6965名汉族骨髓供者HLA多态性分析

目的　分析中国汉族骨髓供者的人类白细胞抗原 (HLA)多态性 ,并寻找和鉴定新的HLA等位基因。方法　采用序列特异性引物聚合酶链反应、DNA测序技术以及分子克隆等以DNA为基础的HLA基因分型技术。结果　共鉴定 6 96 5人份无关汉族骨髓供者的HLA A、B、DRB1座位上的等位基因 ,其中 4 70 7人份为南方汉族个体 ,2 2 5 8人份为北方汉族个体。在受检群体中共检出 72种HLA特异性 ,包括过去很少在汉族人群中被检测到的HLA A2 5、A34、A74、B4 1、B4 2、B5 3、B73、B81等。HLA A、B、DRB1座位上尚未被检测出的空白基因频率分别小于 0 .2 0 % ,0 .2 5 %和 0 .70 %。发现 3个新等位基因 ,已被WHO命名为HLA A 0 2 5 3N ,HLA A 1114和HLA B 5 6 10。结论　在骨髓供者HLA分型中使用以DNA为基础的基因分型技术 ,可以得到精确可靠的基因频率以及发现新的等位基因。一些HLA基因在南北汉族人群中的分布有明显的差异 ,为了能最大限度地募集到带有不同HLA分型的骨髓供者 ,有必要在我国南北多个地区筛选骨髓供者     

中国汉族人群HLA-B*40组的多态性研究

为了研究中国汉族人群HLA—B^*40等位基因的分布特点，探讨其可能对临床供者选择的影响，从中华骨髓库深圳分库中随机抽取381名志愿供者，用PCR—SSO方法进行HLA—B基因分型；另从已分型的1270例供者中选出低分辨率结果为B^*40纯合子的样本。所有B^*40阳性标本采用PCR—SBT及PCR—SSP方法进行高分辨率分型。结果表明：随机抽取的381例样本通过Hardy—Weinberg平衡检验，HLA—B^*40的基因频率为0．1692。在实验中仅检测到B^*4001，B^*4002，B^*4003，B^*4006，其血清学特异性分属B60，B61。各等位基因相对频率B^*4001为0．1192，B^*4002为0．0154，B^*4003为0．0038．B^*4006为0．0308。B^*40纯合子在高分辨水平上检测，其等位基因表现出一定的规律性，低分辨结果为B^*40XX(B^*4001组)，一，高分辨都是B^*4001；低分辨为B^*40XX(B^*4002组)．一，高分辨则为B^*4002或B^*4006或二者杂合子。结论：中国汉族人群B^*40基因家族中B^*4001占绝对优势。为了选择最适供者，建议临床配型中使用高分辨率基因分型。     

地中海贫血患者找到人类白细胞抗原A-B-DR单倍型及抗原全相合供者的可能性

背景：选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键，不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。 目的：分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DRB1单倍型和表型频率分布格局，估算其与骨髓库相合供者相配的概率。 设计：病例-对照分析。 对象：患者组为2000-06/2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者，广东籍，彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08/2006-12中华骨髓库招募的5 352名广东籍健康供者，与患者无血缘关系。 方法：应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A，B，DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征，某一个体人类白细胞抗原A，B，DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型全相同供者的概率P，应用公式P=1-（1- Df）n计算，Df 为供者表型频率。 结果：患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33-B58-DR17，A11-B75-DR12，A11-B13-DR15和A33-B47-DR13；患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33-B58-DR17，A2-B46-DR14，A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2,33；B46,58；DR9,17,A2,11；B46,75；DR9,12,A11,33；B58,75；DR12,17,A2,2；B46,46；DR 9,9和A2,11；B13,46；DR9,15；患者组常见的表型为A2,33；B46,58；DR9,17,A2,2；B46,46；DR9,9,A2,2；B46,46；DR9,14,A2,11；B46,60；DR9,12和A2,11；B46,75；DR9,15。两组之间相匹配的表型有19种，表型匹配概率为0.44%（19/4282）。人类白细胞抗原A24-B51-DR8，A3-B38-DR7，A24-B50-DR12，A3-B38-DR4，A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2,33；B46,58；DR9,17，A2,2；B46,46；DR9,9和A2,11；B46,75；DR9,15等67种表型，其频率在正常对照组有不同程度的降低，携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。 结论：地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性，患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。     

Penta D、 Penta E和SE33位点基因分型在二联体亲子鉴定中的应用

摘要：目的 研究增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座的检测后,对二联体亲子鉴定RCP值的影响。 方法 对二联体亲子鉴定案例除了进行ABI公司提供的AmpFISTR IdentifilerTM试剂盒中的15个STR位点检测以外,增加美国Promega公司的Penta D、 Penta E和SE33试剂盒复合扩增STR位点的检测,并计算增加检测位点前后的亲子关系指数（PI）和亲子关系相对机会（RCP）。 结果 135例二联体亲子鉴定案件中有109例常染色体RCP值大于99.99%,频率为80.74%。26例RCP值小于99.99%,频率为19.26%。增加Penta D、 Penta E和SE33位点基因座检测后有83.33%的家系由原来的RCP值小于99.99%转变为RCP值大于99.99%。 结论 增加遗传标记物的检测可以有效的提高二联体亲子鉴定的RCP值,从而提高鉴定的准确性。     

HLA PCR-SSP及SBT高分辨方法定型结果的对比研究

目的在HLA等位基因的高分辨鉴定中,对应用顺序特异性引物PCR扩增(PCR-SSP)和以测序为基础的分型技术(SBT)而出现模棱两可结果的标本进行分析,寻找出现模棱两可鉴定结果的主要原因,确保HLA高分辨配型的精确度。方法对78例UCLA(美国加利福尼亚大学洛杉矶分校)质控标本采用PCR-SSP和SBT方法进行HLA-A、B、DR位点高分辨定型,与UCLA结果相比较。结果采用PCR-SSP方法,有16例标本出现模棱两可定型结果,分布比例分别为HLA-A 7．7％,HLA-B 9．0％,HLA-DRB1 6．4％;采用SBT方法,有23例标本出现模棱两可定型结果,分布比例分别为HLA-A 7．6％,HLA-B 12．8％,HLA-DRB1 19．2％。结论HLA等位基因分型若使用单一技术,包括PCR-SSP及SBT方法,均会有相当比例的结果是模棱两可、不能确定的;若配合使用,则能大大提高定型能力和定型结果的精确度。     

应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估HLA相合供者的概率

目的探讨不同类型白血病汉族患者群体找到HLA-A、B和DRB1低分辨全相合无关供者可能性。方法依据1201名急性淋巴细胞白血病(ALL)、1065名急性非淋巴细胞白血病(AML)和1432名慢性粒细胞白血病(CML)汉族患者群体HLA-A、B和DRB1低分辨分型结果,计算这3类白血病汉族患者群体的HLA-A、B和DRB1抗原频率,单体型频率和表型频率,联合应用中华骨髓库(CMDP)中健康汉族供者HLA表型频率数据,进一步推导出这3类白血病汉族患者群体找到至少1名HLA低分辨全相合供者概率及回归方程。结果ALL、AML、CML汉族患者群体表型种类数分别为416851、373903和464373种,其中31%的表型频率均>1/100万;ALL、AML、CML汉族患者群体在CMDP的汉族供者群体中找到至少1名HLA表型相同供者回归方程分别为:P=0.0824LgN-0.3667、P=0.0825LgN-0.3636和P=0.0829LgN-0.3644;计算出81.6%的ALL、81.9%的AML、82.4%的CML汉族患者要找到1名HLA低分辨表型相同的无关供者,CMDP中汉族有效供者群体数平均146.7万。结论应用不同类型白血病患者群体HLA-A、B和DRB1遗传学数据评估患者找到HLA相合供者概率较仅以健康供者群体HLA遗传学数据评估更为精确。为有效地提高患者的移植效果,需要征募更多的无关供者。     

地中海贫血患者找到人类白细胞抗原A-B-DR单倍型及抗原全相合供者的可能性

背景：选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键，不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。目的：分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A—B—DRB1单倍型和表型频率分布格局，估算其与骨髓库相合供者相配的概率。设计：病例一对照分析。对象：患者组为2000-06／2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者，广东籍，彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08／2006-12中华骨髓库招募的5352名广东籍健康供者，与患者无血缘关系。方法：应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A，B，DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征，某一个体人类白细胞抗原A，B，DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型仝相同供者的概率P，应用公式P=1-（1-Df）^n计算，Df为供者表型频率。结果：患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33．B58-DR17，A11-B75-DR12，A11-B13-DR15和A33-B47-DR13：患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9，A33-B58-DR17，A2．B46-DR14，A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2，33；B46，581DR9，17，A2，11；B46，751DR9，12，A11，33；B58，75；DR12，17，A2．2；B46，46；DR9，9和A2，11；B13，46：DR9，15；患者组常见的表型为A2，33；B46，58；DR9，17，A2，2；B46，46；DR9，9，A2，2：B46．46：DR9，14，A2，11；1346，60；DR9、12和A2，11；B46，75；DR9，15。两组之间相匹配的表型有19种，表型匹配概率为0．44％（19／4282）。人类白细胞抗原A24-B51-DR8，A3-B38-DR7，A24-B50-DR12，A3-B38-DR4，A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2．33：B46，58；DR9，17，A2，2：B46，46：DR9，9和A2，11；B46，75；DR9，15等67种表型，其频率在正常对照组有不同程度的降低，携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。结论：地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B—DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性，患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。     

中国人群人类白细胞抗原A、B和DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的鉴别

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中，当某些等位基因间的差异碱基位于测序范围外时，无法得到清晰的等位基因结果。 目的：分析中国人群人类白细胞抗原A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的分布规律，探讨其在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原 A、B、DRB1基因的测序分型中的解决方案。 设计、时间及地点：采用随机抽样方法对研究样本进行人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型，并对其中的模棱两可等位基因进行验证性实验，于2006-01/2008-06在深圳市血液中心完成。 材料：658名深圳骨髓库汉族供者乙二胺四乙酸盐抗凝血5 mL。 方法：采用聚合酶链式反应--测序分型方法对658名深圳骨髓库供者的人类白细胞抗原A、B和DRB1基因进行高分辨分型，并采用针对相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物方法对其中由于碱基差异位于检测区外而产生的模棱两可等位基因进行鉴别。 主要观察指标：模棱两可等位基因的分布及确认。 结果：658份标本中，人类白细胞抗原A、B和DRB1三个基因座的模棱两可等位基因分别为9个(2种)、140个(5种)、406个(8种)，占等位基因总数的14.06%(555/3 948)。高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物鉴定结果显示，中国报道的DRB1*1401被全部确认为DRB1*1454；12例B*0705/B*0706中，有1例被确认为B*0706，其他13种等位基因的鉴定结果分别为A*6801、A*7402、B*2705、B*3501、B*4402、B*5801、DRB1*0101、DRB1*0406 、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*1201、DRB1*1302 和DRB1*1502。 结论：在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原基因的测序分型中可以应用直接鉴别的方法区分模棱两可等位基因，但在临床移植前的高分辨确认试验中则需要采用实验方法进行精确分型。     

2000-2006年中华骨髓库等待造血干细胞移植白血病患者的人口学及临床分布特征

目的 研究2000-2006年中华骨髓库中等待造血干细胞移植的白血病患者的分布特征和规律,为白血病的预防、干预提供科学依据.方法 采用Microsoft SQL 2005数据库操作平台对3708例中国籍汉族白血病患者数据,分组计算患者年龄、性别、地区等分布曲线,并采用X2 检验方法 比较其分布差异.结果 2000-2006年间,中华骨髓库中3708例白血病患者,年龄范围7个月至69岁,中位年龄为24.5岁,标准差为±6.7岁;男女患者总体比值1.95:1(2451/1257);慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者1435例,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者1202例,急性非淋巴细胞自血病(acute myeloid leukemia,AML)患者1066例,慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphoblastie leukemia,CLL)患者5例,以CML最为多见;自血病患者的分布高峰值在15～岁至30～岁年龄组,15～岁年龄组542例,20～岁年龄组559例,25～岁年龄组514例,30～岁年龄组522例;20～岁以下年龄组(儿童组),其中ALL占49.36%(613/1242),AML占27.78%(245/1242),CML占22.78%(283/1242),CLL占0.08%(1/1242),以ALL患者构成比居多;白血病患者在我国30个地区的分布构成不均一,最低0例,最高494例,中位数101例.结论 2000-2006年间,中华骨髓库中等待造血干细胞移植的白血病患者构成以儿童和青少年为主,男性高于女性,儿童白血病分类以ALL为主,应加强这一群体的健康教育和白血病防治工作.等待造血干细胞移植的白血病患者在各地区分布不均一,江苏、广东、浙江和山东地区患者有较高的分布格局.     

中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型

目的：通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原A．B．DRB1基因的序列分析，探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法：实验于2000—08／2004—03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院，供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因进行序列分析，观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果，则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果：①高分辨与低分辨分型结果比较：114对无关供受者对中，110对人类白细胞抗原-A，B，DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨（等位基因星号后两位数）DNA分型结果相吻合，4对聚合酶链式反应．测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1高分辨配对分类结果：39％的中国汉族供受者对完全配合，但61％的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因家族配对分布结果：3个座位的错配率分别为A（23％），B（10％），DRB1（17％）；A和DRB1座位的错配比较集中，A座位仅见于A＊02，A＊11和A＊24家族，DRB1座位见于DRB1＊04，DRB1＊08，DRB1＊12，DRB1＊14和DRB1＊15家族；而B座位的错配则比较分散，比较高的是B＊35，B＊48，B＊61和B＊62。④供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1错配等位基因组合结果：3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性，比较常见的几种组合为A＊0201／0207，A＊1101／1102．A＊0201／0206，A＊0203／0207，B＊4002／4006，DRB1＊1201／1202和DRB1＊1501／1502。结论：中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性，在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。