临床分离耐药阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因的检测与分型

阴沟肠杆菌已成为医院感染的重要条件致病菌,且有较高的耐药性。由于头孢菌素、碳青霉烯类在临床上的广泛使用,阴沟肠杆菌耐药机制不断发展,其中的细菌产β内酰胺酶（ESBLs）是其耐药的重要机制［1］。目前,ESBLs种类已超过200多种,其中TEM、CTX-M、SHV、KPC型临床上较常见。作者前期的研究,对耐药阴沟肠杆菌,所产ESBLs 进行了检测和分型,22.73％的菌株单产AmpC酶、19.32％菌株单产ESBLs［2］。本文对ESBLs基因进行分型,旨在为进一步研究耐药基因的调控奠定基础。     

重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒全基因克隆及测序

目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA克隆并测序，从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系。方法10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA，聚合酶链反应（PCR）扩增HBV全基因。PCR产物构建到PUCm-T载体上，转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞，经酶切鉴定，获得含3．2Kb HBVDNA的重组克隆菌，全基因测序，分析各读码框核苷酸和氨基酸变化。结果4例成功构建HBV DNA克隆，并完成全基因测序。其中3例在前C区发生G1896A变异，产生一个终止密码子，导致HBeAg缺失；1例在C启动子区1762、1764双位点出现突变；有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知细胞毒T淋巴细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的细胞表位。结论该法可用于临床研究HBV病毒基因结构与重型乙型肝炎发病的关系，并为进一步研究其HBV基因功能奠定基础。     

红曲共生茵的分离和鉴定

目的：对浙江东阳民间红曲中的共生菌进行分离纯化，并鉴定。方法：通过平板点种分离纯化，经微室培养，进行菌丝、分生孢子、闭囊壳和子囊孢子等形态鉴定，以及API生化反应鉴定。结果：从红曲米的共生菌中分离得到粉红红曲霉、紫红红曲霉和酿酒酵母1。结论：传统的红曲为共生菌协同发酵的产物，共生体系中的各种菌对红曲的形成，尤其是功能性红曲的代谢产物的积累，可能起着重要的影响。深入研究红曲的共生菌，对更好地保护和开发我国的中医药资源具有深远意义。     

参麦注射液对老年大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡干预作用

目的:观察参麦注射液对缺血再灌注致老年大鼠心肌损伤与细胞凋亡的干预作用。方法:采用结扎冠状动脉左前降支后再通的方法,复制老年大鼠心肌缺血再灌注的动物模型,观察心肌的病变程度;DNA电泳及原位末端标记法检测心肌细胞凋亡。结果:参麦注射液治疗组的梗死面积小于再灌注组;DNA电泳发现再灌注组呈凋亡的典型表现,参麦治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注明显减少;TUNEL染色发现再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,参麦治疗组较再灌注组明显减少。结论:参麦注射液对缺血再灌注心肌损伤具有显著的保护作用,参麦可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡发生,并具有量效关系。     

杭州地区口腔科综合治疗台水道污染调查

目的了解杭州地区部分口腔诊疗单位综合治疗台水道污染情况和控制措施。方法采用现场问卷调查和采样检测方法,对杭州地区口腔科医院及诊所综合治疗台水道等用水污染情况进行了调查。结果在所调查的口腔医院诊所中,三级甲等医院口腔科综合治疗台水道平均细菌总数达9 283.3±9 034.1 cfu/ml;二级甲等医院综合治疗台水道细菌总数为40 821.5±33 669.8 cfu/ml,一级医院污染细菌总数为85 299.0±16 970.3 cfu/ml,私人诊所平均细菌总数为129 283.3±59 087.8 cfu/ml。在检出的细菌中,厌氧菌总数为29.5±40.0 cfu/ml,大肠杆菌总数为1 981.3±2 266.6 cfu/ml,霉菌总数为2 369.5±1 068.6 cfu/ml。结论杭州地区口腔诊疗单位综合治疗台水道污染严重,没有确实有效的防控措施。     

系统性红斑狼疮患者血清可溶性黏附分子的检测

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清黏附分子中可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的水平,并探讨其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,检测30名健康人和60例SLE患者血清sVCAM-1、sICAM-1水平,以分析其与SLE活动性变化关系。结果①SLE患者血清sVCAM-1平均水平为2342ng/ml,显著高于正常人对照组1240ng/ml(P<0.001)。②SLE患者中血清sICAM-1平均水平为802ng/ml,显著高于正常人对照组626ng/ml(P<0.001)。③SLE患者中,血清sVCAM-1水平活动期高于稳定期(P<0.05),sICAM-水平活动期高于稳定期(P<0.05)。④SLE组血清sVCAM-1和sICAM-1水平与SLE病情活动指数(SLEDAI)、抗dsDNA抗体水平及尿蛋白的发生呈正相关,与血清补体C3水平呈负相关。结论sVCAM-1,sICAM-1可能参与SLE发病机制。     

麦冬内生真菌与麦冬生长周期

目的：研究不同生长阶段麦冬根部的内生真菌。方法：采集不同生长阶段的麦冬根段，切片染色法观察麦冬根内真菌显微结构及真菌侵染的特征，分析麦冬内生真菌与麦冬发育的关系。结果：麦冬根内含有丰富的内生真菌，苗期根内逐渐出现菌丝并形成大量菌丝团，块根发生初期菌丝连续分枝形成丛枝，块根生长和块根膨大期内存在大量泡囊。结论：麦冬根内的真菌为丛枝菌根真菌，不同生长阶段，根内出现内生真菌的菌丝、丛枝、泡囊，显示内生菌可能与麦冬生长、活性成分的合成有关。     

白及提取物小鼠体内抗流感病毒药效研究

[目的]评价白及提取物小鼠体内抗流感病毒的药效。[方法] 流感病毒 A/Sydney/5/97(H3N2),经BALB/C小鼠和鸡胚体内增毒建立鼠肺适应株,测定其流感病毒半数致死剂量(mouse influenza virus median lethal dose,MLD50)。雌性BALB/C小鼠84只,适应性培养后随机分为7组,其中模型组,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组以0.1 MLD50的鼠肺适应株病毒90μL滴鼻感染,二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液滴鼻。感染后2h,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组分别以白及提取物高、中、低剂量(8g/kg·d、4g/kg·d、2g/kg·d)和达菲0.03g/kg·d灌胃,模型组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液、DMSO组给予等量DMSO灌胃,灌胃剂量均为200μL/只,1次/d,连续7d。灌胃第1、3、5、7天小鼠摘除眼球取血,ELISA法测定血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-α(interferon-α,IFN-α)和 IFN-β的含量;取肺脏称重并计算肺指数和肺指数抑制率;荧光定量PCR检测肺组织中病毒载量;HE染色观察肺组织的病理变化,综合评价白及提取物体内抗流感病毒药效。 [结果] 模型组小鼠肺组织病理切片显示肺组织间质性炎症明显,可见大量炎性细胞浸润,病毒载量不断增加;正常对照组和DMSO组小鼠肺组织中无流感病毒检出,无炎症改变。经白及提取物治疗,肺组织病理切片结果显示,炎症改善、炎性浸润细胞数量下降,高剂量组尤其明显。白及提取物肺指数抑制率最高达35.8%(高剂量组,第7天),达菲组最高可达47.2%。与模型组比较,各时间点白及提取物各剂量组与达菲组Ct值增加,病毒载量逐渐减少。与模型组比较,感染后第1、3、5、7天,白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中细胞因子IL-2含量均升高,除白及提取物中剂量组第3天外,其余时点白及提取物高、中剂量组与达菲组差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),低剂量组无统计学差异(P＞0.05)。感染后第1～3天,模型组、白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中IFN-α、IFN-β含量明显升高,到第5～7天又逐渐下降。与模型组比较,白及提取物高剂量组和达菲组第1、3、5天IFN-α含量升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);中、低剂量组第1、3天IFN-α含量升高,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05)。与模型组比较,白及提取物高、中剂量组和达菲组第1、3、5、7天IFN-β含量升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);白及提取物低剂量组第5天IFN-β含量升高,差异具有统计学意义(P＜0.05)。[结论] 白及提取物在小鼠体内具有显著的抗流感病毒作用,可能与促进IL-2、INF-α、INF-β生成,进而增强小鼠免疫功能有关。     

浙麦冬根际菌根真菌多样性及土壤性状研究

目的：研究浙麦冬根际菌根真菌多样性以及种植地土壤性状。方法：用湿筛法获得麦冬根际土壤的丛枝菌根真菌孢子,计数孢子密度、物种丰富度及各物种的出现频率;分析浙麦冬种植地土壤性状及金属含量和农药残留。结果：浙麦冬根际土壤中丛枝菌根资源丰富,孢子密度平均824.33个/100g土壤,球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属为优势类群;菌种丰富度平均为5。丛枝菌根真菌孢子的分布呈明显的季节性变化。种植土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素,无农药残留。结论：浙麦冬根际含有丰富的球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属等菌根真菌,其分布具有明显的季节性;根际土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素。     

金银花水煎剂对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用

[目的]探讨金银花水煎剂对D-半乳糖致衰模型小鼠的抗氧化作用。[方法]（1）取一月龄ICR小鼠50只,随机分为对照组、衰老组、金银花高、中、低剂量组。D-半乳糖构建衰老模型过程中,金银花高（10g·kg^-1）、中（5g·kg^-1）、低（2.5g·kg^-1）剂量组每天按剂量分别灌胃。对照组和衰老组灌等量的生理盐水。连续6W后采集小鼠血清样品和各组织匀浆样品进行生化指标SOD、MDA、GSH-Px检测。[结果]42d后,衰老组小鼠出现不同程度的行动缓慢,皮毛光泽暗淡;体重低于正常组;血清、肝、肾、大脑组织中的SOD值、GSH-Px水平低于正常组;血清、肝、肾组织中的MDA含量均高于正常组（P〈0.05或P〈0.01）;以上数据说明造模基本成功。与衰老组比较,金银花给药组各项指标明显改善,金银花给药组体重增加高于衰老组（P〈0.01）;血清、肝、肾SOD值及GSH-Px水平均高于衰老组（P〈0.05或P〈0.01）,MDA含量低于衰老组（P〈0.05或P〈0.01）。[结论]金银花对D-半乳糖致衰老小鼠具有抗氧化作用,且中剂量组（5g·kg^-1）效果显著。