慢性温和不可预知应激抑郁模型大鼠脑组织1H-NMR代谢组学研究

目的 采用高分辨核磁共振¹H谱（¹H-NMR）代谢组学技术研究慢性温和不可预知应激（CUMS）抑郁大鼠脑组织中代谢物及代谢通路的变化，探讨抑郁症的发病机制。方法 12只雄性SD大鼠随机分为模型组和对照组，采用CUMS对模型组大鼠进行为期4周的造模，进行称体质量、旷场实验和糖水偏爱实验验证模型是否成功，造模结束后收集大鼠脑组织。采用两相提取法（甲醇/氯仿/水）对脑组织进行提取，得到水溶性和脂溶性代谢物。应用¹H-NMR技术结合多元统计和代谢通路分析筛选出与抑郁相关的脑内差异代谢物，并构建其代谢通路。结果 行为学数据显示，与对照组比较，模型组大鼠的体质量、糖水偏爱率、旷场的穿格数和直立次数均显著降低（P<0.05），显示了抑郁状态。在大鼠脑组织的¹H-NMR图谱中共指认出35种内源性代谢产物。脑组织中水溶性和脂溶性代谢物主成分分析（PCA）均显示模型组与对照组分开，与行为学结果一致，表明造模成功；OPLS-DA分析找到9个水溶性差异代谢物和6个脂溶性差异代谢物。就水溶性代谢物而言，与对照组比较，模型组中肌酐、谷氨酰胺、牛磺酸和γ-氨基丁酸含量显著增加（P<0.05、0.01、0.001），丙二醇、谷氨酸、亮氨酸、缬氨酸和赖氨酸含量显著降低（P<0.05、0.01、0.001）。就脂溶性代谢物而言，与对照组比较，模型组-（CH₂） n和-N （Me₃）₃含量显著升高（P<0.05、0.001），胆固醇的C18/19甲基、R-CH₃、CH₂OPO₂-、-CH=CH-含量显著降低（P<0.05、0.01、0.001）。与对照组比较，CUMS造模后5条代谢通路发生显著变化：缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成，牛磺酸和亚硫磺酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，糖降解和糖异生通路和丙酮酸代谢。结论 运用¹H-NMR代谢组学技术结合多元统计分析和代谢通路分析，阐明抑郁症的发病机制与能量代谢、氨基酸代谢和神经递质合成等相关。     

基于1H-NMR代谢组学的阿胶化学成分差异性分析方法初探

目的 采用氢核磁共振(¹H-NMR)代谢组学技术对不同生产厂家的阿胶酸水解成分进行差异性比较。方法 对5个不同生产厂家的阿胶进行酸水解,然后进行¹H-NMR分析。对所得的¹H-NMR图谱进行化学成分归属指认,并结合相关软件进行多元统计分析,找出差异性化学成分。结果 从阿胶¹H-NMR谱中指认出17种化学成分;通过对A、C、D、E厂家生产的阿胶与B厂家生产的阿胶进行比较分析,找出了相应的差异性成分,主要包括异亮氨酸、羟脯氨酸、精氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸和乙酰丙酸等。结论 ¹H-NMR代谢组学方法可用于不同厂家阿胶化学成分差异性的分析,为阿胶的质量控制提供新方法和新思路。     

逍遥散抗抑郁代谢特征综合分析及其调节能量代谢和神经递质机制研究

目的通过对多种生物样本中内源性代谢物特征进行综合分析,阐释逍遥散抗抑郁的作用机制。方法对慢性不可预知温和刺激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)抑郁大鼠模型的血液、尿液、海马、肝脏、盲肠、粪便和临床患者的血浆、尿液等生物样本中逍遥散具有显著调节作用的差异代谢物进行代谢特征综合分析,归纳总结逍遥散在不同生物样本中调节的关键差异代谢物和代谢通路。结果逍遥散在不同生物样本中调节的相同差异代谢物有34个,其中11个变化趋势一致,涉及的关键代谢通路为能量代谢和神经递质通路等。结论逍遥散能够通过调节体内代谢平衡所在的代谢通路发挥抗抑郁作用,为系统挖掘逍遥散抗抑郁代谢机制提供依据。     

果蝇在抗衰老药物研究中的应用

果蝇作为广泛应用于衰老研究领域的模式生物,与其他衰老的动物模型相比较,果蝇衰老模型具有生长周期短,繁殖力强,雌雄易分辨,实验操作简单的优点,能够保证足够的数量以及足够的空间进行实验,同时还有基因保守性高等特点,因此是一种常用的衰老模式生物,近些年其在加快抗衰老药物的筛选速度和衰老的机制研究等方面显示出潜在的应用价值。对果蝇衰老模型的建立方法、给药方式、药效学评价、抗衰老通路及果蝇在部分抗衰老中药中的应用5个方面进行综述,分别介绍了5种果蝇衰老模型,不同的给药方式以及行为学,生化指标和代谢组学方面的研究,分析了模式生物果蝇与衰老相关的信号通路和机制,列举了的部分抗衰老中药在衰老模式生物果蝇中的应用,为今后衰老机制的研究、抗衰老中药物和保健品的开发等提供理论依据和实验参考。     

基于1H—NMR代谢组学技术寻找CCl4致大鼠急性肝损伤的代谢标志物

目的采用核磁（1H．NMR）代谢组学技术初步探讨四氯化碳（CCl4）致大鼠急性肝损伤后血清代谢物变化规律。方法SD大鼠随机分为空白、模型两组,模型组ip40％CCl4植物油溶液造成急性肝损伤模型,空白组注射等体积的植物油,造模24h后股动脉取血,常规肝脏病理切片,取血前12h禁食不禁水。比色法测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量,600MHzNMR波谱仪分析血清中小分子代谢物代谢轮廓,并对数据进行多元统计分析。结果模型组中ALT的含量显著升高,肝脏病理切片显示模型组大鼠的肝组织内形成很多空泡,肝细胞变大,坏死严重,有出血和大量中性粒细胞浸润：血清1H-NMR代谢图谱中共鉴定了20个代谢物,并确认了6个与CCl4致肝损伤相关的标志物。结论常规血生化指标和肝病理切片结果与代谢组学的多元统计分析结果相一致,且代谢组学可发现引起肝损伤的代谢标志物。     

款冬花药材质量评价方法的研究现状及分析

款冬花Farfarae Flos是中医临床和中药工业中常用药材,其质量直接关系到中医临床用药的安全性和有效性。从性状、显微鉴别、薄层鉴别、定量测定、指纹图谱、商品规格标准等方面对款冬花的质量评价方法及研究现状进行综述和分析,为款冬花的质量标准提升提供必要的参考。     

防己黄芪汤HPLC-UV/ELSD指纹图谱研究

目的建立防己黄芪汤(FHD)HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,归属和指认复方中主要特征峰。方法采用HPLC法,色谱柱为Venusil MP C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),紫外检测器:检测波长为254 nm,蒸发光散射检测器:漂移管温度为110℃,空气体积流量为3 L/min;进样量10μL;体积流量为1 m L/min。运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2008版)》对10批FHD指纹图谱进行相似度计算,并对共有峰进行药材归属及成分指认。结果建立了FHD指纹图谱;10批FHD指纹图谱相似度良好;在FHD HPLC-UV指纹图谱中标定了20个共有峰,其中3、6~8号峰来自防己,1、2、4、5、9、12、13、16、20号峰来自黄芪,10、11、13、14、15、17~19号峰来自甘草。在FHD HPLC-ELSD指纹图谱中标定了16个共有峰,其中1’~3’号峰来自防己,4’、7’、9’、11’、13’、15’、16’号峰来自黄芪,5’~8’、10’、12’、14’号峰来自甘草。通过进样对照品、复方以及在复方中加对照品的方式指认出复方中9个成分,分别为9/4’号峰(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、11/6’号峰(甘草苷)、13/7’号峰(芒柄花苷)、15号峰(甘草素)、16/9’号峰(毛蕊异黄酮)、20/15’号峰(芒柄花素),11’号峰(黄芪甲苷)、13’号峰(黄芪皂苷II)、16’号峰(黄芪皂苷I)。结论首次建立了FHD HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,该法操作简单、准确,精密度、重复性好,可用于表征FHD中化学成分信息,为FHD质量控制提供了可靠的科学依据。     

逍遥散类方及其分离组分抗抑郁作用的筛选研究

目的:研究比较逍遥散类方及其分离组分的抗抑郁作用,筛选最佳的抗抑郁复方及分离组分。方法:首先,以传统中药复方逍遥散、丹栀逍遥散、柴胡疏肝散水煎剂和阳性药(文拉法辛)为干预药物,采用大鼠强迫游泳实验评价各组药效。其次,将逍遥散、丹栀逍遥散和柴胡疏肝散复方及其分离所得的6个不同极性的组份,采用体外活性筛选实验,考察各复方及其分离组份对大鼠脑突触体摄取5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)和多巴胺(DA)的抑制作用。结果:与空白对照组比较,逍遥散水煎剂组、柴胡疏肝散水煎剂组、文拉法辛组均能够不同程度地缩短大鼠强迫游泳不动时间(P<0.05)。在待测样品的终反应浓度为10μg/mL的条件下,逍遥散水煎剂组X1、逍遥散分离组分X6、X7对大鼠脑突触体摄取单胺类神经递质有明显的抑制作用。结论:逍遥散及其分离组分X6、X7表现出良好的抗抑郁作用,可以作为筛选抗抑郁新药的理想组份。     

柴胡药材干根DNA提取及RAPD分析

目的 探索一种适用于柴胡药材干根DNA提取的方法,为实现以分子标记方法辨别柴胡药材奠定基础.方法 比较研究了分别用CTAB法、SDS法和高盐低pH法等3种方法提取柴胡样品基因组DNA.柴胡药材干根经过PVP以及TNE缓冲液进行不同的预处理,以CTAB法抽提DNA.以EcoR I/Mse I双酶切琼脂糖凝胶电泳及RAPD扩增检测提取DNA的质量.采用NTSYS-pc软件计算Jaccard遗传相似系数,以非加权配对算术平均数法(UPGMA)建立聚类图.结果 常规DNA提取方法提取药材干根DNA溶液经4℃放置后,黏稠并褐变,严重影响酶切和RAPD扩增.样品预处理优化条件是研磨时加入3%PVP,TNE缓冲液于0℃浸提2次,每次30min.以该优化的预处理方法处理6个柴胡药材干根样品,提取DNA条带清晰,酶切完全,RAPD扩增图谱清晰稳定,共获得有效扩增条带28条,其中多态性条带为20条,占71.43%.聚类分析表明,6个栽培品中,原产地为山西灵丘外地引种(LQWY)和甘肃陇西(LX)、山西灵丘(LQ)和山西方山(FSH)的亲缘关系较近,陕西商洛(SHL)和其他5个栽培品的亲缘关系较远.结论 柴胡药材干根经过预处理后,可采用常规的DNA提取方法抽提DNA,所提DNA适合于酶切、RAPD等分子标记分析.     

黄芩不同中医调剂品的HPLC指纹图谱比较研究

目的 比较黄芩不同中医调剂品黄芩生饮片、3种酒制黄芩、条芩与枯芩样品之间的HPLC图谱,探讨各组样品间的化学差异.方法 采用HPLC法.色谱条件:Hypersil ODS2 C_(18)柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:甲醇-0.05%磷酸水溶液线性梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长280 nm.运用相似度软件、SIMCA-P与SPSS软件对指纹图谱进行分析.结果 不同黄芩指纹图谱组间分类明显,组内集中性好:生品与酒制品之何分类明显,差异很大;不同酒制品相比,酒炒和酒炒炭样品比较相近,酒烘与酒炒样品则差异明显;枯芩与条芩相比,差异明显.其中变化明显的成分是黄芩中黄酮类成分中极性较小的成分.结论 证明了古代中医区别用药的合理性,为黄芩质量控制及综合评价提供可靠的科学依据,并为黄芩合理用药提供参考.