bcr-abl P210和abl基因实时荧光定量PCR检测共用质粒标准品的制备及应用

 目的 建立一个荧光实时定量PCR（RQ-PCR）共用质粒标准品,用于同时检测bcr-abl P210白血病融合基因和abl内参基因。方法 分离K562细胞RNA,反转录为cDNA,以此为模板,设计引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回收,T-A载体克隆后,转化JM109工程菌,抽提质粒、测序、测定拷贝／μl,冻存备用。以RQ-PCR和定性巢式PCR进行验证,检测23例CML患者的骨髓标本,并同bcr-abl基因荧光原位杂交（FISH）结果比较。结果 获得了预期的模板质粒,以欧洲抗癌协会推荐的引物探针RQ-PCR检测bcr-abl P210和abl基因,浓度相同时,Ct值相同;反复检测日内差和日间差均<5 %。23例标本按FISH结果≥10%（n=8）、0.5 %～10 %（n=6）和阴性（n=9）分组,RQ-PCR结果分为0.492±0.263、0.023±0.033和（4.33±3.84）×10-4;FISH阴性组和其余两组间P值均＜0.001,三组间P值均＜0.05。结论 该研究建立了bcr-abl P210基因和abl基因共用的质粒标准品,定量准确,性质稳定,能简化操作,满足临床检测和科研的要求。     

建立表达增强型绿荧光蛋白的小鼠多药耐药白血病模型

目的建立增强型绿荧光蛋白(EGFP)基因标记的小鼠多药耐药白血病模型。方法以磷酸钙沉淀法将pLNG蛳EGFP质粒导入ΦNX蛳E包装细胞,用脂质体转染的方法获得高滴度的EGFP病毒,并转导入小鼠多药耐药白血病细胞;采用悬浮细胞培养观察该细胞的生长规律;流式细胞术分析细胞周期分布;RT蛳PCR方法检测mdr1a基因表达;体内接种观察白血病发病情况并比较其耐药性的变化。结果将pLNG蛳EGFP质粒导入ΦNX蛳E包装细胞后,收集细胞培养上清,病毒滴度为(4.5±3.4)×106CFU/mL。病毒转染后的小鼠多药耐药白血病细胞P388/VCR蛳G能稳定地表达绿色荧光。与P388/VCR细胞相比,P388/VCR蛳G细胞倍增时间、周期分析无明显差异;RT蛳PCR检测mdr1a基因的结果为:P388/S蛳G细胞阴性,P388/VCR蛳G细胞阳性。P388/VCR蛳G细胞在DBA小鼠体内也具有耐药性。所有接种P388/VCR蛳G细胞的DBA小鼠均死于腹水型白血病。结论建立了在体内稳定表达EGFP的小鼠多药耐药白血病模型,为研究多药耐药提供一种新的工具。     

eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用

目的〖HT5"SS〗： 以携带绿色荧光蛋白基因（eGFP）的重组逆转录病毒（RV）标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 制备高滴度eGFPRV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP＋的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效。〖HT5W〗结果 〖HT5"SS〗： eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP＋率>99.2%。P388eGFP细胞体外传代3个月后eGFP＋率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)% (n=3)。eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性。多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP＋细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eGFP＋细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域。     

广州市某医院内成蚊体内病毒监测及控制效果分析

目的 医疗机构人员密度高,有必要建立监测和控制多种蚊媒传染病传播的方案。方法 在广州市某三甲医院部分建筑内以诱蚊灯法监测成蚊种类和密度,提取成蚊核酸,以多重定量PCR检测登革热、乙型脑炎等多种DNA和RNA病毒,根据检测结果以常规措施或额外措施灭蚊。结果 2019年5—11月医院共收治162例登革热患者,未发生院内感染。在30个蚊虫监测点共捕获成蚊14批次共4 881只,其中库蚊3 341只（68.45%）,伊蚊725只（14.85%）及其他815只（16.70%）。发现特定区域成蚊体内Ⅰ型登革热病毒和单纯疱疹病毒各1次阳性,采取额外灭蚊措施,无人员出现感染。结论 通过定期捕蚊和定量PCR检测成蚊体内多种蚊媒病毒,可调整灭蚊措施,防控院内蚊媒传染病的发生。     

右美托咪定对体外循环手术患者的肺保护作用

目的：探讨右美托咪定在体外循环手术中对肺的保护作用。方法选取2013年1月至2015年11月在我院心胸外科择期全麻下行心脏瓣膜置换术的患者86例,随机分为观察组和对照组各43例。两组患者均采用相同的麻醉方法,在麻醉开始诱导前10 min,观察组在对照组基础上,静脉持续泵入负荷剂量右美托咪定0.8μg/kg,后以0.6μg/(kg·h)的速度维持至术毕。分别对麻醉诱导前(T0)、CPB前(T1)、术毕关胸后5 min (T2)、术后12 h (T3)、术后48 h (T4)采集两组患者的动脉血4 mL进行血气分析并计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO2)、氧合指数(OI)、呼吸指数(RI),同时测定血清中SP-A、TNF-α、IL-6的水平。结果两组患者的性别、年龄、体重、手术类型、体外循环时间、主动脉阻断时间等方面比较差异均无统计学意义(P>0.05);观察组患者术后机械通气时间和ICU停留时间低于对照组(P<0.05)。两组患者各时间点与T0比,T2、T3时AaDO2、RI均升高(P<0.05),T1、T2时OI均下降(P<0.05),T4时差异无统计学意义(P>0.05),观察组AaDO2、RI在T2、T3时低于对照组(P<0.05),观察组的OI在T2、T3时高于对照组(P<0.05)。两组患者各时间点与T0比,T1时SP-A、TNF-α、IL-6差异无统计学意义(P>0.05),T2、T3时SP-A、TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.05),观察组SP-A、TNF-α、IL-6在T2、T3时低于对照组(P<0.05)。结论体外循环手术中给予右美托咪定进行药物干预,能够有效抑制炎症反应,改善患者的肺功能,降低急性肺损伤的发生率,加快心脏手术患者术后转归。     

人细胞增殖相关激酶plk3基因逆转录病毒载体的构建及对细胞增殖的影响

目的构建人细胞增殖相关激酶基因plk3的逆转录病毒载体(RV),观察该基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法将plk3基因亚克隆至pMSCV-puroR载体中,经酶切和测序鉴定,制备高滴度的RV,以流动感染法高效感染,半固体集落培养法测定基因导入率。用嘌呤霉素筛选后,获得K562-plk3-puroR和HL60-plk3-puroR细胞。以野生型细胞和导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞作为对照,用PCR鉴定基因的导入,并测定细胞周期及凋亡率等,研究plk3基因导入对细胞的影响。结果获得pMSCV-plk3-puroR质粒并经酶切和测序证实。对K562和HL60细胞的基因导入率,分别达82.3%±3.70%和62.9%±4.94%(n=3)。经嘌呤霉素筛选后,转基因细胞的阳性率>99%。K562-plk3-pu-roR和HL-60-plk3-puroR转基因细胞的增殖曲线比对照细胞降低(P<0.01);而导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞的增殖曲线与野生型细胞相比较无显著差异。与K562细胞相比较,常规培养时,处于G0~G1期的K562-plk3-puroR细胞增多[(49.7±3.38)%vs(43.9±2.34)%,P=0.03]。以无血清培养基培养10h后,进入S期的K562-plk3-puroR细胞减少[(43.6±3.74)%vs(54.5±1.52)%,P=0.02],凋亡率降低[(1.3±0.31)%vs(3.4±0.37)%,P=0.01]。结论构建了plk3基因的逆转录病毒载体,发现plk3基因的导入可延缓细胞增殖,并抑制细胞进入增殖周期。     

提高手术安全核查正确实施率的品管圈实践

目的开展品管圈活动,提高手术安全核查正确实施率。方法由9人组成品管圈小组,通过实施品管圈的活动步骤,分析影响手术安全核查正确实施的因素,制订并实施相应的整改措施。结果实施品管圈活动后手术安全核查正确实施率提高,差异有统计学意义(P0.01);实施品管圈活动后小组内成员对品管圈工具应用、团队精神、沟通协调能力、活动信心、责任心以及荣誉感提高。结论开展品管圈活动有效提高了外科手术安全核查正确实施率,提升医护团队协作意识,提高护理人员的管理能力。     

模拟教学中单纯间断缝合的学习曲线的研究

目的：探索医学生单纯间断缝合的学习曲线,帮助指导临床教学。方法：6名学生每天进行6组单纯间断缝合训练(每组10针),共持续20天。从缝合速度和缝合质量两方面评价学习效果。结论：进行30组训练后学生的缝合速度和缝合质量即可达到较为满意的水平。如需进一步提速,至少需要75组训练。     

医学教育中的双语教学刍议

所谓双语教学(bilingual education)，就是在教学过程中，使用两种语言进行课堂活动。双语教学的概念源自美国。1968年，美国国会通过关于双语教育的法案，目的是帮助不同母语的孩子掌握英语，     

血栓性血小板减少性紫癜的临床分析:附17例报告

血栓性血小板减少性紫癜(TTP)是一种少见的微血管病变,起病急骤,病情复杂,误诊率高,早期诊断困难,死亡率高.现就我院2002年5月～2007年2月收治的17例患者分析如下.