神经型一氧化氮合酶在早期糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的:观察早期糖尿病大鼠肾组织内神经型一氧化氮合酶的表达变化。方法:实验于2005-03/10在锦州医学院科学实验中心与组织胚胎学实验室完成。60只两三月龄大鼠随机数字表法分成糖尿病模型组和正常对照组,每组30只。禁食12h后糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素50mg/kg,建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型,对照组注射相同体积的柠檬酸缓冲液。分别在第1,2,4周3个时间点处死动物,取肾组织,采用亚硝酸还原酶法检测一氧化氮的含量;采用免组织化学染色法检查致密斑处神经型一氧化氮合酶的表达,采用Mivnt细胞图像分析系统测定一氧化氮合成酶在致密斑处阳性细胞的灰度值。结果:在实验过程中,无动物死亡,全部进入结果分析。①1周时糖尿病模型组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量明显低于正常对照组,差异有显著性意义[(1068.01±61.61),(2329.99±200.62)mmol/L,P<0.05];2,4周时糖尿模型病组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量逐渐升高,2周时与对照组差异无显著性意义[(2334.59±192.40),(2372.11±193.34)mmol/L,P>0.05];4周时差异有显著性意义[(4939.51±133.44),(2407.30±174.94)mmol/L,P<0.05]。②1周病程时糖尿病模型组大鼠肾皮质一氧化氮水平低于正常对照组,差异有显著性意义[(8.56±1.25),(11.23±2.08)μmol/L,P<0.05],2周病程时高于同期正常对照组,差异有显著性意义[(13.71±1.86),(9.93±2.01)μmol/L,P<0.05],4周病程时显著高于同期正常对照组,差异有极显著性意义[(16.29±2.46),(10.99±1.64)μmol/L,P<0.01]。③各病程糖尿病模型组大鼠血糖均高于正常对照组大鼠,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在糖尿病大鼠肾脏病变的早期,肾组织内一氧化氮合成减少,可能主要是由于神经型一氧化氮合酶合成减少造成的。     

不同成分灌注液对超声乳化术中兔角膜内皮细胞形态结构的影响

背景:灌注液的成分与其保护角膜内皮功能之间的联系一直是眼科界和制药业研究的热点课题。目的:观察超声乳化术中使用不同灌注液对兔眼角膜内皮细胞结构及功能的影响。设计:随机分组对照动物实验。单位:锦州医学院实验动物中心室,一所市级医院实验动物手术中心实验室。材料:实验于2004-09/2005-03在锦州医学院实验动物中心实验室和锦州市亚东眼科医院实验动物手术中心实验室进行。清洁级3.5月龄纯种日本大耳白兔16只,随机分为4组:正常对照组、生理盐水组、世可组和平衡盐液组,每组4只。灌注液世可(沈阳齐兴制药有限责任公司生产);平衡盐液(美国Alcon公司生产)。方法:用100mL/L水合氯醛(3mL/kg)腹腔麻醉,眼部用4%盐酸奥布卡因滴眼液表面麻醉。行双眼手术。使用美国Alcon超声乳化仪,常规显微手术器械,于上方巩膜缘后2mm作长约3.5mm的巩膜隧道切口,穿刺入前房,注入粘弹剂Viscoat(Alcon公司生产)0.25mL;环行撕囊,直径约5mm;超声乳化头置于中央区乳化吸出晶体核及皮质;术毕关闭切口。于术前和术后6h采用接触性角膜内皮显微镜进行角膜内皮细胞形态学定量测定:角膜内皮细胞密度、细胞面积、六边形细胞百分率和变异系数。术后6h应用锥蓝-茜素红活性染色,光镜下观察各组角膜内皮细胞微细结构的变化。主要观察指标:①角膜内皮细胞形态学定量分析(角膜内皮细胞密度、细胞平均面积、变异系数和六边形细胞百分率)。②角膜内皮细胞形态结构特征。结果:16只大耳白兔均进入结果分析。①术前各组间各项指标比较差异均无显著性。②细胞密度、细胞面积、六边形细胞百分率、变异系数:术后6h生理盐水组、世可组和平衡盐液组均低于正常对照组(P<0.05),世可组和平衡盐液组对比差异无显著性(P>0.05)。③光镜显示生理盐水组角膜内皮细胞形态改变明显,世可组和平衡盐液组角膜内皮细胞改变轻微,无细胞坏死。结论:在超声乳化术中,灌注液对角膜内皮的损伤为化学性损伤,在相同手术条件下,国产灌注液世可对角膜内皮细胞具有良好的保护作用。     

冰冻切片几种防冰晶方法的比较

冰冻切片因其制作过程简便、快捷，尤其在免疫组织化学染色中，能较好地保存细胞抗原的活性，故在科研及临床工作中应用非常广泛。但易产生冰晶，常影响实验结果的观察和分析。为保证科学的严谨性，必须尽量避免或减少冰晶的产生。现我们针对本实验室常用的几种防冰晶方法进行比较，具体步骤如下。     

冠心病合并糖尿病患者冠状动脉造影分析

1　对象和方法1.1　对象　我院 2 0 0 1- 0 8～ 2 0 0 4 - 0 7住院患者 92例 ,按 WHO冠心病诊断标准 [1 ]确诊为冠心病并行 CAG证实至少有 1支血管狭窄≥ 5 0 %的病例。糖尿病诊断符合 1997年美国糖尿病协会 (ADA)标准。糖尿病组 :冠心病合并糖尿病 4 5例 ,男 2 7例 ,女 18例 ,平均年龄 (6 3.5 8± 6 .72 )岁。冠心病组 :随机选择同期住院的单纯冠心病无 2型糖尿病 4 7例 ,男 30例 ,女 17例 ,平均年龄 (6 4 .32± 7.5 1)岁。患者的基础资料显示在性别、年龄等方面无差异。1.2　方法　应用 Judkins法分别行左、右冠状动脉造影 ,以冠状动…     

胶原蛋白-硫酸肝素神经生物支架材料的制备

背景：有报道胶原-氨基聚糖材料基体植入周围神经组织节段性损伤处,可以促进神经轴突修复再生。硫酸肝素是细胞外基质的重要组成部分。目的：制备胶原蛋白-硫酸肝素神经组织工程生物支架,观察其生物相容性并用于神经损伤的修复。方法：将胶原蛋白-硫酸肝素悬浊液冷冻干燥,通过显微物镜、扫描电镜观察内部孔隙结构,测量孔的大小。选取SD大鼠12只制备5mm坐骨神经神经缺损模型,随机分为3组。硫酸肝素复合胶原支架移植桥接组、空白对照组（旷置）、正常对照组（自体神经移植）。移植术后经神经功能学观形态学检测其修复疗效。结果与结论：胶原蛋白复合硫酸肝素支架材料具有纵行的、平行排列的微管结构,高度仿生神经的内部空间三维结构。组织学染色、电镜观察证实再生神经纤维成功地长入组织工程材料内。部分大鼠运动功能恢复良好。结果提示,胶原蛋白复合硫酸肝素材料组织相容性良好,可以促进神经的再生并可用于神经损伤的修复。     

小型猪Ⅰ型糖尿病模型制作

目的 建立一种稳定的小型猪Ⅰ型糖尿病模型.方法 以巴马小猪为实验对象,联合应用链尿佐菌素和四氧嘧啶,以静脉推注的方式给药,给药总量相同,一组分2次给药,另一组分3次给药,检测体重、血糖、胰岛素水平及C肽含量的变化.结果 两种给药方式都可造成小型猪血糖的迅速升高,但是分3次给药组血糖升高持续时间较长,模型比较稳定.结论 静脉推注链尿佐菌素和四氧嘧啶可制备小型猪糖尿病模型,且小剂量多次给药方法制备的模型稳定性好.     

尼克酰胺与胰腺损伤提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞的比较

目的 探讨诱导小鼠骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣs）分化为胰岛素产生细胞较好的方法。 方法 大鼠胰腺提取物和尼克酰胺分别诱导小鼠的BMSCs分化,经免疫组织化学、双硫腙染色、放射免疫学方法和RT-PCR技术（Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK）鉴定两种诱导方法诱导细胞的分化程度。 结果 两种方法诱导后的细胞均可以表达胰岛素。双硫腙染色和胰岛素免疫组织化学的染色结果发现,两种分化后的细胞无明显差异。放射免疫学检测胰岛素及C肽片段：两种分化后的细胞表达的胰岛素随25mmol/L葡萄糖刺激时间的延长产生的胰岛素分泌曲线有明显差别,尼克酰胺分化的小鼠BMSCs产生的胰岛素产生细胞（IPCs）与正常小鼠胰岛细胞的曲线一致性欠佳,而大鼠胰腺损伤提取物分化的小鼠骨髓间充质干细胞产生的胰岛素产生细胞的分泌曲线一致性很好。尼克酰胺分化后的细胞不能产生C肽片段,而大鼠胰腺损伤提取物能够表达C肽片段。RT-PCR结果显示,尼克酰胺与大鼠胰腺提取物均可以表达胰岛细胞相关的几个mRNA（Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK）。 结论 大鼠胰腺提取物与尼克酰胺相比,可能是一种较好的诱导BMSCs分化成熟产生胰岛素的诱导剂。     

胶原-壳聚糖支架材料与间充质干细胞的组织相容性

背景：近年来一些研究发现胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料可作为神经组织工程的支架材料,但相关细胞相容性研究较少。 目的：观察兔骨髓间充质干细胞在胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料表面生长及分化情况。 方法：分离培养兔骨髓间充质干细胞,无血清培养液培养,流式细胞仪检查细胞表型;然后,将其接种到凝胶支架材料表面(实验组)及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面(对照组),神经诱导培养基内培养,倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况。 结果与结论：细胞表型为CD29⁺、CD44⁺、CD166⁺。倒置相差显微镜观察：实验组中,接种的骨髓间充质干细胞生长良好,7 d后可见有突起神经细胞,细胞生长情况与对照组未见有明显差别。证实胶原蛋白-壳聚糖复合支架材料对骨髓间充质干细胞有良好细胞相容性。     

通心络对糖尿病大鼠心脏功能及心肌超微结构的影响

目的:探讨通心络对糖尿病大鼠心脏功能及心肌超微结构的影响。方法:制备大鼠糖尿病模型并给予通心络灌胃,12 w后测定各组大鼠心脏重量指数,左室收缩压和左室舒张末压、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax),观察心肌超微结构变化。结果:糖尿病组大鼠心脏重量指数明显升高,±dp/dtmax降低,电镜下心肌内皮细胞明显肿胀,毛细血管基底膜出现不规则明显增厚,通心络组上述异常均明显减轻。结论:通心络可减轻糖尿病心肌病变,对糖尿病大鼠的心脏功能有保护作用。     

血管内皮生长因子在胃癌组织中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子在胃癌中的表达。方法 采用石蜡切片、免疫组织化学技术检测胃癌组织血管内皮生长因子蛋白表达及微血管密度。结果 血管内皮生长因子蛋白表达有明显异质性。结论 血管内皮生长因子蛋白表达与肿瘤的分化程度有密切关系。