小剂量奥沙利铂抗肿瘤血管生成作用的体内实验研究

目的观察小剂量奥沙利铂(L-OHP)对小鼠移植瘤生长的抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD)的影响。方法建立肝癌H22小鼠模型后,将小鼠随机分组4组,5%葡萄糖20 mL/kg阴性对照组、环磷酰胺20 mg/kg阳性对照组、奥沙利铂0.75 mg/kg和1.5 mg/kg组,腹腔等容积注射给药,连续10 d,第11天处死小鼠,计算瘤重抑制率,用免疫组化方法测定肿瘤组织中的VEGF和CD34的表达。结果1.5 mg/kg奥沙利铂组的瘤重明显低于阴性对照组(P<0.01),而且肿瘤组织中的VEGF和CD34的表达也明显低于阴性对照组(P<0.01)。结论小剂量奥沙利铂对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用明显,能抑制肿瘤组织中VEGF和MVD的表达;小剂量奥沙利铂在体内可能具有抑制肿瘤组织血管生成的作用。     

ERCC1 mRNA表达与结直肠癌标准方案化疗临床预后的相关性研究

目的:探讨结直肠癌石蜡组织中切除修复交叉互补基因 (excision repair cross-complementing group 1,ERCC1) mRNA表达水平与接受标准方案化疗的结直肠癌患者临床病理的关系以及其预后意义。方法:采用实时荧光定量 RT-PCR检测福尔马林固定－石蜡包埋的结直肠癌组织中DNA修复基因ERCC1 mRNA的表达水平,并比较其表达水平与接受标准方案化疗的结直肠癌患者的临床病理及生存期之间的关系。结果:ERCC1 mRNA表达与结直肠癌临床病理特征无相关性(P＞0.05)。将ERCC1 mRNA在96例大肠癌患者中的表达量（相对于β-actin）分为低表达组与中高表达组（≤5.21为低表达组,＞5.21为中高表达组）,样本总生存期呈正态分布,中高表达组平均总生存期为68.52月（95%CI:63.06-76.06）,低表达组平均总生存期为56.63月（95%CI:44.45-68.80）,从生存曲线上看中高表达组患者总生存时间明显长于低表达组,两者有统计学差异(P=0.049)。样本无进展生存期呈偏态分布,中高表达组的中位生存时间30.98月（95%CI:0-18.65）,低表达组的中位生存时间8.48月（95%CI:6.37-10.60）,两者之间差别无统计学意义（P=0.575）。Cox多因素回归分析发现性别（P=0.023）、分期（P＜0.001）、以肠梗阻或肠穿孔起病（P=0.046）是患者总生存期的独立影响因素,年龄（P=0.043）、分期（P＜0.001）、脉管侵犯（P=0.002）是患者无进展生存期的独立影响因素。结论:ERCC1 mRNA的表达水平可能是使用标准方案化疗的结直肠癌患者预后的影响因素,性别、分期、以肠梗阻或肠穿孔起病、年龄、脉管侵犯是影响结直肠患者预后的独立影响因素。     

恶性胸腔和腹腔积液中ERCC1和BRCA1 mRNA的表达水平与顺铂敏感性的关系

目的:本研究旨在探讨肿瘤特殊转移灶恶性胸腔/腹腔积液中核苷酸切除修复交叉互补组1(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)基因和乳腺癌易感基因1(breast cancer 1, BRCA1)的表达水平与顺铂体外药物敏感性之间的关系.方法:前瞻性收集46例Ⅳ期恶性肿瘤患者的恶性胸腔/腹腔积液,分离出肿瘤细胞后,采用体外药敏试验三磷酸腺苷生物荧光法检测(adenosine triphosphate-bioluminescence assay, ATP-TCA)法检测肿瘤细胞对顺铂的药物敏感性,实时荧光定量PCR检测ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平.结果: 在非小细胞肺癌患者的恶性胸腔/腹腔积液中,肿瘤细胞的ERCC1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关(P=0.001,r=0.685).非小细胞肺癌患者(P=0.014,r=0.541)和胃癌患者(P=0.002,r=0.625)恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的BRCA 1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关.ERCC1和BRCA1对顺铂药物敏感性的影响存在交互作用(所有患者P=0.010;胃癌患者P=0.027).结论:恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平与顺铂体外药物敏感性相关.联合检测ERCC1和BRCA1这2种基因较只采用其中一种基因在预测顺铂药物敏感性方面的价值更大.     

小剂量羟基喜树碱抗鼠H22移植瘤血管生成的体内实验研究

背景与目的：有研究提示某些化疗药物在小剂量应用时具有一定的抗血管生成作用,因此本研究旨在探讨小剂量羟基喜树碱（hydroxycamptothecin, HCPT）对小鼠H22细胞移植瘤的生长抑制作用及对血管生成的抑制作用。方法：建立小鼠皮下肝癌H22模型; 以环磷酰胺（cyclophosphamide, CTX）为阳性对照,0.9%氯化钠溶液为阴性对照,HCPT（0.2和0.4 mg/kg）连续腹腔给药10 d,观察用药后移植肿瘤生长情况,计算抑瘤率; 免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达及微血管密度（microvessel density, MVD）。结果：HCPT抑瘤作用明显,0.2和0.4 mg/kg治疗组的抑瘤率分别为23.53%和43.25%,与0.9%氯化钠溶液对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：小剂量HCPT对小鼠H22移植瘤具有一定的生长抑制作用;同时可明显抑制肿瘤组织中VEGF的表达水平和MVD,推测其抗肿瘤作用可能与对血管生成抑制作用有关。     

重楼复方与氟尿嘧啶对胃癌细胞的体外协同作用研究

目的：探讨重楼复方（ChongLouFuFang,CLFF）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对胃癌细胞有无体外协同作用及CLFF对胸苷酸合成酶（thymidylatesynthase,TS）基因表达和细胞凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖能力;基于中位效应原则的联合指数法评估CLFF与5一FU对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的相互作用;Annexin-V—FITC和PT双染色法检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR法测定佟和B-actinmRNA表达。结果：CLFF在两株细胞中与5一FU均产生较好的协同细胞毒性,两药合用亦以协同方式诱导肿瘤细胞凋亡;CLFF作用24h后,SGC-7901和BGC-823细胞中TsmRNA表达水平分别为对照组的（0．30±0．03）倍和（0．46±0．03）倍,用药前后两株细胞中TSmRNA表达水平具有统计学差异。结论：CLFF与5-Fu有较好的协同抗肿瘤作用,可能与二者协同诱导肿瘤细胞凋亡以及CLFF可下凋胸苷酸合成酶基因表达有关。     

ERCC1 mRNA表达与恶性胸腹腔积液肿瘤细胞对顺铂体外药敏相关性的研究

目的：分析切除修复交叉互补基因l（excision repair egoS8 complementafion group 1,ERCC1）在恶性胸腹腔积液肿瘤细胞中的表达,探讨ERCC1 mRNA表达与患者顺铂耐药的相关性.方法：收集26例经病理确诊的恶性胸腹腔积液,分离原代肿瘤细胞,CCK8体外药物敏感性试验检测顺铂对原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用,荧光定量RT-PCR检测细胞中药物疗效相关基因ERCC1的相对表达水平.结果：ERCCI mRNA在恶性胸腹腔积液原代肿瘤细胞中的表达水平与临床特征无相关性,但与顺铂敏感件呈负相关,低表达者对顺铂敏感性高（P=0.01）.结论：ERCC1 mRNA表达水平可以作为预测转移性胸腹腔积液患者铂类药物化疗疗效的指标之一.     

白头翁醇提物抑制血管生成的体外实验研究

目的 探讨白头翁醇提物对体外血管生成的抑制作用及其可能机制。方法 采用MTT法观察白头翁醇提物对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响;通过Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察白头翁醇提物对HUVEC迁移、形成血管能力的影响;采用流式细胞仪检测白头翁醇提物对HUVEC的凋亡率及细胞周期的影响。结果 2～8μg／ml的白头翁醇提物作用48h对HUVEC的增殖抑制率为21.6％～72.0％,对LoVo细胞的增殖抑制率为13.2％～22.9％;体外小管形成实验发现,2～8μg／ml白头翁醇提物作用24h,HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0001）。经2～8μg／ml白头翁醇提物处理12h,HUVEC迁移数明显少于对照组（P＜0001）。2、4、8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞48h后,其凋亡率分别为952％、1864％和2007％,对照组为6.25％。8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞24h后,细胞周期停滞在G2／M期。结论 白头翁醇提物在体外能有效抑制血管生成,其机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,抑制HUVEC有丝分裂有关。     

Survivin、CTNNB1和 hTERT mRNA 水平与胃癌药物敏感度的关系

目的：初步探讨 Survivin、CTNNB1、hTERT 表达与胃癌药物敏感度的关系。方法：采用三维立体组织培养药物反应性试验检测20例胃癌组织多西紫杉醇、异长春花碱、伊立替康和奥沙利铂四种药物的敏感度, RT －PCR 方法检测胃癌组织 Survivin、CTNNB1和 hTERT mRNA 表达水平。结果：异长春花碱、伊立替康和奥沙利铂三种药物最佳检测浓度分别为20μg／ml、80μg／ml 和40μg／ml。CTNNB1 mRNA 表达用于判断多西紫杉醇和异长春花碱敏感度的准确率为70％、Survivin mRNA 表达用于判断奥沙利铂敏感度的准确率为70％。结论：CTNNB1表达水平和多西紫杉醇与异长春花碱敏感度相关,Survivin 表达水平与奥沙利铂敏感度有关。     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系的建立及生物学特性研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导的人肺腺癌细胞A549耐药细胞系A549/Taxol生物学特性和耐药机制.方法 采用Taxol浓度递增间歇诱导法,建立A549/Taxol细胞系,MTT法测定耐药性,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室法检测细胞侵袭力,荧光定量RTPCR检测乳腺癌易感基因1(BRCA1)、受体相关蛋白80(RAP80)、微管相关蛋白T(Tau)、多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达水平.结果 A549/Taxol细胞对Taxol及多西紫杉醇均有耐药性,对前者耐药性更强(RI=48.36 vs.27.21)(P＜0.01).与A549细胞相比,A549/Taxol细胞G1期的细胞比例增加[(50.56±0.25)％ vs.(57.75±0.16)％],而S期细胞比例减少[(37.85±1.48)％ vs.(30.21±1.87)％],细胞凋亡率增加幅度减小[(56.43±1.12)％ vs.(9.23±1.18)％],细胞侵袭力增强[(38.6±9.97)个vs.(116.8±21.73)个],BRCA1、RAP80 mRNA表达降低,而MDR1、Tau mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论 成功建立Taxol耐药细胞系A549/Taxol,有助于进一步研究肺癌耐药机制.     

连翘醇提物对恶性胸腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用

目的 研究中药连翘醇提物对恶性胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用. 方法 收集25例经病理确诊的恶性胸腹腔积液并分离原代肿瘤细胞,用CCK8法检测原代肿瘤细胞对连翘醇提物及化疗药的药物敏感性,提取细胞RNA,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测连翘醇提物对凋亡相关蛋白基因Survivin mRNA、Bcl-2 mRNA表达的作用. 结果 连翘醇提物对4种细胞系(胃癌细胞株BGC-823、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株A549和大肠癌细胞株LOVO )的半数抑制浓度(IC50)平均值为 191.88 μg/ml,对25例恶性胸腹腔积液中原代肿瘤细胞IC50平均值为406.13 μg/ml,两者无显著差异(P＞0.05).连翘醇提物对大肠癌、胃癌、肺癌及其他消化道肿瘤来源的胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用无明显差异(P＞0.05).连翘醇提物对接受化疗患者的胸腹腔积液中原代肿瘤细胞的IC50值为543.13 μg/ml,显著高于未接受化疗患者,年龄、性别以及体腔积液类型组间IC50值均无统计学差异.7例对连翘醇提物耐药的原代肿瘤细胞对多西紫杉醇、氟尿嘧啶、顺铂存在交叉耐药,而对化疗药物耐药的原代肿瘤细胞对连翘醇提物无交叉耐药.连翘醇提物对部分细胞系及原代细胞中凋亡相关蛋白Survivin mRNA和Bcl-2 mRNA有下调作用(P＜0.05). 结论 中药连翘醇提物对恶性胸腹腔积液中原代肿瘤细胞,尤其是对化疗药物耐药的原代肿瘤细胞仍有一定的抗肿瘤作用.