心实验室进行。取纯种日本大耳白兔16只。随机抽出4只兔8只眼用于正常角膜内皮活性染色,其余按术中应用不同的黏弹剂分为3组:Viscoat组、AmviscPlus组和海诺特组。每组4只兔,每只兔双眼行超声乳化术,用接触性角膜内皮显微镜分别观察术前和术后6h角膜内皮细胞密度,并在术后6h经锥蓝-茜素红活性染色后,光镜下观察角膜内皮细胞形态结构的变化,同时计算内皮细胞存活率。结果:①角膜内皮细胞损失率:术后6h3组内皮细胞密度均低于术前(P<0.01),Viscoat组内皮细胞损失率低于AmviscPlus组和海诺特组(4.99±2.70)%,(8.22±1.52)%,(10.14±4.05)%,P<0.05),AmviscPlus组与海诺特组对比差异无显著性(P>0.05)。②内皮细胞存活率:术后6h,Viscoat组平均内皮细胞存活率高于AmviscPlus组和海诺特组[(93.78±3.14)%,(80.77±3.91)%,(84.91±6.71)%,P<0.01],AmviscPlus组与海诺特组比较差异无显著性(P>0.05)。③角膜内皮细胞形态结构特征:光镜显示Viscoat组角膜内皮细胞损害最小。结论:弥散性黏弹剂Viscoat对比其他粘弹性物质保护效果要好。     

肝细胞线粒体周围内质网的三维重建与体视学分析

目的　研究肝细胞线粒体与周围内质网的结构关系。方法　制作大鼠肝组织连续超薄切片 ,通过电镜观察线粒体与其周围内质网的结构关系 ,重建其三维模型并进行体视学分析。结果　连续切片和三维模型的观察显示 :大多数线粒体周围既有RER ,又有小囊泡状的SER ;少数线粒体则仅有小囊泡状的SER。这些内质网与线粒体紧密相贴 ,其间隙小于 30nm ,间隙内没有任何细胞器。体视学分析显示 :肝细胞内有 2 6%的RER和 32 %SER贴附在线粒体的周围。结论　肝细胞线粒体通常在内质网包绕下执行生理功能 ,二者是结构和功能紧密联系的整体。     

软骨源形态发生蛋白基因转染自体骨髓间充质细胞修复关节软骨缺损

背景:以支架或干细胞在一定程度上能够修复软骨缺损,但是研究中发现较大块的缺损修复效果还达不到令人满意的程度.基因转染后的干细胞能够不断的释放生长因子有可能够为软骨缺损研究带来突破.目的:进一步验证软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞是否会促进体内兔软骨修复.方法:从兔骨髓内分离获得骨髓间充质干细胞,脂质体感染的方法将软骨源形态发生蛋白基因转染到骨髓间充质干细胞中.实验组移植转染后的细胞;单纯骨髓间充质干细胞组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白对照组缺损区不移植细胞.术后行组织学检测及组织学评分分析修复情况.结果与结论:体内修复过程中,软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞促进了软骨再生.透明软骨填充了软骨缺损区,并且深部区域显示了软骨下成骨.透明软骨的重建区域优于单纯骨髓间充质干细胞移植组.组织学评分实验组高于骨髓间充质干细胞对照组和空白组.提示转染软骨源形态发生蛋白基因的骨髓间充质干细胞能够促进和提高关节软骨的改建和修复.     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内细胞浓度与胰岛素和C肽的释放

背景：微囊化已经普遍应用于各种实验研究,微囊包裹的干细胞治疗糖尿病问题也成为当今的热点,但是囊内包裹的细胞浓度与胰岛素释放量的关系成为目前需要解决的问题之一。 目的：运用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹胰岛素产生细胞,观察细胞浓度对胰岛素和C肽释放情况的影响。 方法：制备大鼠胰腺损伤提取物,将小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素产生细胞。免疫荧光和双硫腙染色鉴定诱导后细胞内胰岛素的表达。然后将胰岛素产生细胞制成浓度分别为1×10⁷ L^-1,5×10⁷ L^-1,1×10⁸ L^-1,5×10⁸ L^-1,1×10⁹ L^-1,5× 10⁹ L^-1的细胞悬液,气体吹喷法制成微囊,用6-羧基乙二酸荧光素检测囊内细胞活力,用葡萄糖刺激微囊内细胞检查其胰岛素和C肽的分泌情况。 结果与结论：胰腺损伤提取物诱导后双硫腙染色和细胞免疫荧光鉴定出胰岛素产生细胞内有胰岛素的表达;胰岛素产生细胞制成的微囊直径约为400 µm,大小均一,6-羧基乙二酸荧光素检测到囊内细胞的活力很好。用葡萄糖刺激不同细胞浓度的微囊,发现细胞浓度为1×10⁸ L^-1时,胰岛素和C肽的分泌达到最高。