AngⅡ对人脐静脉内皮细胞CGRP受体组分的调节差异

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中降钙素基因相关肽(CGRP)受体组分的影响。方法以HUVECs作为实验对象,用无血清培养基同步化24 h后,以Ang Ⅱ非处理细胞为对照组,AngⅡ处理组为不同剂量的AngⅡ处理HUVECs 12 h,流式细胞仪检测细胞增殖率和凋亡率。Western Blot检测CGRP三种受体组分,即降钙素受体样受体(CRLR)、降钙素受体组分蛋白(RCP)和受体修饰蛋白(RAMP)1的蛋白表达。结果与对照组相比,在处理组细胞,AngⅡ呈剂量依赖性地抑制HUVECs增殖和诱导细胞凋亡,同时上调CRLR表达(P<0.01)。而对另外两个受体蛋白而言,AngⅡ(0.01～100 nmol/L)呈剂量依赖性的下调HUVECs的RAMP1的表达和RCP表达(P<0.05)。结论AngⅡ影响人脐静脉内皮细胞CGRP受体组分的表达存在差异,可引起人脐静脉内皮细胞CGRP受体功能改变。     

糖尿病发病的表观遗传学机制

目的 目前表观遗传通过DNA的甲基化、组蛋白的乙酰化、甲基化和非编码RNA的方式影响着生命的活动,表观遗传的变化会影响糖尿病及糖尿病并发症的发生和发展,研究表明,怀孕期间,各个基因的DNA甲基化异常,婴儿成年后得糖尿病的概率增加。在成人体内,DNA甲基化异常通过干扰胰岛的发育和影响胰岛的分泌,以及糖脂代谢的紊乱从而导致糖尿病。组蛋白的翻译后修饰主要分为:组蛋白的甲基化和乙酰化,主要通过作用于促炎症因子和炎症因子的信号通路,从而影响糖尿病的发生及其并发症的发生与发展。非编码RNA分为miRNA和lncRNA,随着近年来对miRNA和lncRNA研究越来越深入,已发现几十种miRNA和数十种LncRNA分别作用于胰岛素分泌和β细胞的发育、胰岛素抵抗、内皮功能紊乱、PI3K、IRS proteins、GLUT4、AKT/PKB、Insulin receptor、GF-1/2和IGF-1R等信号通路。     

血管紧张素Ⅱ受体与降钙素基因相关肽受体间相互调节在心血管疾病中的意义

血管紧张素Ⅱ受体(ANGⅡR)和降钙素基因相关肽受体(CGRPR)同属于G蛋白藕联受体家族.研究发现,单独激活ANGⅡR或CGRPR和同时激活两受体对细胞的命运表现出不同甚至相反的作用.目前已知,CGRP受体是由降钙素受体样受体(CRLR)、受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)、受体组分蛋白(RCP)3个组分组成.ANGⅡR和CGRPR间的相互作用可能发生在细胞膜的信号转导、细胞浆信号通路以及核内的基因转录等水平.本文综述了ANGⅡR和CGRPR在跨膜信号蛋白(如G蛋白及caveolae/caveoilins)、胞浆-胞核内信号蛋白(如NADPH氧化酶、MAPK家族)水平的相互作用,可望从心血管受体间信号整合改变的新视角来解释心血管疾病的发病机制.     

氯沙坦对高血压大鼠心肌MMP-2、Ⅲ型胶原和JNK1／2表达的影响

目的研究Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2，MMP-2)和JNK1／2在高血压大鼠心肌组织中的表达及氯沙坦干预后3者的变化，探讨氯沙坦逆转心室重构的药理机制。方法采用SD大鼠建立两肾一夹型(Goldblatt)高血压模型，将大鼠随机分为对照组、高血压组和氯沙坦治疗组。采用鼠尾动脉测压法记录每周血压变化，实验末切取心脏，并计算心脏与体重比值。免疫组织化学方法测定心脏组织中的Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2和JNK1／2表达。结果左肾动脉结扎术后大鼠收缩压升高，心脏体重比值增加，心肌间质Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2、心肌细胞JNK1／2表达增多。氯沙坦治疗能显著降低大鼠收缩压，降低心脏体重比值，并且使心肌间质Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2、心肌细胞JNK1／2表达减少。结论两肾一夹型高血压大鼠重构心肌中MMP-2、Ⅲ型胶原、JNK1／2表达升高。氯沙坦能有效逆转心肌肥厚或心室重构，这一效应与其降低心肌中高表达的MMP-2，Ⅲ型胶原、JNK1／2有关。     

Caveolae在CGRP保护人脐静脉内皮细胞中的作用及机制

目的探讨Caveolae对降钙素基因相关肽(CGRP)抑制过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤作用的影响及其机制。方法体外培养HUVECs,分别用CGRP和/或H2O2处理细胞,光学显微镜观察细胞形态学和密度的变化;流式细胞术观察细胞的增殖和周期分布;β-环糊精(β-CD)用于破坏caveolae结构;Western-blot检测caveolin-1表达。结果与正常组比较,CGRP组细胞密度增加,S期细胞数明显增多,H2O2组细胞密度降低,S期细胞数明显减少;CGRP预孵育细胞能抵抗H2O2引起的细胞数目减少;β-CD剥夺胆固醇,破坏caveolae结构,HUVECs形态学发生改变,但CGRP诱导的细胞密度和细胞增殖进一步提升,恢复胆固醇后,该作用被取消。与对照组比较,CGRP组细胞caveolin-1表达水平降低(P<0.05);H2O2组细胞caveolin-1水平上升(P<0.05),给予CGRP预孵育后,能显著逆转H2O2诱导的caveolin-1表达(P<0.05);β-CD破坏caveolae结构后,增强CGRP下调HUVECs caveolin-1表达的作用(P<0.05),增加胆固醇Caveolae结构有所恢复且该作用被削弱。结论 Caveolae结构完整性对CGRP保护H2O2损伤HUVECs有一定影响,破坏caveolae结构能增强CGRP对H2O2损伤的HUVECs的增殖作用,其机制可能与增强CGRP下调氧化应激导致的caveolin-1的表达有关。     

血管内皮细胞来源的主要酶类及其功能

血管内皮细胞不仅仅在血管与血液中间起屏障作用,而且还有分泌功能,其功能紊乱是导致血管功能和结构改变的重要因素。目前,人们对血管内皮细胞所分泌的酶研究比较清楚的主要包括一氧化氮合酶(NOS),血管紧张素转换酶(ACE),还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NADPH)和环氧合酶(COX)等。这些酶分泌失调不同程度地影响血管功能,进而导致心血管疾病的发生和发展。     

肾性高血压大鼠血浆中降钙素基因相关肽与血管紧张素Ⅱ浓度及肾素活性的变化

降钙素基因相关肽与肾素－血管紧张素系统均参与血压的调节。在两肾一夹型肾性高血压大鼠模型，观察大鼠血浆中的降钙素基因相关肽、血管紧张素Ⅱ浓度及肾素活性的水平，以及用氯沙坦或培哚普利干预后这些活性肽在血浆中的变化，进一步分析这些血管活性肽在该模型的变化机制。研究显示，高血压组血浆中降钙素基因相关肽的浓度高于对照组，而血管紧张素Ⅱ与对照组相比无显著差异。用氯沙坦和培哚普利治疗6周后，血浆中肾素活性和血管紧张素Ⅱ及降钙素基因相关肽水平均升高。本研究发现在肾性高血压中期，循环中肾素－血管紧张素系统对血压的影响已不是主要因素，降钙素基因相关肽的释放增加可能是血压升高的代偿作用。应用氯沙坦和培哚普利后可增加血浆中血管紧张素Ⅱ浓度和肾素活性，同时也增加降钙素基因相关肽的合成与释放，这可能对其降压起一定的作用。     

载脂蛋白E基因缺陷对小鼠主动脉壁caveolin-1表达的影响

目的探讨高脂喂养的C57BL／6J小鼠和普饲喂养的apoE基因缺陷(apoE-／-)小鼠(品系为C57BL／6J)caveolin-1表达的差异。方法取apoE-／-小鼠作为研究对象，以普饲和高脂喂养的C57BL／6J小鼠为对照组，测定各组小鼠血脂和主动脉壁斑块的变化，Western—blotting检测caveolin-1在主动脉的表达。结果普饲喂养的apoE-／-组和高脂喂养的C57BL／6J组血脂水平较普饲喂养的C57BL／6J组明显升高；普饲喂养的apoE-／-组的主动脉形成明显的斑块，高脂喂养C57BL／6J组没有形成斑块，但血管壁平滑肌细胞出现增殖，普饲喂养的C57BL／6J组未见明显变化。Wester—blotting检测显示普饲喂养的apoE-／-小鼠和高脂喂养的C57BL／6J小鼠caveolin-1的表达与普饲喂养的C57BL／6J小鼠比较明显减弱。结论血管壁caveolin-1的表达下调可能是apoE-／-小鼠动脉粥样硬化形成的重要原因。     

高表达受体活性修饰蛋白1对血管紧张素Ⅱ和降钙素基因相关肽诱导的A10细胞降钙素受体样受体膜分布的影响

目的探索受体活性修饰蛋白1(RAMP1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和(或)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导的降钙素受体样受体(CRLR)在血管平滑肌细胞(VSMC)的表达和分布的影响,进一步揭示CGRP抑制VSMC增殖的机制。方法 通过酶切、连接、转化等方法构建pCDNA3.1(+)-RAMP1真核表达载体并稳定转染至鼠源性血管平滑肌细胞株A10中,获得稳定高表达RAMP1的细胞系。无转染细胞、转染空载体〔pCDNA3.1(+)〕细胞和RAMP1高表达组细胞〔pCDNA3.1(+)-RAMP1〕分别用AngⅡ100 nmo.l L-1、CGRP 100 nmo.l L-1和CGRP+AngⅡ处理24 h,用MTT法检测细胞存活;逆转录PCR、Western印迹和免疫荧光法分别检测CRLR mRNA含量、蛋白表达及细胞膜分布。结果 单纯转染空质粒或RAMP1对细胞增殖无明显影响。AngⅡ处理对3种细胞存活的影响无显著差异。pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞经CGRP处理24 h后,细胞存活明显高于其他两组细胞(P<0.05);经CGRP+AngⅡ处理,细胞存活明显低于其他两组(P<0.05)。AngⅡ,CGRP和CGRP+AngⅡ处理对3种细胞CRLR mRNA表达无明显影响,但CGRP处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显高于其他两种细胞(P<0.05),而CGRP+AngⅡ处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显低于其他两种细胞(P<0.05)。免疫荧光结果显示,经无血清或CGRP处理后,无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞中的RAMP1和CRLR主要分布在胞浆区域;经AngⅡ或CGPR+AngⅡ处理后,pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中RAMP1和CRLR在细胞膜上的分布多于无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞。结论 高表达RAMP1能增强CGRP抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖,其机制可能是通过RAMP1增加CRLR的膜分布,从而增强CGRP受体对CGRP的敏感性有关。     

apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖

背景：结合课题组以往研究成果,提出caveolae可能参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖的假设。 目的：实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。 方法：采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成。 结果与结论：①caveolae结构破坏剂β-环糊精(5 mmol/L,25 h)可明显增强apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖。②apelin-13(0,1,2,4,8 µmol/L)刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1的表达下调,在1 µmol/L时下调明显。③β-环糊精        (5 mmol/L)破坏caveolae后,可使apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强。④对照组(体积分数为0.1%胎牛血清孵育)及处理组(apelin-13刺激)caveolin-1与PI3K及ERK1/2均有复合物形成,在apelin-13刺激的情况caveolin-1-PI3K复合物减少、caveolin-1-ERK1/2复合物减少,即apelin-13可能促进caveolin-1与PI3K及ERK1/2解离。结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用。