不脱钙冰冻骨组织切片原位杂交

我们采用不脱钙的骨痂组织冰冻切片进行原位杂交,旨在探索一种更快捷、灵敏却不失特异性的骨组织的原位杂交方法。一、材料与方法１．动物模型与组织切片的制作：健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠６只,按文献［１］方法制作桡骨骨折模型,术后１、２、４周每次处死２只,取下骨...     

基于互补决定区移植的单抗人源化进展

人源化单克隆抗体被日益广泛地应用于癌症等重大疾病的靶向治疗。互补决定区(CDR)移植使人源化单抗的大规模制备得以实现。文章就CDR移植的策略和进展进行综述。     

胃十二指肠溃疡穿孔腹腔镜修补术后随访分析

目的总结腹腔镜胃十二指肠溃疡穿孔修补术的治疗效果。方法应用腹腔镜对27例胃十二指肠溃疡急性穿孔的病人行穿孔修补术,分别于术后2、6、12月进行胃镜随访,观察溃疡修复、演变过程。结果27例腹腔镜下穿孔修补术均成功,无中转开腹和手术并发症及死亡。术后平均（8．41±1．16）d出院。术后行胃镜随访26例溃疡完全愈合,1例因幽门梗阻行胃大部切除术。结论腹腔镜胃十二指肠溃疡穿孔修补术,创伤小,恢复快,术后并发症少。     

大鼠自体移植静脉PDGF及受体基因表达的实验研究

内膜增生是移植静脉失败的主要原因．发病机理尚不清楚。本研究取Wistar大鼠80只建立自体颈静脉移植于肾下腹主动脉动物模型．通过电镜和组织切片原位杂交分期于术后2h、24h及术后1周观察移植静脉超微结构和血小板源生长因子（PDGF）及受体基因表达动态变化。结果显示：（1）术后2h．内膜破裂翻卷，SMC线粒体轻度肿胀；PDGF－A及PDGFR－βmRNA表达增加．但PDGF－BmRNA表达量较大；（2）术后24h．大部分内皮细胞脱落，内膜被覆以丝状血栓；PDGF－A与PDGFR－β较术后2h表达明显增加；（3）术后1周，内皮开始重新再生；PDGF－AmRNA表达开始减少．PDGFR－β持续表达。结果表明PDGF在自体静脉移植中与SMC增殖及内膜增生有关。     

药物难治性继发性甲状旁腺功能亢进症术后再次手术的定位诊断及疗效探讨

目的分析药物难治性继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）术后进行再次手术的定位诊断,并探讨其疗效。方法回顾13例药物难治性SHPT术后需再次手术的患者的临床资料,分析再次手术前的定位诊断情况,并将血全段甲状旁腺素、血钙、血磷、碱性磷酸酶、血钙磷乘积等指标的术后、术前变化作对比,观察再次手术的疗效。结果13例再次手术患者均采用3种方法进行术前定位诊断,其中超声检查检出率为69.2%（9/13）;99m锝-甲氧基异丁基异腈显像（99mTc-MIBI）检出率为84.6%（11/13）;增强CT检出率为61.5%（8/13）;3种方法结合检出率为100%（13/13）。13例患者根据定位诊断再次手术均获成功,术中共检出23颗甲状旁腺,其中颈部原位的9颗,颈部异位的4颗,前臂的10颗;颈部异位的旁腺分别位于甲状腺腺体内（1颗）、前上纵隔内（1颗）以及胸腺内（2颗）。手术治疗对患者的皮肤瘙痒、骨骼疼痛等临床症状改善效果明显,术后血全段甲状旁腺素、血钙、血磷、碱性磷酸酶、血钙磷乘积等指标均较术前明显降低（均P＜0.05）。术后1例患者出现甲状腺功能减退,3例患者出现暂时性声嘶,无出血、死亡等严重并发症发生。患者术后6个月随访期间内均无复发。结论再次手术对于药物难治性SHPT是一种有效且安全的治疗方法,近期疗效确切。对于再次手术患者术前可采用多种影像学检查定位异位或增生的旁腺,切除所有可能的甲状旁腺组织,以避免反复发作。     

人血小板内皮舒张因子合酶互补脱氧核糖核酸克隆

目的：建立人血小板互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）文库，筛选出血小板内皮舒张因子合酶（ＮＯＳ）ｃＤ－ＮＡ克隆。方法：用新鲜血小板悬液纯化血小板，提取总核糖核酸（ＲＮＡ），以ＲＮＡ为模板合成ｃＤＮＡ，将ｃＤＮＡ连接λｇｔ１１臂，用噬菌体包装蛋白包装，然后转染宿主菌Ｙ１０９０建库。用地高辛标记探针进行杂交，挑出阳性克隆，扩增后纯化脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）。将重组ＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ酶解，电泳，并将插入片段切下，纯化得到内皮舒张因子合酶ｃＤＮＡ。结果：从血小板中获得ＲＮＡ约１．５ｍｇ，ＲＮＡ变性电泳可见较清晰的１８Ｓ和２８Ｓ条带且无ＲＮＡ降解。第一条ｃＤＮＡ链产量为１．８２μｇ，第二条链为３．７９μｇ，放射性自显影显示双链ｃＤＮＡ分子大小范围在０．５～５．０ｋｂ，大部分位于１．０～４．０ｋｂ之间。人血小板内皮舒张因子合酶ｃＤＮＡ克隆约３．０ｋｂ左右。结论：人血小板内皮舒张因子合酶ｃＤＮＡ克隆约３．０ｋｂ，与其它组织的相似。     

激光角膜切除后EGF及其受体的表达

目的 研究ｈａｚｅ形成的机理，检测激光角膜光学切除术（ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ，ＰＲＫ）后角膜上皮和基质表达ＥＧＦ和表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）ｍＲＮＡ的变化。方法 新西兰白兔２０只，随机分成４组，其中１５只施行ＰＲＫ。于术后１、２、３月用裂隙灯显微镜观察ｈａｚｅ形成情况，非用原位核酸分子杂交方法，检测     

芪麝颈康丸对椎间盘细胞肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6mRNA表达的影响

目的:探讨芪麝颈康丸抑制颈椎间盘退变的分子机制。方法:将48只大鼠分成4组,切除其中36只(A、B、C 3组)颈后部浅、中层肌,造成颈椎间盘退变模型,D 组为正常假手术组。分别给予芪麝颈康丸(A)及对照药颈复康(B)等药物治疗,C、D 组不给药。4个月后将动物处死,采用原位杂交方法观察分析肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA 在大鼠颈椎间盘组织中的表达规律及芪麝颈康丸对两者表达的影响,同时观察各组椎问盘退变程度的变化。结果:模型空白(C)组椎间盘退变明显,与 A、D 组比较。差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。TNF-α mRNA 阳性信号各组均在椎间盘终板有较高表达,4组程度相似。除 C 组椎间盘髓核软骨样细胞中有明显表达外,其余各组髓核中未见 TNF-α mRNA 阳性信号表达。IL-6mRNA 阳性信号零散地见于各组椎间盘终板,且数量均很少。结论:TNF-α与颈椎间盘退变关系密切,而 IL-6在椎间盘退变过程中所起作用不大。芪麝颈康丸抑制髓核细胞 TNF-α mRNA 的表达可能是其疗效机制。     

用λgt11载体构建人脑胶质瘤基因文库

自人脑胶质瘤手术标本中提取mRNA,逆转录合成cDNA,在T_4DNA 连接酶作用下,与一头是平末端,另一头是EcoR I 粘性末端、内含Not I 切点的插头相连,经T_4多聚核苷酸激酶磷酸化后,再与脱磷酸处理过的λgt11 臂连接,形成重组λgt11DNA。体外包装,构建了一个库容量含1.02×10~6重组子的人脑胶质瘤cDNA 基因文库。克隆效率为1.08×10~7pfu/μg cDNA。重组百分比为96.2%。     

青蒿素的免疫抑制作用

本文报道青蒿素水溶性衍生物——琥珀酸酯钠(简称QHS)对体外免疫反应的显著抑制及体内外反应的规律。 一、QHS的体外作用 (一)抑制作用及反应时间:用经典的掺入试验发现QHS对致分裂原(PHA及ConA)刺激的小鼠(C57BL或CFW)脾细胞或正常人外周血淋