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目的 构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化.以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果 所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白。结论 成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。 相似文献
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目的研究紫杉醇(PA)体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990,加入低浓度的PA,用流式细胞仪分别检测加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测Survivin mRNA和蛋白的表达。结果SW1990细胞给予低浓度的PA后,加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率分别为(2.59±0.35)%、(14.75±1.29)%、(22.65±2.80)%;其Survivin mRNA的表达则分别比加药前提高了1.1倍和2.9倍;Survivin蛋白的表达分别增加了1.3倍和3.6倍。结论应用PA化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin表达的增加,抵抗化疗诱导的细胞凋亡。 相似文献
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为了研究各型病毒性肝炎患者血浆可溶型GMP-140的含量变化,采用ELISA法检测了119例病毒性肝炎患者血浆GMP-140含量。结果,各型肝炎患者血浆GMP-140含量均较正常对照组增高,其中急性肝炎、慢性肝炎(慢肝)重度、慢性重型肝炎(慢重肝)与正常对照组比较有显著性差异;慢重肝、慢肝重度又较稳性肝炎和慢肝轻、中度显著升高;预后不同的慢重肝也存在显著性差异,好转组高于恶化组。动态观察表明,急性 相似文献
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目的:探讨褪黑素(MT)能否通过抑制铁死亡缓解布比卡因脊髓神经毒性。方法:将36只成年雄性SPF级SD大鼠随机分为3组:生理盐水组(N组)、布比卡因组(B组)、褪黑素与布比卡因共处理组(BM组),各组于0 d、1 d、2 d、3 d测定最大抗伤害效应百分比(%MPE)、BBB评分进行行为学评估,并于给药后3 d取材,取腰膨大处脊髓组织进行HE、尼氏染色观察各组脊髓组织神经元病理损伤情况和神经元存活数量,透射电镜观察线粒体超微结构改变,多重免疫荧光检测活性氧(ROS)表达水平,ELISA检测谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、铁含量,western blotting检测脊髓组织GPX4、4HNE的蛋白表达水平。结果:与N组比较,B组%MPE升高,BBB评分降低,脊髓组织空泡增多,存活神经元数量减少,脊髓组织损伤程度较重,线粒体缩小,双层膜密度增加,线粒体嵴消失或断裂,ROS、MDA、铁含量增多,GSH降低,4HNE蛋白表达升高,GPX4蛋白表达降低(均P<0.05)。与B组比较,BM组%MPE降低,BBB评分升高,脊髓组织损伤较轻,脊髓组织空泡减少,存活神经元增多,线粒体损伤改善... 相似文献